褪黑素在提高龙眼胚性愈伤组织类黄酮、类胡萝卜素和总酚相对提取效率中的应用制造技术

本发明专利技术公开了褪黑素在提高龙眼胚性愈伤组织生物活性物质相对提取效率中的应用，涉及植物体胚培养领域。本发明专利技术通过在常规龙眼胚性愈伤组织培养基中添加特定浓度的褪黑素，在促进胚性愈伤组织增殖的同时，促进其类黄酮、类胡萝卜素和总酚积累。该方法相较于常规培养，将龙眼胚性愈伤组织类黄酮、类胡萝卜素、总酚相对提取效率分别提高了12.34%、42.15%和68.87%。68.87%。

【技术实现步骤摘要】
褪黑素在提高龙眼胚性愈伤组织类黄酮、类胡萝卜素和总酚相对提取效率中的应用


[0001]本专利技术属于植物体胚培养领域，具体涉及褪黑素在提高龙眼胚性愈伤组织生物活性物质相对提取效率中的应用。

技术介绍

[0002]次生代谢物是一大类对于植物生长发育和细胞生命活动正常运行非必需的小分子有机化合物，在植物中具有抵抗生物和非生物胁迫作用(植物生态学报,2001(05):639
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640)，一般分为分为苯丙素类、醌类、黄酮类、单宁类、类萜、甾体及其甙、生物碱七大类(武汉植物学研究,2007(05):500
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508)。由于这些次生代谢提取物在杀菌、抗病及化妆品制作等日常生活中的广泛应用(生物学通报,2004(07):15
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17)和人们对于生物合成方法获得的次生代谢物的不信任(分子植物育种,2019(20):6800
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6811)，因此，利用植物的不同部位提取次生代谢物成为了目前极为重要的次生代谢物获取方法。
[0003]龙眼是亚热带重要的经济果树，果实具有较高的营养价值，且其营养价值部分体现在其富含多种次生代谢物上，这些次生代谢物主要为黄酮类化合物、类胡萝卜素和酚类物质等(Phytochemistry,2012,77:226
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237)。类黄酮和酚类物质具有抗氧化、癌症和炎症等功能(中国中药杂志,2016(22):4124
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4128)，类胡萝卜素则作为色素被广泛应用于化妆品和食品领域(大学化学,2010(S1):94
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98)。目前，研究人员利用不同龙眼果实部位进行了上述次生代谢物的提取，并发现不同龙眼部位次生代谢物含量差异较大(Separation andPurification Technology,2009,70(2):219
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224)。但在工业方面，由于龙眼果实生长周期漫长及其次生代谢物含量受外界因素影响明显，利用不同组织部位提取类黄酮、类胡萝卜素和酚类物质等次生代谢物存极大不便。因此，利用具有极短的稳定生长周期的龙眼胚性愈伤组织作为次生代谢物来源更稳定和高效。而多项研究表明，低浓度外源褪黑素不仅能比吲哚
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乙酸处理更显著促进黄芩愈伤组织增殖、提高不定芽分化率(北方园艺,2013(08):106
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109)，与其他生长素协同诱导葡萄体细胞胚(园艺学报,2020(05):953
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962)，还能通过提高植物次生代谢物发挥其促进生长、抗逆和抗氧化作用(Journal ofPineal Research,2015,58(1):26
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33)。因此，利用安全无害的褪黑素探索更高效的通过龙眼胚性愈伤组织提取次生代谢物的方法具有显著的实际应用意义。而现在褪黑素在提高植物体胚次生代谢物方面的相关技术仍然一片空白。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供褪黑素在提高龙眼胚性愈伤组织生物活性物质相对提取效率中的应用，填补了褪黑素在提高植物体胚次生代谢物方面的相关技术的空白。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：褪黑素在提高龙眼胚性愈伤组织生物活性物质相对提取效率中的应用，所述生物活性物质为类黄酮、类胡萝卜素和总酚。
[0006]根据权利要求1所述的褪黑素在提高龙眼胚性愈伤组织生物活性物质相对提取效率中的应用，所述褪黑素的浓度为4.5μM。
