本发明专利技术属于中药制药技术领域，涉及鱼腥草中马兜铃内酰胺类成分的制备方法。本发明专利技术采用高速逆流色谱技术建立了从蕺菜属植物鱼腥草(Houttuynia cordata)中快速富集马兜铃内酰胺类成分的方法，从鱼腥草中富集马兜铃内酰胺A II、马兜铃内酰胺F I和马兜铃内酰胺B II三个内酰胺类成分，本发明专利技术的马兜铃内酰胺类成分的富集工艺简便、快速、得率高，适合于工业化制备，可用于中草药中马兜铃内酰胺类化合物对照品的大规模富集。进一步为清热解毒中药鱼腥草的安全性评价与质量控制提供必需的对照品。的安全性评价与质量控制提供必需的对照品。
【技术实现步骤摘要】
鱼腥草中马兜铃内酰胺类成分的制备方法
[0001]本专利技术属中药制药领域，涉及鱼腥草中马兜铃内酰胺类成分的制备方法，尤其涉及一种从鱼腥草中富集马兜铃内酰胺A II、马兜铃内酰胺F I、马兜铃内酰胺B II的方法。
技术介绍
[0002]现有技术公开了鱼腥草为三白草科(Saururaceae)蕺菜属蕺菜(Houttuynia cordata)的新鲜全草或干燥地上部分，主要产于我国中部、东南至西南部各省区，有清热解毒、消痈排脓、利尿通淋之效，我国西南地区人民常作蔬菜或调味品，属国家卫健委批准的第一批药食同源的中药品种。现代药理学研究发现，鱼腥草具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗补体活性，多用于治肠炎、痢疾、肾炎水肿及乳腺炎、中耳炎等，提示鱼腥草具有广泛的利用价值。
[0003]研究公开了马兜铃酸类成分广泛存在于马兜铃科(Aristolochiaceae)植物中，已被证实具有肾毒性、致癌和致突变作用。马兜铃内酰胺类成分作为马兜铃酸类成分的主要代谢产物，不仅存在于马兜铃科植物中，在鱼腥草中也有分布。已有研究证实化合物马兜铃内酰胺I的肾毒性比马兜铃酸I更强！本研究团队初步研究也发现，鱼腥草中的多个马兜铃内酰胺类成分与马兜铃内酰胺I结构相似，对肾小管上皮细胞HK
‑
2也具有明显的细胞毒性，提示制备此类成分对照品将对于鱼腥草质量控制和安全合理应用有重要意义。
[0004]研究实践显示，马兜铃内酰胺类成分在鱼腥草中的含量非常低，按传统柱色谱分离的工艺制备对照品成本高、得率低。因此，建立从鱼腥草中快速富集马兜铃内酰胺类化合物的方法已引起本领域技术人员的关注。
[0005]基于现有技术的现状，本申请的专利技术人拟提供一种从鱼腥草中快速富集马兜铃内酰胺类成分的方法，本申请能有助于为中草药中马兜铃内酰胺类成分的深入毒理学研究、安全性评价和质量控制提供必需的研究样品和对照品。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的是基于现有技术的现状，提供鱼腥草中马兜铃内酰胺类成分的制备工艺，尤其涉及从鱼腥草中富集马兜铃内酰胺A II、马兜铃内酰胺F I、马兜铃内酰胺B II的方法。
[0007]本专利技术所述的三个马兜铃内酰胺类成分的结构如下式所示：
[0008][0009]本专利技术为实现上述目的采用的技术方案是：
[0010]一种从鱼腥草中制备马兜铃内酰胺A II、马兜铃内酰胺F I、马兜铃内酰胺BII的方法，其包括以下步骤：
[0011](1)将鱼腥草用甲醇或乙醇等有机溶剂提取数次，合并提取液，浓缩回收溶剂并蒸干，得浸膏。提取方式可采用闪式提取、超声提取或渗漉提取。
[0012](2)将步骤(1)中所得的浸膏以水混悬后，用石油醚、二氯甲烷或乙酸乙酯萃取4次，合并萃取液，浓缩回收溶剂并蒸干，得萃取物。
[0013](3)将步骤(2)中所得萃取物通过正相硅胶柱色谱分离，用5
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7倍柱体积的二氯甲烷
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甲醇(120:1，50:1，10:1，1:1)或二氯甲烷
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甲醇(100:1，50:1，20:1，10:1)梯度洗脱，根据液质联用(LCMS)分析结果，收集二氯甲烷
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甲醇(50:1，10:1)或二氯甲烷
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甲醇(50:1，20:1)的洗脱部分，得到马兜铃内酰胺类成分粗提物。
[0014]将步骤(3)所得粗提物通过高速逆流色谱富集，选用正己烷
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乙酸乙酯
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甲醇
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水(1:2:1.55:1.45)或正己烷
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乙酸乙酯
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甲醇
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水(1:2:1.5:1.5)系统，上相(正己烷
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乙酸乙酯)为固定相，下相(甲醇
