解淀粉芽孢杆菌在制备预防和治疗日本血吸虫病的药物或食品中的应用制造技术

本发明专利技术公开了解淀粉芽孢杆菌在制备预防和治疗日本血吸虫病的药物或食品中的应用，该解淀粉芽孢杆菌可抑制体重下降，降低肝脏和脾脏的水肿程度，减轻肝脏纤维化导致的肝损伤，减轻肉芽肿导致的肠道粘膜损伤，有望用于制备预防和治疗日本血吸虫病的药物或食品，应用前景广泛。景广泛。景广泛。

【技术实现步骤摘要】
IDNO.3所示。
[0013]作为优选的技术方案之一，对于日本血吸虫病的预防和治疗，包括但不限于：抑制体重下降，降低肝脏和脾脏的水肿程度，减轻肝脏纤维化导致的肝损伤，减轻肉芽肿导致的肠道粘膜损伤。
[0014]3、一种减轻肝脏脾脏水肿、减轻肝脏纤维化或治疗肠道肉芽肿相关疾病的药物或食品，其有效成分为解淀粉芽孢杆菌的菌悬液。
[0015]作为优选的技术方案之一，所述解淀粉芽孢杆菌为CGMCC 1.3450，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，或者自健康人粪便中分离获得。
[0016]作为优选的技术方案之一，所述解淀粉芽孢杆菌的16S rRNA基因序列如SEQ IDNO.3所示。
[0017]作为优选的技术方案之一，所述菌悬液的制备方法如下：采用平板划线法将解淀粉芽孢杆菌接种于LB培养基平板上，在37℃的培养箱中进行生长；20小时后，挑取单菌落于5mL的LB培养基中，37℃下200rpm培养10小时；之后，按照1：100的比例(体积比)，取0.1mL菌液接种于9.9mL的LB培养基中，37℃下200rpm培养8～10小时；当OD
600
达到0.8～1.0时，即可停止培养；在8000rpm的转速下将培养好的菌液离心10分钟，弃去上清，将收集到的菌体溶解于1.5mL的pH＝7.2、2％PBS溶液(质量百分数)中，即得到了解淀粉芽孢杆菌的菌悬液。
[0018]4、一种预防和治疗日本血吸虫病的药物或食品，其有效成分为解淀粉芽孢杆菌的菌悬液。
[0019]作为优选的技术方案之一，所述解淀粉芽孢杆菌为CGMCC 1.3450，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，或者自健康人粪便中分离获得。
[0020]作为优选的技术方案之一，所述解淀粉芽孢杆菌的16S rRNA基因序列如SEQ IDNO.3所示。
[0021]本专利技术的有益效果：
[0022]本专利技术培养并得到解淀粉芽孢杆菌悬浮液，并将菌悬液给以感染日本血吸虫的小鼠以灌胃。小鼠感染日本血吸虫的尾蚴剂量为25～30条。灌胃的菌液OD
600
值为0.8～1.0，且灌胃的频率为每3天0.3mL。本专利技术提供了组织病理学分析，以评估解淀粉芽孢杆菌减缓日本血吸虫感染症状的效果。结果发现，该解淀粉芽孢杆菌能够抑制日本血吸虫感染小鼠的体重下降，降低日本血吸虫感染小鼠的肝脏和脾脏的水肿程度的功能，通过降低日本血吸虫感染小鼠肝脏的纤维化程度从而减轻由于感染日本血吸虫引起的肝损伤的能力，通过降低日本血吸虫感染小鼠肠道的肉芽肿面积从而减轻由于感染日本血吸虫引起的肠道粘膜损伤的能力，故所述解淀粉芽孢杆菌具有减缓日本血吸虫感染引起的病理病症的作用。
[0023]也就是说，本专利技术通过给日本血吸虫感染小鼠以解淀粉芽孢杆菌的灌胃，观察到小鼠的体重下降趋势有所减缓，肝脏的纤维化程度、肉芽肿面积有所下降，脾脏的水肿情况有所好转，肠道的粘膜破坏程度有所减轻。表明解淀粉芽孢杆菌能够通过减轻日本血吸虫感染引起的肝脏和肠道的病理损伤，减缓日本血吸虫感染引起的病理病症，对日本血吸虫病症状具有良好的减缓作用。
[0024]本专利技术的解淀粉芽孢杆菌能够应用于制备预防和治疗日本血吸虫病的药物及发酵食品中，同时也能够应用于减轻肝脏纤维化、降低肠道肉芽肿相关病症的药物及发酵食品中，为研发预防和治疗日本血吸虫病及其相关病症的益生菌制剂提供理论支持，为日本
血吸虫的临床预防和治疗提供新思路。
附图说明
[0025]图1为解淀粉芽孢杆菌干预后日本血吸虫感染小鼠的体重变化图。
[0026]图2为解淀粉芽孢杆菌干预后日本血吸虫感染小鼠肝脏、脾脏及其重量的对比图；其中，A为日本血吸虫感染的小鼠肝脏、脾脏肿大情况，B为肝脏重量，C为脾脏重量。
