一种脱除香菇病毒的方法技术

本申请涉及一种脱除香菇病毒的方法，涉及病毒脱除技术领域，所述方法包括以下步骤：得到脱毒固体培养基；将香菇菌株菌丝接种于所述脱毒固体培养基上，后依次进行第一常温培养阶段、高温培养阶段和第二常温培养阶段，得到脱除病毒的香菇菌株。本发明专利技术通过提高香菇菌株菌丝培养温度和结合添加利巴韦林化学抗病毒药物方法，抑制病毒复制，同时添加萘乙酸外源性生长类植物激素降低因高温胁迫对香菇菌丝的损伤，一次脱毒操作能脱除香菇母种携带的Le

【技术实现步骤摘要】
一种脱除香菇病毒的方法


[0001]本申请涉及病毒脱除
，尤其涉及一种脱除香菇病毒的方法。

技术介绍

[0002]随着市场需求以及经济效益的不断提高，香菇种植规模逐年扩大，生产中出现的病毒病症状的现象越来越普遍。香菇病毒病症状主要表现为菌丝生长缓慢、长势减弱、转色异常、子实体畸形、质量和产量降低等，给香菇生产造成了很大的经济损失，影响食用菌产业的健康持续发展。
[0003]相关研究表明，香菇病毒LeV
‑
HKB是近年来香菇种质资源中发现频率最高的一种真菌病毒，有学者在对215个香菇菌株进行病毒检测发现，LeV
‑
HKB病毒携带率在42％以上，是危害香菇产业发展的主要病害。
[0004]目前，现有脱除香菇病毒方法存在步骤繁琐且病毒脱除率低等问题。

