表达冠状病毒RBD蛋白的弓形虫疫苗及其构建方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及表达冠状病毒RBD蛋白的弓形虫疫苗及其构建方法。弓形虫疫苗中含有表达冠状病毒RBD蛋白的弓形虫虫株，弓形虫虫株中含有编码冠状病毒RBD蛋白的氨基酸序列；氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术的表达冠状病毒RBD蛋白的弓形虫虫株对宿主具有较高的安全性，可诱导机体产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答，既能预防弓形虫感染，有效阻止弓形虫卵囊排出，又能预防新型冠状病毒感染。冠状病毒感染。

【技术实现步骤摘要】
表达冠状病毒RBD蛋白的弓形虫疫苗及其构建方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及表达冠状病毒RBD蛋白的弓形虫疫苗及其构建方法。

技术介绍

[0002]刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是专性细胞内寄生虫，也是重要的人兽共患病原，根据其在小鼠中的致病性被划分为I型、II型和III型。弓形虫感染能够导致人和动物不同方式和不同程度的疾病，导致妊娠动物和孕妇流产、死胎及其它繁殖生殖障碍，对免疫抑制患者具有生命威胁。猫弓形虫病是由猫吞食弓形虫包囊、卵囊或假包囊后而形成的寄生虫病。猫是弓形虫的终末宿主，对初次感染猫来说，可以向环境中排出大量卵囊，卵囊对外界环境具有极强的抵抗力，是人及动物感染弓形虫的一个重要源头。同时，猫也是弓形虫的中间宿主，被感染后可以在组织中形成包囊，感染猫被捕食后也可以传播弓形虫病。严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS
‑
CoV
‑
2)是2019年新型冠状病毒病(COVID19)的致病原因。最近对猫的SARS
‑
CoV
‑
2易感性研究表明，病毒可以在这些同伴动物身上复制并传播给其他猫。
[0003]因此，如何研制出一种既能预防弓形虫感染，阻止弓形虫卵囊排出，又能预防冠状病毒感染的新型疫苗，成为亟待解决的技术难题。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种表达冠状病毒RBD蛋白的弓形虫虫株，所述弓形虫虫株中含有编码冠状病毒RBD蛋白的氨基酸序列；
[0005]所述氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0006]本专利技术提供的表达冠状病毒RBD蛋白的弓形虫虫株与原始虫株相比，在体外的增殖速度无显著变化，致病性无显著变化，在大鼠体内几乎没有致病性，对宿主具有较高的安全性；同时可诱导机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答，既能预防弓形虫感染，有效阻止弓形虫卵囊排出，又能预防冠状病毒SARS
‑
CoV
‑
2感染。
[0007]RBD位于S1亚结构域c端，RBD与细胞表面受体(ACE2)的相应部位特异结合后，诱导S2的融合核心螺旋结构发生构象变化，卷曲螺旋折叠形成发夹样结构，发夹样结构使病毒与细胞膜结合在一起，最终引起融合，该步骤是病毒感染宿主细胞的关键。
[0008]然而RBD在不同型的SARS
‑
CoV
‑
2中易发生突变，本专利技术发现，选择如SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的RBD蛋白构建重组弓形虫虫株时，能够激发较强的免疫反应。
[0009]作为本专利技术的一种优选的实施方案，编码所述氨基酸序列的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0010]作为本专利技术的一种优选的实施方案，所述弓形虫虫株为弓形虫I型、II型或III型虫株，更优选为ΔKu80 RH虫株。
[0011]进一步，本专利技术提供了上述任一实施方案中的弓形虫虫株的构建方法，包括：采用
转基因技术将编码RBD蛋白的基因导入弓形虫虫株。
[0012]作为本专利技术的一种优选的实施方案，所述转基因技术采用CRISPR/Cas系统；优选CRISPR/Cas9系统。
