一种化妆品中NMN检测的方法技术

本发明专利技术属于化妆品检测领域，具体涉及一种化妆品中微量NMN的定量分析检测方法。所述定量分析检测方法中包含一种用于化妆品中NMN检测的试剂盒，所述试剂盒中包括基于多壁碳纳米管吸附的QuEChERS净化柱、50％的甲醇水溶液、0.1％的甲酸水溶液和甲醇；所述QuEChERS净化柱包括多壁碳纳米管、PSA和C18，所述方法步骤具体包括样品净化、浓缩和高效液相色谱法检测。测。测。

【技术实现步骤摘要】
一种化妆品中NMN检测的方法


[0001]本专利技术属于化妆品检测领域，具体涉及一种化妆品中NMN检测的方法。

技术介绍

[0002]NMN，即β
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烟酰胺单核苷酸，是一种具有生物活性的核苷酸，由磷酸基和含核苷的核糖与烟酰胺反应自然形成。在动物细胞中，NMN是一种细胞能量来源，是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide,NAD+)生物合成的代谢物，在细胞增殖和功能中起着至关重要的作用。随着年龄增长，体内NAD
+
水平的降低导致DNA修复能力下降，驱动衰老进程。NMN在体内吸收迅速，可以快速提高细胞内NAD
+
含量。进而研究发现，NMN作为化妆品原料具有抗皱、抗氧化、美白等功效。
[0003]2022年1月国家药监局NMPA公示了NMN作为化妆品原料备案通过的信息，因此NMN现在已经可以作为原料用于生产化妆品。从目前的备案信息来看，各企业备案的NMN在化妆品中的添加浓度最大为不大于3％。但由于目前国际上还没有化妆品中NMN含量测定的标准方法，因此无法对化妆品中NMN的含量进行准确测定，进而无法确定各企业备案的NMN添加浓度是否为真实浓度。因此非常有必要开发针对化妆品中NMN含量定量检测的标准方法，以促进相关化妆品的高质量及合规发展。
[0004]NMN极性大，不易挥发，易溶于水，难溶于有机溶剂，目前对其进行定量分析检测的报道较少，且能够检索到的相关报道主要是针对食品领域中NMN进行定量检测，其检测手段主要包括利用三重四级杆液质联用仪、核磁共振仪或高效液相色谱仪进行分析。而由于NMN具有特殊的理化性质，目前定量分析检测手段主要是利用三重四级杆液质和核磁共振进行，但作为产品常规检测成本较高。另一方面，目前在化妆品领域里暂时还没有NMN定量检测分析的报道，而对化妆品中常规的强极性物质的检测主要有高效液相色谱法、液相色谱串联质谱法等，但化妆品的性质多样(包括水状、乳液状、油膏状等)、成分基质复杂，因此为了对化妆品里的成分进行准确的定量检测，往往需要先对待测样品进行前处理。
[0005]申请号为CN202011584631.4，专利技术名称为“一种化妆品中玻色因的液相检测方法”的专利，公开了用HPLC
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示差折光检测法来检测化妆品里的玻色因含量。该专利中化妆品样品的前处理是用有机试剂分散样品后再用超纯水涡旋萃取，最后取上清液过滤后进行HPLC检测。申请号为CN202111659754.4，专利技术名称为“一种同时测定化妆品中的多种色素的方法”的专利，公开了用HPLC
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DAD检测化妆品中的多种色素的含量。该专利中化妆品样品的前处理方法是将样品与多种有机试剂混合提取，然后进行离心过滤，最后进行HPLC检测。可见，目前对化妆品样品中特定物质的检测主要采取前处理结合液相色谱分离的方法；其中前处理多是采用有机试剂萃取，然后结合离心过滤。然而，这种常用的样品前处理方法更适用于待测物质含量比较高的样品。
[0006]申请号为CN202111382244.7，专利技术名称为“一种膳食补充剂类产品中NMN含量的测定方法”的专利，公开了用HPLC方法检测膳食补充剂中的NMN。该专利中样品的前处理方法是将样品与有机试剂混合后超声提取，然后离心过滤。然而，这种采用有机试剂萃取后结合
离心过滤的样品前处理的方法并不适用于化妆品中NMN的检测。因为化妆品中NMN的含量极低，约为1～20mg/kg，但膳食补充剂里的NMN含量可达到10000mg/kg，因此采用有机溶剂萃取结合离心过滤的方式，极容易导致样品里微量的NMN被直接去除掉，或不能从油脂样品里有效萃取出，或者NMN分子被破坏，进而导致后续的检测无法顺利检出，或检出的含量不准确等问题。
[0007]基于此，有必要对化妆品里微量的NMN定量检测提出新的方法。

