一种抗体多肽融合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种抗体多肽融合物及其制备方法和应用。本发明专利技术公开了一种通用的抗体多肽融合物，以及能和此抗体多肽融合物特异性、高亲和力结合的嵌合受体，以及表达此嵌合受体的CAR

【技术实现步骤摘要】
一种抗体多肽融合物及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种抗体多肽融合物及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]根据国家癌症中心发布的最新一期全国癌症统计数据，2016年，中国新发癌症患者超过406.4万，排在前五的癌症分别为：肺癌82.8万，结直肠癌40.8万，胃癌 39.7万，肝癌38.9万，乳腺癌30.6万。因癌症死亡患者超过241.4万，排在前五的癌症分别为：肺癌65.7万，肝癌33.6万，胃癌28.9万，结直肠癌19.6万，食管癌19.4万。癌症给我国人民群众的身体健康带来严重威胁。
[0003]手术、放疗和化疗，是目前临床上治疗肿瘤的三大传统治疗方法。手术可以切除肉眼可见或影像学可见的肿瘤，但对于通过血液循环和淋巴循环转移的、肉眼或影像学不可见的肿瘤细胞则无能为力。放疗和化疗都属于非特异性疗法，除了杀伤肿瘤细胞外，对正常组织和细胞尤其是分裂旺盛的造血干细胞抑制明显，从而带来明显的副作用。因此，发展新的、安全有效的癌症治疗方法是十分迫切和必要的。
[0004]肿瘤免疫治疗是继手术、放疗、化疗等传统治疗方法后快速发展的新一代肿瘤治疗方法，具有巨大的临床应用前景。肿瘤免疫治疗是指通过激发和增强机体免疫功能，从而控制和杀伤肿瘤细胞。与手术、放疗和化疗等传统的治疗手段相比，肿瘤免疫治疗具有特异性强，副作用小的优点，尤其适用于传统治疗方法无效的难治性肿瘤。目前，已应用在临床上的肿瘤免疫治疗方法主要包括抗体(如免疫检查点抑制剂，抗体药物偶联物，双特异性抗体等)、细胞因子、细胞免疫治疗、癌症疫苗及一些新兴免疫治疗方法等。
[0005]抗体是目前临床上应用最多的肿瘤免疫治疗方法。抗体是一类由免疫系统识别抗原后产生的蛋白质，用于与细胞表面的靶抗原结合。一旦与肿瘤抗原相结合，抗体可以引发抗体依赖细胞介导的细胞毒作用(Antibody Dependent Cell Mediated Cytotoxicity，ADCC)、激活补体系统或阻断受体与其配体的相互作用，最终导致细胞死亡。目前已经上市的用于治疗肿瘤和其他临床疾病的抗体超过100种。
[0006]嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor
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T cell，简称CAR
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T)是近几年发展起来的免疫治疗方法，已在血液肿瘤的治疗中显示出极强的抗肿瘤效果。图1示出了CAR结合 T细胞形成CAR
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T的过程示意图。可见CAR
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T结合了抗体与T细胞各自的优点，其优点为 (1)其胞外区为抗体的可变区，可特异性识别肿瘤抗原；(2)胞内区为T细胞活化信号分子CD3ζ及辅助刺激分子CD28或4
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1BB，使得CAR
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T细胞识别抗原后可以同时激发T细胞活化的第一信号和第二信号，杀伤靶细胞。
[0007]现有技术中，星凯特CAR
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T产品阿基仑赛注射液(即抗人CD19的CAR
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T细胞注射液) 用于治疗复发/难治性大B细胞淋巴瘤；并且靶向CD19的CAR
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T产品瑞基奥仑赛注射液也已经商业化，这意味着细胞免疫治疗取得了跨越式进展。在全世界范围内，已经有八款CAR
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T 产品商业化，而在临床试验网站上注册的CAR
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T相关临床试验超过1000项，覆盖各种血液肿瘤和实体瘤。可以预见，CAR
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T在肿瘤免疫治疗中的应用将会越来越广泛和深入。
[0008]但是，在细胞治疗中，安全是第一位的；而传统CAR
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T由于其固有的结构设计，临床上可能会引起严重的副作用。传统CAR
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T的嵌合抗原受体由识别抗原的单链抗体(single chainvariable fragment，简称scFv)和传递活化信号的胞内结构共价连接而成；输入患者后，CAR
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T 细胞迅速活化、增殖并产生大量子代细胞；子代CAR
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T细胞具有与亲代细胞完全相同的特性，也能识别抗原、活化、增殖并产生更多的子代细胞，传统CAR
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T细胞输入患者后能在1周内迅速扩增7000倍并产生大量细胞因子(如图2所示)，引起细胞因子综合征(Cytokine ReleaseSyndrome，简称CRS)、神经毒性甚至致死性的副作用。因此，设计并构建更安全的CAR
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T 细胞治疗，具有重大临床意义。
[0009]在已有报道中，CN112430576A和CN112430578A公开了一种携带安全开关的CAR
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T的构建。根据公开报道，其在CAR的结构中加入了可由小分子诱导CAR
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T细胞凋亡的胱天蛋白酶9(Caspase
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9)，从而可以在发生严重副作用时，诱导CAR
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T细胞凋亡，减轻副作用，提高治疗的安全性。但以上报道中的安全开关都以永久性清除CAR
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T细胞为目的，缺乏灵活性，而且短时间内CAR
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T细胞的大量死亡可能会进一步激发机体的免疫应答，带来意想不到的副作用。
[0010]CN111533810A公开了一种含有双功能免疫开关分子的双嵌合抗原受体T细胞及其应用。根据报道，此双嵌合CAR
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T细胞需要同时识别肿瘤相关抗原和PD
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L1才能被激活从而杀伤肿瘤细胞，从而提高了CAR
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T治疗的安全性。但此设计会降低CAR
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T治疗的有效性，因为如果肿瘤细胞只表达肿瘤抗原和PD
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L1中的一个，CAR
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T细胞则不会发挥作用。而已有研究表明，PD
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L1在很多肿瘤细胞上市低表达甚至是不表达的。
[0011]因此，亟需在已有报道的基础上，提供更为优化的技术方案，构建模块化的平台用于精确调控CAR
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T细胞抗原识别和有效地激活CAR
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T细胞从而克服上述缺陷。