[0013]作为本专利技术的一种优选的实施方案，构建方法包括：
[0014]以pUPRT
‑
Tub
‑
Gra8ss
‑
OVA
‑
DHFR
‑
3HA
‑
UPRT质粒为模板，构建pUPRT
‑
Tub
‑
Gra8ss
‑
RBD
‑
3HA
‑
UPRT载体；
[0015]然后将pSAG1
‑
CAS9
‑
TgU6
‑
sgUPRT质粒与所述载体共转染至弓形虫虫株。
[0016]优选地，构建方法包括：
[0017](1)以pUPRT
‑
Tub
‑
Gra8ss
‑
OVA
‑
DHFR
‑
3HA
‑
UPRT质粒为模板；
[0018](2)构建pUPRT
‑
Tub
‑
Gra8ss
‑
RBD
‑
3HA
‑
UPRT载体：由UPRT基因的5
’
同源臂和UPRT基因的3
’
同源臂顺次相连；
[0019](3)将pSAG1
‑
CAS9
‑
TgU6
‑
sgUPRT质粒和
[0020]pUPRT
‑
Tub
‑
Gra8ss
‑
RBD
‑
3HA
‑
UPRT共转染至弓形虫I型虫株，经筛选和鉴定获得表达RBD蛋白的单克隆虫株。
[0021]采用上述构建方法时，能够进一步提高弓形虫虫株诱导机体产生体液免疫应答和细胞免疫应答的能力，同时能够阻止弓形虫卵囊排出。
[0022]进一步，本专利技术提供了一种疫苗，其含有上述任一实施方案中的弓形虫虫株、或上述任一构建方法制得的弓形虫虫株。
[0023]优选地，所述疫苗为转基因弓形虫活疫苗。
[0024]作为本专利技术的一种优选的实施方案，疫苗中含有佐剂。
[0025]作为本专利技术的一种优选的实施方案，疫苗中含有缓冲液或培养液。
[0026]优选地，所述缓冲液为PBS，所述培养液为DMEM。
[0027]在具体实施过程中，包括但不限于对动物进行免疫接种所述疫苗；
[0028]优选地，在进行动物接种时，将所述疫苗的速殖子与PBS或DMEM混合制成混悬液后进行注射接种。
[0029]进一步，本专利技术还提供了上述任一实施方案中的弓形虫虫株、或上述任一构建方法、或上述任一实施方案中的疫苗在以下至少一方面的应用：
[0030](1)制备预防或治疗弓形虫感染的药物；
[0031](2)制备预防或治疗冠状病毒感染的药物；
[0032](3)提高机体免疫力。
[0033]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0034]本专利技术的表达冠状病毒RBD蛋白的弓形虫虫株对宿主具有较高的安全性，可诱导机体产生较强的体液免疫应答和细胞免疫应答，既能预防弓形虫感染，有效阻止弓形虫卵囊排出，又能预防新型冠状病毒感染。
附图说明
[0035]为了更清楚地说明本专利技术或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些
附图获得其他的附图。
[0036]图1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表达冠状病毒RBD蛋白的弓形虫虫株，其特征在于，所述弓形虫虫株中含有编码冠状病毒RBD蛋白的氨基酸序列；所述氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的弓形虫虫株，其特征在于，编码所述氨基酸序列的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.根据权利要求1或2所述的弓形虫虫株，其特征在于，所述弓形虫虫株为弓形虫I型、II型或III型虫株。4.权利要求1～3中任一项所述的弓形虫虫株的构建方法，其特征在于，包括：采用转基因技术将编码RBD蛋白的基因导入弓形虫虫株。5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述转基因技术采用CRISPR/Cas系统。6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，包括：以pUPRT
‑
Tub
‑
Gra8ss
‑
OVA
‑
DHFR
‑
3HA
‑
UPRT质粒为模板，构建...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘贤勇，索勋，刘亚欣，王超越，姜昕雨，王敏，索静霞，汤新明，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：