技术实现思路

[0005]本申请提供了一种脱除香菇病毒的方法，以解决现有脱除香菇病毒方法存在步骤繁琐且病毒脱除率低等技术问题。
[0006]本申请提供了一种脱除香菇病毒的方法，所述方法包括以下步骤：
[0007]得到脱毒固体培养基；
[0008]将香菇菌株菌丝接种于所述脱毒固体培养基上，后依次进行第一常温培养阶段、高温培养阶段和第二常温培养阶段，得到脱除病毒的香菇菌株；
[0009]其中，所述脱毒固体培养基含有利巴韦林和萘乙酸；所述高温培养阶段的工作参数包括：高温培养温度为36～38℃。
[0010]进一步地，所述得到脱毒固体培养基的步骤包括：
[0011]将包裹有的栎木屑和麸皮的纱布和土豆加入水中进行煮沸，后过滤，得到滤液；
[0012]向所述滤液中加入葡萄糖、硫酸镁和琼脂进行混合，得到第一混合液；
[0013]于115～125℃温度下，将所述第一混合液进行灭菌；后降温至50～60℃时，加入萘乙酸的甲醇溶液和利巴韦林进行混合，得到第二混合液；
[0014]将所述第二混合液进行凝固，得到所述脱毒固体培养基；
[0015]其中，所述栎木屑、所述麸皮和所述土豆的重量比为(10～20):(5～10):(190～210)；
[0016]以1000ml所述滤液计，所述滤液中含有所述葡萄糖的重量为18～22g，所述滤液中含有所述硫酸镁的重量为1.2～1.7g，所述滤液中含有所述琼脂的重量为18～22g；
[0017]在所述第二混合液中，所述萘乙酸的摩尔浓度为0.008～0.012mmol/L，所述利巴韦林的质量浓度为190～210ug/ml。
[0018]进一步地，所述栎木屑、所述麸皮和所述土豆的重量比为15:10:200。
[0019]进一步地，以1000ml所述滤液计，所述滤液中含有所述葡萄糖的重量为20g，所述
滤液中含有所述硫酸镁的重量为1.5g，所述滤液中含有所述琼脂的重量为20g。
[0020]进一步地，在所述第二混合液中，所述萘乙酸的摩尔浓度为0.01mmol/L。
[0021]进一步地，在所述第二混合液中，所述利巴韦林的质量浓度为200ug/ml。
[0022]进一步地，所述第一常温培养阶段的工作参数包括：第一常温培养温度为23～26℃，第一常温培养时间为6～8天，避光培养。
[0023]进一步地，所述高温培养阶段的工作参数包括：高温培养温度为36℃，高温培养时间为48小时，避光培养。
[0024]进一步地，所述第二常温培养阶段的工作参数包括：第二常温培养温度为23～26℃，避光培养。
[0025]进一步地，所述香菇病毒包括Le
‑
HKB病毒和LeNSRV1病毒。
[0026]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比至少具有如下优点：
[0027]本申请实施例提供了一种脱除香菇病毒的方法，该方法通过提高香菇菌株菌丝培养温度和结合添加利巴韦林化学抗病毒药物方法，抑制病毒复制，同时添加萘乙酸外源性生长类植物激素降低因高温胁迫对香菇菌丝的损伤，各步骤参数间相互协同，共同作用实现了一次脱毒操作能脱除香菇母种携带的Le
‑
HKB病毒90％以上，同时也显著降低LeNSRV1等病毒含量，具有操作简单和病毒脱除率高等特点，有效解决了现有脱除香菇病毒方法存在步骤繁琐且病毒脱除率低等技术问题。
附图说明
[0028]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本申请的实施例，并与说明书一起用于解释本申请的原理。
[0029]为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0030]图1为本申请实施例提供的一种脱除香菇病毒的方法的流程示意图。
[0031]图2为本申请实施例1提供的一种脱除香菇病毒的方法的流程示意图。
[0032]图3为本申请实施例脱除Le
‑
HKB病毒的检测结果图。
[0033]图4为本申请实施例脱除LeNSRV1病毒的检测结果图。
具体实施方式
[0034]为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0035]除非另有特别说明，本申请中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等，均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
[0036]第一方面，本申请提供了一种脱除香菇病毒的方法，如图1所示，所述方法包括以下步骤：
[0037]得到脱毒固体培养基；
[0038]将香菇菌株菌丝接种于所述脱毒固体培养基上，后依次进行第一常温培养阶段、高温培养阶段和第二常温培养阶段，得到脱除病毒的香菇菌株；
[0039]其中，所述脱毒固体培养基含有利巴韦林和萘乙酸；所述高温培养阶段的工作参数包括：高温培养温度为36～38℃。
[0040]本申请实施例提供了一种脱除香菇病毒的方法，通过提高香菇菌株菌丝培养温度和结合添加利巴韦林化学抗病毒药物方法，抑制病毒复制，同时添加萘乙酸外源性生长类植物激素降低因高温胁迫对香菇菌丝的损伤并提高香菇菌丝的耐热能力，各步骤参数间相互协同，共同作用实现了一次脱毒操作能脱除香菇母种携带的Le
‑
HKB病毒90％以上，同时也显著降低LeNSRV1等病毒含量，具有操作简单和病毒脱除率高等特点，有效解决了现有脱除香菇病毒方法存在步骤繁琐且病毒脱除率低等技术问题。
[0041]本申请中，利巴韦林化学名为1
‑
β
‑
D
‑
呋喃核糖基
‑
1H...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脱除香菇病毒的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：得到脱毒固体培养基；将香菇菌株菌丝接种于所述脱毒固体培养基上，后依次进行第一常温培养阶段、高温培养阶段和第二常温培养阶段，得到脱除病毒的香菇菌株；其中，所述脱毒固体培养基含有利巴韦林和萘乙酸；所述高温培养阶段的工作参数包括：高温培养温度为36～38℃。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述得到脱毒固体培养基的步骤包括：将包裹有的栎木屑和麸皮的纱布和土豆加入水中进行煮沸，后过滤，得到滤液；向所述滤液中加入葡萄糖、硫酸镁和琼脂进行混合，得到第一混合液；于115～125℃温度下，将所述第一混合液进行灭菌；后降温至50～60℃时，加入萘乙酸的甲醇溶液和利巴韦林进行混合，得到第二混合液；将所述第二混合液进行凝固，得到所述脱毒固体培养基；其中，所述栎木屑、所述麸皮和所述土豆的重量比为(10～20):(5～10):(190～210)；以1000ml所述滤液计，所述滤液中含有所述葡萄糖的重量为18～22g，所述滤液中含有所述硫酸镁的重量为1.2～1.7g，所述滤液中含有所述琼脂的重量为18～22g；在所述第二混合液中，所述萘乙酸的摩尔浓度为0.008～0.012mmol/L，所述利巴韦林的质量浓度为1...

【专利技术属性】
技术研发人员：张志峰，张英君，马瑜，武福华，王小立，魏法山，丁传雨，李景照，徐丹丹，孙爽，陈东旭，方晓红，白明峰，杜如学，赵静，吕彦飞，
申请(专利权)人：南阳师范学院，
类型：发明
国别省市：