技术实现思路

[0012]基于此，本专利技术公开了一种通用的抗体多肽融合物，以及能和此抗体多肽融合物特异性、高亲和力结合的嵌合受体，以及表达此嵌合受体的CAR
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T细胞。与现有技术相比，其具有以下进步：(1)本专利技术所涉及的抗体多肽融合物，其中的多肽仅由13个氨基酸组成，大大降低了其免疫原性，增加了其成药性。(2)本专利技术所涉及的抗体多肽融合物，其中的多肽能与本专利技术中的嵌合受体形成共价键，从而保证其在实体瘤的酸性微环境中也能稳定结合，从而产生更好的抗肿瘤作用。(3)本专利技术所涉及的抗体多肽融合物能与本专利技术中的嵌合受体高亲和力结合，亲和力常数为0.04nM；在达到与现有技术相同治疗效果的前提下，所需要的抗体多肽融合物更少，成本更低。
[0013]本专利技术所涉及的术语“抗体”，是指由B淋巴细胞识别本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体多肽融合物，其特征在于，所述抗体多肽融合物包括抗体、柔性linker和多肽Ⅰ或多肽Ⅱ；所述抗体的重链羧基末端或轻链羧基末端通过所述柔性linker与所述多肽Ⅰ或多肽Ⅱ连接；其中，所述柔性linker包括氨基酸序列1；所述多肽Ⅰ包括氨基酸序列2；所述多肽Ⅱ包括氨基酸序列3；所述氨基酸序列1
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3如SEQ ID No.1
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SEQ ID No.3所示。2.根据权利要求1所述抗体多肽融合物，其特征在于，所述抗体多肽融合物能与嵌合受体中的蛋白结合，所述蛋白包括氨基酸序列4，所述氨基酸序列4如SEQ ID No.4所示。3.根据权利要求1所述抗体多肽融合物，其特征在于，所述抗体多肽融合物由核酸分子Ⅰ编码。4.根据权利要求2所述抗体多肽融合物，其特征在于，所述嵌合受体由核酸分子Ⅱ编码。5.权利要求1
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4任一项所述抗体多肽融合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.将抗体的重链或轻链氨基酸序列羧基末端通过柔性linker与多肽Ⅰ或多肽Ⅱ连接；S2.根据重链和轻链氨基酸序列，合成相应的DNA序列，并做密码子优化；S3.将所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋小滔，刘璇，弓莉，吴砂，刘艺昕，
申请(专利权)人：蒋小滔，
类型：发明
国别省市：