[0027]图3为解淀粉芽孢杆菌干预后日本血吸虫感染小鼠肝脏的MASSON染色图及纤维化面积和羟脯氨酸含量的对比图；其中，A为MASSON染色，B为肝脏的纤维化面积，C为羟脯氨酸含量。
[0028]图4为解淀粉芽孢杆菌干预后日本血吸虫感染小鼠小肠和肝脏的HE染色图及肉芽肿面积的对比图；其中，A为肠道HE染色结果，B为肠肉芽肿面积，C为肝脏肉芽肿面积。
具体实施方式
[0029]下面结合附图和实施例对本专利技术进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本专利技术，并不对其内容进行限定。
[0030]实施例1：解淀粉芽孢杆菌的分离和鉴定
[0031]使用干净、无菌的一次性粪检盒收集人的粪便。将粪便溶解于灭菌的pH＝7.2、2％PBS溶液(质量百分数)中，充分搅拌并过滤掉残渣，得到初始菌液。随后，将初始菌液置于80℃的水浴锅中水浴20分钟后，取出冷却至室温。吸取0.1mL上清液并涂布于LB培养基平板上，随后在37℃培养箱中生长。当菌落生长至合适大小后，挑取单菌落，利用16S rRNA全长引物进行16S rRNA全长片段的扩增。扩增条件为：95℃变性4分钟；95℃变性15秒，57.5℃退火30秒，72℃延伸30秒，该阶段循环30次；72℃，10分钟，终止延伸。引物包括：
[0032]上游引物27F(Forward):5
’‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑3’
，如SEQ ID NO.1所示；
[0033]下游引物1429R(Reverse):5
’‑
GGTTACCTTGTTACGACTT
‑3’
，如SEQ ID NO.2所示。
[0034]并通过一代基因组测序，得到该菌株的16S rRNA基因序列，其序列如SEQ ID NO.3所示。将该序列与NCBI上的16S ribosomal RNA sequences Database进行相似性比较，最终鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，其同源性达到100％。鉴定后的菌株保存于
‑
80℃冰箱中。
[0035]该解淀粉芽孢杆菌为CGMCC 1.3450，也可从中国普通微生物菌种保藏管理中心直接购买。
[0036]实施例2：解淀粉芽孢杆菌的培养与菌悬液的制备
[0037]采用平板划线法将解淀粉芽孢杆菌接种于LB培养基平板上，在37℃的培养箱中进行生长。20小时后，挑取单菌落于5mL的LB培养基中，37℃下200rpm培养10小时。之后，按照1：100的比例(体积比)，取0.1mL菌液接种于9.9mL的LB培养基中，37℃下200rpm培养8
‑
10小时。当OD
600
达到0.8～1.0时，即可停止培养。
[0038]在8000rpm的转速下将培养好的菌液离心10分钟，弃去上清，将收集到的菌体溶解于1.5mL的pH＝7.2、2％PBS溶液(质量百分数)中，即获得解淀粉芽孢杆菌的菌悬液。
[0039]实施例3：解淀粉芽孢杆菌对日本血吸虫感染小鼠的干预
[0040]购买6周龄的BALB/c雌性小鼠(购于本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.解淀粉芽孢杆菌在制备减轻肝脏脾脏水肿、减轻肝脏纤维化或治疗肠道肉芽肿相关疾病的药物或食品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌为CGMCC1.3450，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，或者自健康人粪便中分离获得。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌的16SrRNA基因序列如SEQ ID NO.3所示。4.解淀粉芽孢杆菌在制备预防和治疗日本血吸虫病的药物或食品中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌为CGMCC1.3450，购自中国普通微生物菌种保藏管理中心，...

【专利技术属性】
技术研发人员：余正，陈浩，黄帅钦，黄静，王菁妍，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：