降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法、抗体和细胞培养基技术

本申请公开了一种降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法、抗体和细胞培养基，培养方法包括将融合细胞接种至基础培养基中培养，培养过程中添加流加培养基和调节剂；由培养产物中分离得到抗体类蛋白；其中，所述调节剂包括Mn

【技术实现步骤摘要】
降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法、抗体和细胞培养基


[0001]本申请属于生物制药
，具体涉及一种降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法、抗体和细胞培养基。

技术介绍

[0002]电荷异质性是由于抗体分子中翻译后修饰及降解的发生导致其等电点或空间电荷分布等表面电荷特性发生了改变，进而导致电荷变体的生成。抗体中的诸多翻译后修饰和降解过程，如糖基化、C末端和N末端修饰、糖化、氧化、聚体、二硫键修饰等都可能引起抗体表面电荷特性的改变和电荷变体的生成。异质性的发生常常会引起抗体生物学活性、药代动力学、热稳定性、免疫原性等抗体结构和功能的改变，是抗体药物的一类关键质量属性。
[0003]在电荷异质方面蛋白的酸峰更容易引起蛋白功能活性的改变，而碱峰一般为C端赖氨酸的不完全剪切引起，这种变异通常不会对蛋白活性功能产生影响，因此在抗体生产中酸峰的控制尤为重要。现有技术中调控抗体酸峰的手段主要为降温，降温虽然能降低酸峰，但是会降低酶的活性，影响蛋白表达量，同时降温也会导致碱峰的上升，导致主峰可能并不会增加。

