联合化疗与铁死亡治疗的小分子自组装纳米前药的制备及应用制造技术

本发明专利技术公开了联合化疗与铁死亡治疗的小分子自组装纳米前药的制备及应用，将喜树碱与二茂铁以二硫键相连，且与RSL3一起经自组装过程形成三组分纳米前药，并利用亲疏水作用修饰了乳腺癌靶向肽即磷脂

【技术实现步骤摘要】
联合化疗与铁死亡治疗的小分子自组装纳米前药的制备及应用


[0001]本专利技术属于生物制药领域，涉及无机化学、有机化学、材料学、生物医学等多学科，具体涉及一种联合化疗与铁死亡治疗的小分子自组装纳米前药的制备及应用。

技术介绍

[0002]乳腺癌是一种十分棘手的恶性肿瘤，目前，乳腺癌的主要治疗方式为手术、化疗和放疗，但对一些乳腺癌亚型，如三阴性乳腺癌的治疗效果仍较差。化疗是治疗三阴性乳腺癌远端转移最常见的方式，但具有化疗耐药和副作用等问题。研究表明，凋亡通路的抵抗如释放抗凋亡蛋白，阻止细胞凋亡的启动，这一过程在多药耐药机制中起着重要作用。因此，克服或规避化疗凋亡通路的耐药是一种很有前途的对抗三阴性乳腺癌的策略。
[0003]铁死亡是不同于包括凋亡在内的传统调节性细胞死亡的一种具有独特形态和生化特征的新型铁调控细胞死亡。铁死亡的典型特征是芬顿反应产生的剧毒羟基自由基导致脂质过氧化物的过量积累，破坏细胞内氧化还原平衡，最终导致非凋亡性的细胞死亡。铁死亡可为克服凋亡途径的化疗耐药和促进癌症治疗提供重要的思路和方向。目前已经开发了许多可以有效产生羟基自由基杀死癌细胞的铁催化剂。然而由于药物在体内传递过程中的不稳定性和生物相容性差，催化剂的催化活性往往会降低甚至丧失，最终导致治疗效果很差。
[0004]因此，迫切需要一种方法能融合铁死亡和传统化疗方式的优势，在提高治疗效果和降低毒副作用的前提下，减少药物在递送途径中的损失，使更多药物富集于肿瘤部位，增强对三阴性乳腺癌的原发和转移灶的治疗。