[0007]一种提高龙眼胚性愈伤组织生物活性物质相对提取效率的方法，包括以下步骤：1)配制含有褪黑素的龙眼胚性愈伤组织固体培养基；2)选取生长良好的胚性愈伤组织，接种在培养皿中进行培养，培养皿中含步骤1)配制的含有褪黑素的龙眼胚性愈伤组织固体培养基；所述含有褪黑素的龙眼胚性愈伤组织固体培养基由MS培养基、4.5μmol/L褪黑素、4.5μmol/L 2,4
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二氯苯氧乙酸组成；所述生物活性物质为类黄酮、类胡萝卜素和总酚；所述胚性愈伤组织的接种量为每个培养皿4团，每团0.04g；所述培养的条件为25℃暗培养14d。
[0008]本专利技术的显著优点在于：本专利技术通过将4.5μmol/L褪黑素添加至龙眼胚性愈伤组织培养基，测定增殖量变化和次生代谢物含量变化以确定其对龙眼胚性愈伤组织类黄酮、类胡萝卜素和总酚积累的影响，发现该方法相较于常规培养，显著促进了龙眼胚性愈伤组织类胡萝卜素和总酚的积累，将龙眼胚性愈伤组织类黄酮、类胡萝卜素、总酚相对提取效率分别提高了12.34％、42.15％和68.87％，该结果能为今后龙眼体胚工厂化提取次生代谢物提供高效方法。
附图说明
[0009]图1为褪黑素对龙眼胚性愈伤组织增殖量影响的示意图。
[0010]图2为褪黑素对龙眼胚性愈伤组织类黄酮、类胡萝卜素和总酚含量影响的示意图。
具体实施方式
[0011]为了使本专利技术所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本专利技术所述的技术方案做进一步的说明，但是本专利技术不仅限于此。
[0012]褪黑素(Melatonin，MT)是一种吲哚类色胺，化学名称为N
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乙酰
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甲氧基色胺，相对分子质量为232.27g/mol，难溶于水，见光容易分解，使用时即配即用，配置时需避光，其化学结构式如下：
[0013]实施例1配制如下不同配方培养基：MS培养基：4.43g/LMS粉+7g/L琼脂+20g/L蔗糖；PH＝5.8；培养基1(常规胚性愈伤组织培养基)：MS培养基+4.5μmol/L 2,4
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二氯苯氧乙酸(2,4
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D)；PH＝5.8；培养基2：MS培养基+4.5μmol/L2,4
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D+4.5μmol/LMT；PH＝5.8；
培养基3：MS培养基+9μmol/LMT；PH＝5.8。
[0014]龙眼胚性愈伤组织的获取方法参照专利CN202211536514.X。
[0015]选取生长良好、状态稳定、质地松散、淡黄透明的龙眼胚性愈伤组织接种在直径为9cm的培养皿中进行培养，每个培养皿含20mL培养基(选自培养基1、培养基2、培养基3中的任意一种)，25℃暗培养14d。其中，每个培养皿接种龙眼胚性愈伤组织4团，每团0.04g，不同培养基各处理120团。培养结束后随机取5皿共计20团龙眼胚性愈伤组织进行样品混合。对获得的混合样本进行类黄酮、类胡萝卜素和总酚含量的测定，及进行相对提取效率计算。具体方法如下：称取混合样本0.2g，添加2mL预冷的磷酸盐缓冲溶液，在冰浴条件下将其研磨成匀浆，5000g离心8min，收集上清液。按照植物类黄酮(Flavonoid)、类胡萝卜素(carotenoid)和总酚(TP)含量检测试剂盒(https://www.mlbio.cn/)使用说明书的方法，于96孔酶标板，利用多功能酶标仪(Infinite M200 PRO，Tecan，Austria)分别于502nm、450本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.褪黑素在提高龙眼胚性愈伤组织生物活性物质相对提取效率中的应用，其特征在于：所述生物活性物质为类黄酮、类胡萝卜素和总酚。2.根据权利要求1所述的褪黑素在提高龙眼胚性愈伤组织生物活性物质相对提取效率中的应用，其特征在于：所述褪黑素的浓度为4.5 μM。3.一种提高龙眼胚性愈伤组织生物活性物质相对提取效率的方法，其特征在于：包括以下步骤：1）配制含有褪黑素的龙眼胚性愈伤组织固体培养基；2）选取生长良好的胚性愈伤组织，接种在培养皿中进行培养，培养皿中含步骤1）配制的含有褪黑素的龙眼胚性愈伤组织固体培养基。4.根据权利要求3所述的一种提高龙眼胚性愈伤组织生物活性物质相对提取效率的方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖学宸，林玉玲，刘梦雨，薛晓东，张雪莹，赖春旺，陈燕，赖钟雄，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：