技术实现思路

[0004]本申请的目的在于提供一种降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法、抗体和细胞培养基，以解决现有技术中采用降温手段调控抗体酸峰，会降低酶的活性，影响蛋白表达量，同时降温也会导致碱峰的上升，导致主峰可能并不会增加。
[0005]为实现上述目的，本申请采用的一个技术方案是：
[0006]提供了一种降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法，包括：
[0007]将融合细胞接种至基础培养基中培养，培养过程中添加流加培养基和调节剂；
[0008]由培养产物中分离得到抗体类蛋白；
[0009]其中，所述调节剂包括Mn
2+
。
[0010]在一个或多个实施方式中，所述调节剂添加完成后，培养体系中Mn
2+
的摩尔浓度为20～30μM。
[0011]在一个或多个实施方式中，所述调节剂分别在培养的第3、4或5天和第5、6或7天分两次添加至培养体系中。
[0012]在一个或多个实施方式中，所述调节剂分别在培养的第4天和第6天分两次添加至培养体系中。
[0013]在一个或多个实施方式中，所述流加培养基分别在培养的第3、5、7天分三次添加至培养体系中。
[0014]在一个或多个实施方式中，所述调节剂为四水氯化锰溶液。
[0015]为实现上述目的，本申请采用的另一个技术方案是：
[0016]提供一种上述任一实施方式所述的培养方法培养得到的抗体。
[0017]在一个或多个实施方式中，所述抗体的酸峰比例小于15％，主峰比例大于67％。
[0018]为实现上述目的，本申请采用的又一个技术方案是：
[0019]提供一种细胞培养基，包括基础培养基、流加培养基和调节剂，所述调节剂包括Mn
2+
。
[0020]在一个或多个实施方式中，所述细胞培养基中Mn
2+
的摩尔浓度为20～30μM。
[0021]在一个或多个实施方式中，所述调节剂为四水氯化锰溶液。
[0022]区别于现有技术，本申请的有益效果是：
[0023]本申请的培养方法在细胞培养过程中添加包括锰离子的调节剂，能够有效降低抗体蛋白的酸峰比例，并且对碱峰影响较低，避免了常用蛋白酸碱峰调节方法降酸峰但碱峰上升，主峰没有增加的现象，从而有效避免了抗体的蛋白活性的改变，相对于现有培养方法，本申请培养方法得到的抗体的酸峰比例降低了29.2％，碱峰比例仅提高了4.5％；
[0024]本申请的培养方法无需改变工艺控制条件，对细胞生长和目标抗体产量无影响，也不会引起其他法规和安全方面的问题；
[0025]本申请的细胞培养基应用至融合细胞的培养中时，能够显著降低收获的抗体蛋白的酸峰比例，并且对蛋白碱峰比例无影响，从而有效避免了抗体的蛋白活性的改变。
附图说明
[0026]图1是本申请降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法一实施方式的流程示意图。
具体实施方式
[0027]以下将结合各实施方式对本申请进行详细描述。但该等实施方式并不限制本申请，本领域的普通技术人员根据该等实施方式所做出的结构、方法、或功能上的变换均包含在本申请的保护范围内。
[0028]电荷异质性是由于抗体分子中翻译后修饰及降解的发生导致其等电点或空间电荷分布等表面电荷特性发生了改变，进而导致电荷变体的生成。抗体电荷变体的来源众多，生成机制十分复杂。研究表明，抗体中的诸多翻译后修饰和降解过程，如糖基化、C末端和N末端修饰、糖化、氧化、聚体、二硫键修饰等，都可能引起抗体表面电荷特性的改变和电荷变体的生成。由于抗体在生产、存储及使用过程中往往伴随着多种翻译后修饰和降解的同时进行，共同影响着抗体的表面电荷特性，因此抗体的电荷异质性是这些翻译后修饰和降解的综合效应。
[0029]异质性的发生常常会引起抗体生物学活性、药代动力学、热稳定性、免疫原性等抗体结构和功能的改变，是抗体药物的一类关键质量属性。然而，电荷异质性的有效控制一直来都是抗体药物开发和生产过程中面临的难题。
[0030]如
技术介绍
中所述，在电荷异质方面蛋白的酸峰更容易引起蛋白功能活性的改变，而碱峰一般为C端赖氨酸的不完全剪切引起，这种变异通常不会对蛋白活性功能产生影响，因此在抗体生产中酸峰的控制尤为重要。现有技术中调控抗体酸峰的手段主要为降温，降温虽然能降低酸峰，但是会降低酶的活性，影响蛋白表达量，同时降温也会导致碱峰的上升，导致主峰可能并不会增加。
[0031]为了解决上述问题，申请人开发了一种降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法，该培养方法能够有效降低抗体的酸峰比例，提高主峰比例，并且对不会影响细胞生长和目标抗体的产量。
[0032]具体地，请参阅图1，图1是本申请降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法一实施方式的流程示意图。
[0033]该培养方法包括：
[0034]S100、将融合细胞接种至基础培养基中培养，培养过程中添加流加培养基和调节剂。
[0035]其中，调节剂包括Mn
2+
。
[0036]本实施方式对基础培养基和流加培养基的选择不做限定，可根据融合细胞的种类选择任何适配的商用培养基，能够保证细胞的稳定培养、增殖即可实现本实施方式的效果。
[0037]目前，常用的融合细胞培养过程中，Mn
2+
离子作为一种金属离子仅在调节蛋白的糖型方面有应用，并没有在调节蛋白酸碱峰方面的应用。
[0038]本实施方式通过在细胞培养中添加Mn
2+
离子来调节蛋白酸碱峰，无需改变工艺控制条件，对细胞生长和目标抗体产量无影响；同时，本实施方式在降低酸峰比例的同时，不会造成碱峰的上升，避免了常用蛋白酸碱峰调节方法降酸峰但碱峰上升，主峰没有增加的现象。
[0039]Mn
2+
离子作为一种重要的金属离子是细胞生长本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降低抗体类蛋白酸峰比例的培养方法，其特征在于，包括：将融合细胞接种至基础培养基中培养，培养过程中添加流加培养基和调节剂；由培养产物中分离得到抗体类蛋白；其中，所述调节剂包括Mn
2+
。2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述调节剂添加完成后，培养体系中Mn
2+
的摩尔浓度为20～30μM。3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述调节剂分别在培养的第3、4或5天和第5、6或7天分两次添加至培养体系中。4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述调节剂分别在培养的第4天和第6天分两次添加至培养体系中。5.根据权利要求4所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：邝志威，刘刚，谭洪志，潘正骅，朱一翔，
申请(专利权)人：康日百奥生物科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：