一种高酸碱耐受的融合蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种融合蛋白PA

【技术实现步骤摘要】
一种高酸碱耐受的融合蛋白及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体涉及一种高酸碱耐受的融合蛋白及其制备方法和应用。
技术背景
[0002]各种细菌中已分离出几种对免疫球蛋白(Ig)具有固有亲和力的蛋白质。这些分子包括从金黄色葡萄球菌中提取的蛋白A，来自c群链球菌蛋白G；它们都含有55
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76个重复的氨基酸残基，能够介导Ig结合。蛋白A为金黄色葡萄球菌细胞壁的免疫球蛋白结合蛋白，它包含5个与免疫球；蛋白A除可以特异性的同IgG的Fc区域结合，还可以同IgG的Fab区域结合。蛋白G为链球菌细胞壁的免疫球蛋白结合蛋白，它包含3个与IgG特异性结构的串联的结构域。同样，蛋白G也具有部分结合Fab的CH1结构域的特性。
[0003]蛋白A、蛋白G是微生物来源的天然蛋白质，可以和哺乳动物的免疫球蛋白结合，蛋白G不仅与Fc区域结合，还与人类IgG1同型的CH1结构域结合。因此，与蛋白A相比，它具有更广泛的应用。蛋白质A、G在与荧光色素、酶或金颗粒偶联时保持其功能的能力，使它们成为ELISA、免疫组织化学、流式细胞术和电子显微镜中极有价值的检测试剂。
[0004]基于这些特性，蛋白A、蛋白G在纯化抗体、免疫沉淀、有效的去除或减少非特异性背景等领域具有巨大优势。蛋白A、蛋白G与不同的免疫球蛋白的结合能力并不一样，它们受到后者的来源及亚类的影响。市面上的单独的蛋白A或者蛋白G，无法满足对大部分种源的免疫球蛋白的结合，则造成纯化抗体的类型比较单一。若单独的蛋白A或者蛋白G代替二抗，广泛应用于免疫化学等领域则可能造成检测结果的稳定性降低。若应用于分子科研领域，则可能不完全去除某些实验结果背景，造成结果的误判。
[0005]公开号为CN102676562A、名称为《一种对抗体具有广谱吸附能力的融合蛋白制备方法及应用》的专利文献，公开了通过基因工程手段，将蛋白A和蛋白G的基因进行融合表达得到的融合蛋白，兼具蛋白A和蛋白G优点，具有可以与人不同亚类免疫球蛋白G选择性结合，对血液中白蛋白等非免疫球蛋白物质的非特异性吸附低的优势。

技术实现思路

[0006]针对上述存在的技术局限性，本专利技术提出了一种高酸碱耐受的融合蛋白及其制备方法和应用；其克服了
技术介绍
中提到的不足和缺陷。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
[0008]本专利技术的专利技术点是提供一种融合蛋白PA
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G，所述融合蛋白PA
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G融合了蛋白A和蛋白G的Ig优势结合域，融合蛋白PA
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G的氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示的序列，或与SEQ ID NO.1所示序列具有90％以上同源性且具有相同功能的序列。
[0009]SEQ ID NO.1所示氨基酸序列为：
[0010]AQHDEAQQNAFYQVLNMPNLNADQRNGFIQSLKDDPSQSANVLGE AQKLNDSQAPKADAQQNNFNKDQQSAFYEILNMPNLNEAQRNGFIQSLKDDPSQSTNVLGEAKKLNESQAPKADNNFNKEQQNAFYEILNMPNLNEEQ
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[0011]本专利技术的第二个专利技术点是提供了编码上述融合蛋白PA
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G的基因，所述编码基因的核苷酸序列为如SEQ ID NO.2所示的序列，或与SEQ ID NO.2所示序列具有90％以上同源性的序列。
[0012]SEQ ID NO.2所示核苷酸序列为：
[0013]gctcagcacgatgaagcgcagcagaacgcattctatcaagttctgaacatgccgaacctgaacgcagatcag cgtaatggctttatccagtctctgaaagacgatccgtctcagagcgctaacgtgctgggtgaggcacaaaaactgaacgactcccaggcgccgaaagccgacgcacaacagaataacttcaacaaggatcagcagtccgcattctacgagattctgaacatgccaaatctgaatgaagcacaacgtaacggtttcatccagagcctgaaagatgacccgtcccagtctaccaacgtcctgggcgaagcgaaaaaactgaacgaatcccaggcaccgaaagcagacaacaactttaacaaggaacagcagaacgcattctatgaaattctgaacatgccgaacctgaacgaagaacagcgcaacggttttatccagagcctgaaagatgatccgtctcagtctgcaaacctgctgtccgaggctaaaaaactgaatgaaagccaggctccgaaggctgacaacaagttcaacaaagaacagcagaacgcgttctatgaaatcctgcacctgccgaacctgaacgaagagcagcgtaacggttttattcagtctctgaaagatgacccgtctcagagcgctaacctgctggcggaggcgaagaaactgaatgacgcgcaggcgcctaaagcggataacaaattcaacaaagaacagcagaacgcattttatgaaatcctgcacctgccgaacctgacggaagaacagcgtaacggctttatccagtctctgaaagatgacccgtctgtgagcaaagaaatcctggctgaggcgaaaaaactgaacgacgctggtggtggtggttccggtggtggtggtagcggtggtggtggtagcgacacctataaactgatcctgaacggtaagactctgaaaggtgaaaccaccaccgaagcagttgatgccgcaacggcggaaaaagtcttcaaacagtacgctaacgacaacggtgtcgatggcgaatggacctatgacgacgcgaccaaaacctttaccgttaccgaaaaaccggaagtaattgatgcgagcgagct本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白PA
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G，其特征在于，所述融合蛋白PA
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G融合了蛋白A和蛋白G的Ig优势结合域，融合蛋白PA
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G的氨基酸序列为如SEQ ID NO.1所示的序列，或与SEQ ID NO.1所示序列具有90％以上同源性且具有相同功能的序列。2.编码权利要求1所述的融合蛋白PA
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G的基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列为如SEQ ID NO.2所示的序列，或与SEQ ID NO.2所示序列具有90％以上同源性的序列。3.一种重组表达载体，其特征在于，所述的重组表达载体中插入有权利要求2所述的基因。4.根据权利要求3所述一种重组表达载体，其特征在于，所述表达载体为pET系列载体，优选为pET
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32a表达质粒、pET
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26b表达质粒或pET
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28a表达质粒，最优选为pET
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28a表达质粒。5.一种重组表达融合蛋白PA
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G的重组菌株，其特征在于，由权利要求3或4所述的重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞得到的重组菌株。6.根据权利要求5所述的一种重组表达融合蛋白PA
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【专利技术属性】
技术研发人员：李乔斌，郭荣显，梁月兰，陆意，缪彩燕，任水英，周丽，付冬梅，李林，
申请(专利权)人：无锡中德伯尔生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：