技术实现思路

[0008]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种化妆品中微量NMN的定量检测的方法，具体技术方案如下。
[0009]一种化妆品中微量NMN的定量分析检测方法，所述定量分析检测方法中包含一种用于化妆品中NMN检测的试剂盒，所述试剂盒中包括基于多壁碳纳米管吸附的QuEChERS净化柱、50％的甲醇水溶液、0.1％的甲酸水溶液和甲醇；所述QuEChERS净化柱包括多壁碳纳米管、PSA和C18；所述定量分析检测方法的具体步骤如下：
[0010]1)样品净化：称取适量待检测化妆品样品，加入50％的甲醇水溶液后超声10
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20min使样品充分溶解，所述样品与加入的50％的甲醇水溶液的质量比为1:10，重复超声提取一次得到样品提取液，将所述样品提取液经基于多壁碳纳米管吸附的QuEChERS净化柱以1
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3滴/秒的过柱速率净化一次得到样品净化液，将所述样品净化液进行两次离心后取上清液；
[0011]2)浓缩：将步骤1)得到的上清液置于真空旋转蒸发器中以50
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60℃旋转蒸发至近干(呈胡状物)后停止加热，用50％的甲醇水溶液提取，再用0.45μm的水相滤膜过滤溶液收集上清液；
[0012]3)高效液相色谱法检测：将步骤2)得到的上清液以0.1％的甲酸水溶液作为流动相A、以甲醇溶液作为流动相B进行等度洗脱。
[0013]进一步，所述步骤1)中的样品提取液的过柱速率为1滴/秒、2滴/秒或3滴/秒。
[0014]进一步，所述步骤1)中的样品净化液的离心操作为以8000
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12000rpm的速度离心10
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20min。
[0015]优选地，所述步骤1)中的样品净化液的离心操作为以10000rpm的速度离心15min。
[0016]进一步，所述步骤3)中的洗脱条件为15％A
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85％B等度洗脱0
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12min。
[0017]进一步，所述高效液相色谱法的色谱柱为HILIC色谱柱，进样体积为10μL，流速为0.8mL/min。
[0018]进一步，所述高效液相色谱法的柱温为35℃。
[0019]进一步，所述高效液相色谱法的检测器为DAD检测器，检测波长为235nm。
[0020]进一步，所述化妆品样品包括面霜、面乳和/或面膜精华液。
[0021]进一步，所述化妆品样品的称取精度为0.001g。
[0022]有益技术效果
[0023]1)本专利技术提供了一种化妆品中微量NMN的定量分析检测方法。由于NMN在化妆品中的含量极低，通常只有1～20mg/kg，且化妆品样品类型多样基质复杂，因此本专利技术突破性地引入了QuEChERS净化柱用于样品检测前的净化处理。QuEChERS净化柱目前虽然广泛地应用
于各类食品中化学药物和抗菌药物残留检测的前处理，但用于化妆品样品检测的前处理还未见报道。本专利技术实验证明，QuEChERS净化柱可以有效除去化妆品基质中的绝大部分干扰物(例如：面乳、面本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种化妆品中微量NMN的定量分析检测方法，其特征在于，所述定量分析检测方法中包含一种用于化妆品中NMN检测的试剂盒，所述试剂盒中包括基于多壁碳纳米管吸附的QuEChERS净化柱、50％的甲醇水溶液、0.1％的甲酸水溶液和甲醇；所述QuEChERS净化柱包括多壁碳纳米管、PSA和C18；所述定量分析检测方法的具体步骤如下：1)样品净化：称取适量待检测化妆品样品，加入50％的甲醇水溶液后超声10
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20min使样品充分溶解，所述样品与加入的50％的甲醇水溶液的质量比为1:10，重复超声提取一次，得到样品提取液，将所述样品提取液经基于多壁碳纳米管吸附的QuEChERS净化柱以1
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3滴/秒的过柱速率净化一次得到样品净化液，将所述样品净化液离心后取上清液；2)浓缩：将步骤1)得到的上清液置于真空旋转蒸发器中以50
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60℃旋转蒸发至近干后停止加热，用50％的甲醇水溶液提取，再用0.45μm的水相滤膜过滤溶液收集上清液；3)高效液相色谱法检测：将步骤2)得到的上清液以0.1％的甲酸水溶液作为流动相A、以甲醇溶液作为流动相B进行等度洗脱。2.如权利要求1所述的定量分析检测方法，其特征在于，所述步骤1)中的样品提取液...

【专利技术属性】
技术研发人员：兰韬，云振宇，吴琦，初侨，孟玲玲，张晓芳，
申请(专利权)人：中国标准化研究院，
类型：发明
国别省市：