技术实现思路
r/>[0005]为了解决
技术介绍
中存在的问题，本专利技术的目的在于提供了一种联合化疗与铁死亡治疗的小分子自组装纳米前药的制备方法。所述小分子纳米前药是由化疗药物喜树碱，铁源补充剂二茂铁和谷胱甘肽过氧化物酶4抑制剂RSL3自组装形成的三元复合物。本专利技术将喜树碱与二茂铁以二硫键相连，且与RSL3一起经自组装过程形成三组分纳米前药，并利用亲疏水作用修饰了乳腺癌靶向肽即磷脂
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聚乙二醇
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RGD靶向肽，形成小分子自组装纳米前药RSL3/喜树碱
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二硫键
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二茂铁
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RGD。
[0006]本专利技术提供的小分子纳米前药是在负载谷胱甘肽过氧化物酶4抑制剂RSL3的喜树碱
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二硫键
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二茂铁纳米药物表面修饰磷脂
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聚乙二醇
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RGD靶向肽制备得到，所述的负载谷胱甘肽过氧化物酶4抑制剂RSL3的喜树碱
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二硫键
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二茂铁纳米药物是由将喜树碱
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二硫键
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二茂铁与谷胱甘肽过氧化物酶4抑制剂RSL3一起溶于二甲基亚砜并缓慢滴入去离子水中经由纳米沉淀法制备得到，所述的喜树碱
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二硫键
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二茂铁是由二茂铁甲酸与双羟乙基二硫化物在草酰氯作用下反应生成二茂铁
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二硫键
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羟基产物，而后与喜树碱在三光气氛围下继续反应制备得到。
[0007]本专利技术产物主要包含三种有效成分：具有化学治疗效果的喜树碱，具有铁源补充作用的二茂铁，和对铁死亡通路中关键蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4有重要作用的抑制剂RSL3。
[0008]本专利技术的小分子自组装纳米前药的制备方法是以喜树碱
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二硫键
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二茂铁和谷胱甘肽过氧化物酶4抑制剂RSL3经由自组装作用制备纳米颗粒，再利用亲疏水作用包裹上具有靶向功能的磷脂
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聚乙二醇
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RGD靶向肽获得小分子纳米前药。
[0009]本专利技术提供的一种联合化疗与铁死亡治疗的小分子自组装纳米前药的具体制备方法通过以下技术方案实现：
[0010](1)将二茂铁甲酸溶解在无水二氯甲烷中，然后在氮气气氛下0
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4℃条件下缓慢滴加草酰氯，草酰氯的摩尔量是二茂铁甲酸的10至15倍，接着在室温和氮气气氛下继续搅拌2
‑
6小时。旋蒸法除去混合溶液的溶剂，得到浓缩粗产物。将粗产物溶解于无水二氯甲烷中，并在氮气气氛下滴加双(2
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羟乙基)二硫化物和N，N
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二异丙基乙胺的无水二氯甲烷溶液，双(2
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羟乙基)二硫化物为N，N
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二异丙基乙胺摩尔量的1至2.5倍。然后用10
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20倍体积的乙酸乙酯进一步稀释混合物，用盐水洗涤并用无水硫酸钠干燥。取出有机层，并通过硅胶柱色谱法纯化，用二氯甲烷：甲醇(50:1
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100:1)洗脱，得到二茂铁
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二硫键
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羟基，为红色粘性固体。
[0011](2)在无水二氯甲烷中加入(S)
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(+)
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喜树碱和4
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二甲氨基吡啶，4
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二甲氨基吡啶为(S)
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(+)
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喜树碱摩尔量的2至5倍。在氮气氛围下缓慢加入三光气，室温搅拌0.5至4小时，然后在反应物中滴加上述1.1)步骤获得的二氯甲烷溶解物(和喜树碱的摩尔量比为1:1)，室温搅拌8至16小时。反应完成后，混合物中加入乙酸乙酯进一步稀释，用盐水洗涤并用无水硫酸钠干燥。取出有机层，并通过硅胶柱色谱法纯化，用石油醚：乙酸乙酯(1:1
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2：1)洗脱，纯化后得到喜树碱
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二硫键
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二茂铁，为红色固体。
[0012](3)将喜树碱
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二硫键
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二茂铁和RSL3溶解于少量二甲基亚砜中，喜树碱
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二硫键
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二茂铁是RSL3的质量的1至2倍。然后将喜树碱
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二硫键
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二茂铁/RSL3混合物缓慢的加入去离子水中，并用超声处理5至10分钟。接着用透析法除去二甲基亚砜溶剂，获得负载谷胱甘肽过氧化物酶4抑制剂RSL3的喜树碱
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二硫键
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二茂铁纳米药物。
[0013](4)将负载RSL3的喜树碱
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二硫键
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二茂铁溶于去离子水中，将磷脂
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聚乙二醇
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RGD靶向肽也溶解在去离子水中，将后者溶液缓慢滴加到前者之中，搅拌10
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20分钟后，将混合物使用透析法除去多余溶剂和游离药物(RSL3)，获得所述小分子自组装纳米前药纳米前药RSL3/喜树碱
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二硫键
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二茂铁
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RGD。
[0014]步骤(4)所述的聚乙二醇分子量为500Da、1000Da、2000Da、3000Da或5000Da中任一种。
[0015]喜树碱
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二硫键
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二茂铁的具体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种联合化疗与铁死亡治疗的小分子自组装纳米前药的制备方法，其特征在于，将喜树碱与二茂铁以二硫键相连，且与RSL3一起经自组装过程形成三组分纳米前药，并利用亲疏水作用修饰了乳腺癌靶向肽即磷脂
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聚乙二醇
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RGD靶向肽，获得小分子自组装纳米前药RSL3/喜树碱
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二硫键
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二茂铁
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RGD。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，具体通过以下步骤实现：(1)将二茂铁甲酸溶解在无水二氯甲烷中，然后在氮气气氛下0
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4℃条件下缓慢滴加草酰氯，草酰氯的摩尔量是二茂铁甲酸的10
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15倍，接着在室温和氮气气氛下继续搅拌2
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6小时，旋蒸法除去混合溶液的溶剂，得到浓缩粗产物，将粗产物溶解于无水二氯甲烷中，并在氮气气氛下滴加双(2
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羟乙基)二硫化物和N，N
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二异丙基乙胺的无水二氯甲烷溶液，双(2
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羟乙基)二硫化物为N，N
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二异丙基乙胺摩尔量的1
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2.5倍，然后用10
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20倍体积的乙酸乙酯进一步稀释混合物，用盐水洗涤并用无水硫酸钠干燥，取出有机层，并通过硅胶柱色谱法纯化，用二氯甲烷：甲醇为50:1
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100:1的洗脱液洗脱，得到二茂铁
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二硫键
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羟基，为红色粘性固体；(2)在无水二氯甲烷中加入(S)
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(+)
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喜树碱和4
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二甲氨基吡啶，4
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二甲氨基吡啶为(S)
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(+)
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喜树碱摩尔量的2
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5倍，在氮气氛围下缓慢加入三光气，室温搅拌0.5
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4小时，然后在反应物中滴加二茂铁
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二硫键
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羟基的二氯甲烷溶液，二氯...

【专利技术属性】
技术研发人员：平渊，李博文，陈缘，姚卓，
申请(专利权)人：曜迪生物技术徐州有限公司，
类型：发明
国别省市：