1种以上的HLA基因用引物制造技术

本发明专利技术提供：能够高度包罗HLA

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】1种以上的HLA基因用引物


[0001]本专利技术涉及1种以上的HLA基因用引物等。

技术介绍

[0002]人白细胞抗原(Human Leukocyte Antigen；HLA)是对免疫应答性进行控制的重要分子，与各种疾病易感性相关。HLA大致分为I类分子和II类分子。HLAI类分子除了具有向T细胞提呈抗原肽的功能外，还作为自然杀伤细胞、T细胞、髓样细胞上的免疫受体的配体发挥作用。
[0003]HLAI类分子存在经典(Ia类)分子和非经典(Ib类)分子这两个组。HLA Ia类分子HLA
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A、HLA
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B、HLA
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C在几乎所有的人细胞中都有表达。另一方面，对于HLA Ib类分子HLA
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E、HLA
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F、HLA
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G，表达的组织的分布往往是有限的，功能也不限于抗原肽的提呈，涉及多方面。例如，HLA
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G分子主要在胎盘中表达，与HLA Ia类分子一样，提呈抗原肽，接受提呈的受体是自然杀伤细胞的受体，调节自然杀伤细胞的功能。自然杀伤细胞在癌症免疫疗法中至关重要。
[0004]HLAI类基因簇彼此之间序列同源性高，纵列在6号染色体短臂上。HLA Ia类基因具有非常高的多态性，而HLA Ib类基因的多态性比较缺乏。另一方面，由于HLA基因区域整体高度富于多态性，因此与一般的基因组区域相比，基因间区域也富于多态性。因此，仅通过人基因组参考序列(基因组组装版本hg38)，难以设计能够包罗地扩增HLA等位基因的基因全长的PCR引物。
[0005]HLA等位基因由基因全长的多态性组合限定。桑格(Sanger)型测序器和下一代测序器由于可确定的序列长度较短，所以不能一次对基因全长进行测序。特别是HLAIb类基因多态性比较缺乏，因此在确定的序列内存在多态位点的概率低，所以无法对来自母亲和来自父亲的HLA等位基因进行定相(衰落)(非专利文献1)。此外，HLA Ib类基因由于没有确立的HLA等位基因分型方法，试剂盒没有市售，因此关于分型结果的报告事例很少。因此，登记在IMGT/HLA数据库中HLA Ib类基因HLA等位基因信息是有限的。
[0006]Nilsson等人报道了能够扩增也包含非翻译区域在内的HLA
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G基因全长的1种引物组(Primer set)(非专利文献2)。
[0007]Alizadeh等人报道了以HLA
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F基因为靶标的长距离PCR(long range PCR)引物组，将引物设计在非翻译区域(非专利文献3)。
[0008]Wang等人报道了以HLA
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E基因为靶标的长距离PCR引物组，但不能扩增包含非翻译区域的HLA
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E基因全长(非专利文献4)。Lucas等人报道了使用了长距离PCR的HLA
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E基因全长的测序结果，在非翻译区域设计引物，但不能扩增包含影响基因表达的非翻译区域的区域(非专利文献5)。
[0009]现有技术文献
[0010]非专利文献
[0011]非专利文献1：Suzuki S et al.，Front.Immunol.2018Oct 4；9：2294.
[0012]非专利文献2：Nilsson LL et al.，HLA.2018；92：144
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153.
[0013]非专利文献3：Alizadeh M et al.，Hum Immunol.2020；81(5)：202
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205.
[0014]非专利文献4：Wang S
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X et al.，HLA.2017；89：327
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330.
[0015]非专利文献5：Lucas JAM et al.，HLA.2020；95：561
‑
572.