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水)为流动相，在流速2.0mL/min、主机转速为850r/min条件下分配，检测波长280nm，根据LCMS特征图谱确定马兜铃内酰胺类成分的出峰位置，收集所在的流出液，浓缩回收溶剂并蒸干，得到马兜铃内酰胺类成分富集物。
[0015](4)将步骤(4)所得富集物通过高效液相色谱进一步纯化，采用C18色谱柱(250
×
20mm，5μm)，柱温25℃，乙腈
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水(50:50)或(53:47)洗脱，流速为10mL/min，分别收集主要色谱峰，得到马兜铃内酰胺A II、马兜铃内酰胺F I、马兜铃内酰胺B II。
[0016]本专利技术采用高速逆流色谱技术建立了从蕺菜属植物鱼腥草(Houttuynia cordata)中快速富集马兜铃内酰胺类成分的方法，从鱼腥草中富集马兜铃内酰胺A II、马兜铃内酰胺F I和马兜铃内酰胺B II三个内酰胺类成分，进一步为清热解毒中药鱼腥草的安全性评价与质量控制提供必需的对照品。
[0017]本专利技术具有下述有益效果：
[0018]本专利技术提供的马兜铃内酰胺类成分的富集工艺简便、快速、得率高，适合于工业化制备，可用于中草药中马兜铃内酰胺类化合物对照品的大规模富集。
附图说明
[0019]图1为马兜铃内酰胺A II(AL AII)、马兜铃内酰胺F I(AL FI)、马兜铃内酰胺B II(AL BII)的结构。
[0020]图2为实施例1、实施例6、实施例8的富集工艺流程图。
[0021]图3为实施例5中马兜铃内酰胺A II、马兜铃内酰胺F I、马兜铃内酰胺B II的多级质谱图。
[0022]图4为实施例5中马兜铃内酰胺A II、马兜铃内酰胺F I、马兜铃内酰胺B II推测的裂解途径。
[0023]图5为实施例6中样品HH
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PE1～HH
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PE11的液相色谱图。
[0024]图6为实施例8中样品HH
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PE
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H的高速逆流色谱图。
具体实施方式
[0025]实施例1：鱼腥草的提取和萃取
[0026]取鱼腥草地下部分5kg，用粉碎机粉碎后，加入100L甲醇，闪式提取5min，电压100V，共1次，合并滤液后，浓缩蒸干，得浸膏1279.62g；将浸膏分散于4L水中，用石油醚萃取4次，得石油醚萃取部位152.38g(如图1所示)。
[0027]实施例2：鱼腥草的提取和萃取
[0028]取鱼腥草19kg，用粉碎机粉碎后，95％乙醇浸泡整夜后持续渗漉96h，每日加入料液比1:10的95％乙醇，合并滤液后，浓缩蒸干，浸膏采用石油醚萃取4次，得石油醚萃取部位273.82g。
[0029]实施例3：鱼腥草的提取和萃取
[0030]取鱼腥草5.05g，用粉碎机粉碎后，加甲醇100mL，超声30min，共3次，合并滤液后，浓缩蒸干，得甲醇提取物1.96g；将浸膏分散于10mL水中，用二氯甲烷萃取4次，得二氯甲烷萃取部位0.12g。
[0031]实施例4：鱼腥草的提取和萃取
[0032]取鱼腥草5.03g，用粉本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种鱼腥草中马兜铃内酰胺类成分的制备方法，其特征在于，其包括步骤：(1)将鱼腥草与有机溶剂按比例混合，提取数次，合并提取液，回收溶剂，得浸膏；(2)将步骤(1)中所得的浸膏以水混悬后，用有机溶剂萃取数次，合并萃取液，回收溶剂，得萃取物；(3)将步骤(2)中所得萃取物通过正相硅胶柱色谱，以二氯甲烷
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甲醇混合溶剂洗脱，对各管洗脱液进行液质联用分析，收集合并含有马兜铃内酰胺类成分的洗脱液，回收溶剂，得到马兜铃内酰胺类成分粗提物；(4)将步骤(3)所得粗提物通过高速逆流色谱分离，根据洗脱液的液质联用分析结果，收集合并含有马兜铃内酰胺类成分的洗脱液，得到马兜铃内酰胺类成分富集物；(5)将步骤(4)所得富集物通过高效液相色谱进一步分离，以乙腈
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水混合溶剂为流动相，收集含有马兜铃内酰胺类成分的色谱峰，回收溶剂，分别制得马兜铃内酰胺A II、马兜铃内酰胺F I、马兜铃内酰胺B II。2.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)的有机溶剂选自甲醇或乙醇。3.按权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)的提取方法选自闪式提取、超声提取、或渗漉提取。4.按权利要求1所述的方...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢燕，徐子砚，陈道峰，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：
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