一种带状疱疹病毒疫苗的嵌合抗原及其应用制造技术

本发明专利技术属于医药领域，具体涉及带状疱疹病毒疫苗。具体的涉及一种带状疱疹疫苗的嵌合抗原及其应用。通过将gE蛋白胞外539区段或者胞外134区段不同方式的和Fc片段串联得到嵌合抗原，能够很好的诱导小鼠产生免疫反应，达到保护目的。护目的。

【技术实现步骤摘要】
一种带状疱疹病毒疫苗的嵌合抗原及其应用


[0001]本专利技术属于医药领域，具体涉及带状疱疹病毒疫苗。

技术介绍

[0002]带状疱疹是由潜伏在体内的水痘
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带状疱疹病毒(Varicella zoster virus，VZV)再激活而引起的一种急性感染性皮肤疾病。儿童时期初次感染VZV引起水痘，感染后病毒进入皮肤的感觉神经末梢，沿着脊髓后根或三叉神经节神经纤维向中心移动，以一种持久潜伏的形式长期存在与脊神经或颅神经感觉神经节中。当人体免疫力低下或受到非特异性刺激后，病毒再次活动，生长繁殖，导致受侵犯的神经节发炎或坏死，产生神经痛，同时再活动的病毒从一个或数个相邻的神经节沿着相应的感觉神经纤维传播到皮肤，造成单侧分布的红斑基础上的簇集性水泡。亚太地区带状疱疹发病率约为1％，发病率随着年龄增长而升高，40
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50岁之后带状疱疹发病率达5％以上。在带状疱疹患者中约9％～34％的带状疱疹患者会发生带状疱疹后神经痛，疼痛评级可达7级以上，属于重度疼痛，严重影响患者生活质量。带状疱疹和带状疱疹后神经痛尚无特效药，因此接种带状疱疹疫苗是预防带状疱疹的有效手段。目前全球已上市两款带状疱疹疫苗为Zostavax(减毒活疫苗技术)和Shingrix(重组蛋白疫苗技术)。
[0003]虽然从技术水平上来看，重组技术优于减毒活疫苗技术。Zostavax为减毒活疫苗，最早于2006年获得FDA批准上市，用于预防60岁及以上老年人，2011年适用范围又被批准扩大至50岁及以上人群。Shingrix为含佐剂重组蛋白疫苗，含水痘带状疱疹病毒糖蛋白E及AS01B佐剂系统。Shingrix于2017年获得FDA批准上市，用于预防50岁及以上老年人。Shingrix接种为2剂次，间隔2
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6个月，上臂三角肌肌内注射，1600元/剂，全程接种共3200元。亟需一种国产疫苗来代替国外的疫苗，降本增效，达到更好的患者依从性。
[0004]VZV是最小的疱疹病毒，在其编号的糖蛋白中，糖蛋白gE(glycoprotein E)是由ORF68编码的一种晚期蛋白，属I型跨膜蛋白，全长623aa，其中544aa为胞外区、17aa为跨膜区、62aa为胞内区，富含N
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及O
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糖基化的位点。VZV结构蛋白gE在病毒感染的细胞中可大量表达，且在病毒传播中发挥重要的作用，同时也是诱导宿主体液免疫和细胞免疫的主要抗原之一。有研究表明通过Western blotting和ELISA检测手段发现gE蛋白的胞外1
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135区段是主要的抗原活性区，而其中的56
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75,86
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105和116
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135区段被水痘和疱疹病人的血清所识别，这一结果提示此三个区段是最主要的抗原决定表位(W J Fowler,M Garcia
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Valcarcel,MS Hill
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Perkins,G Murphy,D R Harper,D J Jeffries,N R Burns,S E Adams,A J Kingsman,G T Layton.Identification of immunodominant regions and linear B cell epitopes of the gE envelope protein of varicella
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zoster virus.Virology.1995Dec 20；214(2):531
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40)。