技术实现思路

[0016]专利技术所解决的技术问题
[0017]对于HLA
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E基因和HLA
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F基因，没有报道能够扩增包含非翻译区域的基因全长的引物。
[0018]对于现有技术中公开的HLA
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G基因引物，如实施例所示，通过使用全基因组测序数据的分析进行了研究，结果确认了根据样品的不同，在引物结合位点存在错配，这表明未观察到PCR扩增或者很可能影响均匀的扩增。
[0019]此外，在现有技术中，通过使用以HLA Ib类基因的翻译区域为中心而设计的一对引物的PCR，分析了HLA Ib类基因的序列，但在这样的方法中，无法分析对基因表达重要的非翻译区域的区域中的多态性。
[0020]因此，本专利技术的目的在于：提供1种以上的能够高度包罗HLA
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E、HLA
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F或HLA
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G基因的HLA等位基因而进行检测或扩增的引物。本专利技术的目的还在于：提供1种以上的引物，所述引物能够高度包罗所述基因的HLA等位基因而进行检测或扩增，并且能够扩增包含所述基因的非翻译区域的基因全长。
[0021]解决问题的技术手段
[0022]本专利技术人等进行了深入研究，结果发现了1种以上的HLA基因用引物，该引物能够高度包罗HLA
‑
E、HLA
‑
F或HLA
‑
G基因的HLA等位基因而进行检测或扩增，并且还能够扩增包含所述基因的非翻译区域的基因全长。实际上，与现有技术不同，由本专利技术人发现的1种以上的HLA基因用引物实质上被证实能够高度包罗包含推定为新HLA等位基因的多个HLA等位基因组而进行扩增(表6)。基于这些发现，本专利技术人成功地提供了1种以上的HLA基因用引物，从而完成了本专利技术。
[0023]即，本专利技术如下。
[0024][1]一种引物，其是选自下述(1)～(3)中的1种以上的HLA基因用引物：
[0025](1)1种以上的HLA
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G基因用引物，其为(1a)包含SEQ ID NO.1的碱基序列或其互补碱基序列的第1引物和/或(1b)包含SEQ ID NO.3的碱基序列或其互补碱基序列的第2引物；
[0026](2)1种以上的HLA
‑
E基因用引物，其为(2a)包含SEQ ID NO.5的碱基序列或其互补碱基序列的第1引物和/或(2b)包含SEQ ID NO.7的碱基序列或其互补碱基序列的第2引物；
[0027](3)1种以上的HLA
‑
F基因用引物，其为(3a)包含SEQ ID NO.9的碱基序列或其互补碱基序列的第1引物和/或(3b)包含SEQ ID NO.11的碱基序列或其互补碱基序列的第2引物。
[0028][2]根据[1]的1种以上的HLA基因用引物，其中，所述1种以上的HLA基因用引物为选自下述(1
’
)～(3
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)中的HL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种引物，其是选自下述(1)～(3)中的1种以上的HLA基因用引物：(1)1种以上的HLA
‑
G基因用引物，其为(1a)包含SEQ ID NO.1的碱基序列或其互补碱基序列的第1引物和/或(1b)包含SEQ ID NO.3的碱基序列或其互补碱基序列的第2引物；(2)1种以上的HLA
‑
E基因用引物，其为(2a)包含SEQ ID NO.5的碱基序列或其互补碱基序列的第1引物和/或(2b)包含SEQ ID NO.7的碱基序列或其互补碱基序列的第2引物；(3)1种以上的HLA
‑
F基因用引物，其为(3a)包含SEQ ID NO.9的碱基序列或其互补碱基序列的第1引物和/或(3b)包含SEQ ID NO.11的碱基序列或其互补碱基序列的第2引物。2.根据权利要求1所述的1种以上的HLA基因用引物，其中，所述1种以上的HLA基因用引物为选自下述(1
’
)～(3
’
)中的HLA基因扩增用引物组：(1
’
)HLA
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G基因扩增用引物组，其包含：(1a)包含SEQ ID NO.1的碱基序列或其互补碱基序列的第1引物和(1b)包含SEQ ID NO.3的碱基序列或其互补碱基序列的第2引物；(2
’
)HLA
‑
E基因扩增用引物组，其包含：(2a)包含SEQ ID NO.5的碱基序列或其互补碱基序列的第1引物和(2b)包含SEQ ID NO.7的碱基序列或其互补碱基序列的第2引物；(3
’
)HLA
‑
F基因扩增用引物组，其包含：(3a)包含SEQ ID NO.9的碱基序列或其互补碱基序列的第1引物和(3b)包含SEQ ID NO.11的碱基序列或其互补碱基序列的第2引物。3.根据权利要求1或2所述的1种以上的HLA基因用引物，...

【专利技术属性】
技术研发人员：德永胜士，SS，
申请(专利权)人：合同会社予幸集团中央研究所，
类型：发明
国别省市：