技术实现思路

[0005]本专利技术通过研究，发现结合gE蛋白胞外134区段和胞外539区段具体很好的效果，
因此设计了不同组合的嵌合体，抗原技术路线采用中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary，CHO)表达系统，与佐剂配伍之后，得到具有更好免疫原性的疫苗，为自主探索和研发具有更佳免疫原性的亚单位重组疫苗提供保障，有助于摆脱对国际疱疹疫苗的依赖程度。
[0006]本专利技术首先提供用于制备带状疱疹病毒疫苗的嵌合抗原，其由gE蛋白胞外539区段和Fc片段串联构成；
[0007]或者由两个串联的gE蛋白胞外539区段和Fc片段串联构成；
[0008]或者由gE蛋白胞外539区段和胞外134区段以及Fc片段串联构成；
[0009]或者由gE蛋白胞外134区段和胞外539区段以及Fc片段串联构成；
[0010]其中，gE蛋白胞外134区段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，gE蛋白胞外539区段的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示。优选地，Fc片段是来源于人IgG Fc片段；更具体地，其氨基酸序列SEQ ID NO：16所示。
[0011]优选地，所述用于制备带状疱疹病毒疫苗的嵌合抗原，其其氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，SEQ ID NO：9所示，SEQ ID NO：11所示或SEQ ID NO：13所示。
[0012]本专利技术提供所述用于制备带状疱疹病毒疫苗的嵌合抗原的编码核酸。优选地，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：8所示，SEQ ID NO：10所示，SEQ ID NO：12所示或SEQ ID NO：14所示。
[0013]本专利技术提供含有所述的核酸的重组表达载体，重组宿主细胞。
[0014]本专利技术提供所述用于制备带状疱疹病毒疫苗的嵌合抗原在制备带状疱疹病毒疫苗中的应用。
[0015]本专利技术进一步提供带状疱疹病毒疫苗，包括由所述嵌合抗原以及佐剂的组合物免疫动物获得免疫原性的疫苗。
[0016]更具体地，佐剂是AS01B。佐剂与抗原的用量比为1:1。
[0017]在具体实施方式中，所述动物是小鼠。
[0018]在优选实施方式中，免疫的剂量为：1μg,2μg,5μg每只小鼠，体积为100μl/只。免疫程序为一次免疫后，隔2周后采用相应剂量加强免疫。
[0019]本专利技术构建嵌合抗原可以得到更高质量的蛋白，免疫效果更好，优于GSK疫苗。
附图说明
[0020]图1、N134
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Fc HIC层析。即实施例1表中FA02的构建方式的跑胶图。
[0021]图2、N134
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N134
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Fc HIC层析。即实施例1表中FA03的构建方式的跑胶图。
[0022]图3、N134_Q540_Fc HIC层析。即实施例1表中FA04的构建方式的跑胶图。
[0023]图4、Q540
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N134
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Fc HIC层析。即实施例1表中FA05的构建方式的跑胶图。
[0024]图5、Q540_Q540_Fc HIC层析。即实施例1表中FA06的构建方式的跑胶图。
[0025]图6、Q540_Fc HIC层析。即实施例1表中FA07的构建方式的跑胶图。
具体实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于制备带状疱疹病毒疫苗的嵌合抗原，其由gE蛋白胞外539区段和Fc片段串联构成；或者由两个串联的gE蛋白胞外539区段和Fc片段串联构成；或者由gE蛋白胞外539区段和胞外134区段以及Fc片段串联构成；或者由gE蛋白胞外134区段和胞外539区段以及Fc片段串联构成；其中，gE蛋白胞外134区段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，gE蛋白胞外539区段的氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示。2.如权利要求1所述用于制备带状疱疹病毒疫苗的嵌合抗原，其特征在于，所述Fc片段是来源于人IgG Fc片段,更具体地，其氨基酸序列SEQ ID NO：16所示。3.如权利要求1所述用于制备带状疱疹病毒疫苗的嵌合抗原，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO：7所示，SEQ ID NO：9所示，SEQ ID NO：11所示或SEQ I...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭建立，张海江，张爱晶，伍树明，王艳，房红磊，朱家彤，余蒙丹，杨秀芬，刘鹏，张尧，银飞，王建英，刘永江，
申请(专利权)人：北京康乐卫士生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：