高效液相色谱法分离测定L-丙氨酸异丙酯盐酸盐中对映异构体的方法技术

本发明专利技术涉及药物分析领域，具体涉及L

【技术实现步骤摘要】
高效液相色谱法分离测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐中对映异构体的方法


[0001]本专利技术涉及药物分析领域，具体涉及L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐中对映异构体含量测定的高效液相色谱检测方法。

技术介绍

[0002]L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐：其化学结构式为：
[0003][0004]分子式为：C6H
14
ClNO2，分子量为：167.63
[0005]L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐是富马酸丙酚替诺福韦合成过程中的一个重要起始物料，具有一个手性中心，L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐的对映异构体为富马酸丙酚替诺福韦手性杂质来源之一，需严格控制L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐中对映异构体的含量。
[0006]药物的大多异构体通过高效液相色谱法分离的方法是已知的，但流动相、溶剂、柱温、色谱柱等因素对于检测结果有很大影响或不适用于目标检测物。目前L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体无药典等法定标准。因此，开发一种检测L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐中对映异构体的方法非常必要，该方法必须能够有效分离L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐及其对映异构体，以保证检测的有效性。更能严格准确控制L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐的质量。

技术实现思路

[0007]本专利技术解决的技术问题是提供了一种通过高效液相色谱法对L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐中对映异构体的分离测定方法，能够有效分离L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐及其对映异构体，实现L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的质量控制，保证了富马酸丙酚替诺福韦原料药的药品质量和临床使用的安全。
[0008]本专利技术提供的一种高效液相色谱法分离测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的方法，其特征在于，该方法采用的色谱条件为：色谱柱采用固定相硅胶表面涂敷的是直链淀粉
‑
三(5
‑
氯
‑2‑
甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱，流动相采用正已烷
‑
异丙醇的比例为70∶30的混合溶液，流速为0.8～1.2ml/min，检测波长为215nm～225nm，柱温为25～35℃。
[0009]系统适用性溶液：取本品衍生物与对映异构体(LB
‑
SM5
‑
c)适量，加正己烷
‑
异丙醇(10∶90)溶解并稀释制成每1ml中各约含1mg的溶液。
[0010]供试品溶液：取本品衍生物(LB
‑
SM5
‑
b)适量，精密称定，用正己烷
‑
异丙醇(10∶90)溶解并定量稀释制成每1ml中约含2mg的溶液。
[0011]样品的衍生化反应：取本品约5.0g，置反应瓶中，加二氯甲烷约48ml使溶解，滴加三乙胺约10ml后搅拌反应1h，待反应液温度降至5℃以下开始滴加苯甲酰氯约3.8ml，并保持5℃以下的温度继续搅拌反应30min，反应结束后将温度缓慢升至室温并搅拌15h～20h，
加入水约50ml继续进行搅拌，收集下层二氯甲烷层溶液，并依次用饱和碳酸氢钠溶液约50ml、水约50ml进行洗涤。洗涤结束后加入无水硫酸镁约5g干燥30min，待滤液浓缩后采用柱层析法纯化，即得。
[0012]所述色谱柱为固定相硅胶表面涂敷的是直链淀粉
‑
三(5
‑
氯
‑2‑
甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱，优选CHIRALPAK AY
‑
H(250
×
4.6mm，5μm)。
[0013]所述流动相为正已烷
‑
异丙醇的比例为60∶40～80∶20，优选70∶30。
[0014]所述检测器为紫外检测器，检测波长为215～225nm，优选220nm。
[0015]所述柱温为25～35℃，优选30℃。
[0016]所述流速为0.8～1.2ml/min，优选1.0ml/min。
[0017]所述配制样品的溶剂正已烷
‑
异丙醇的比例为5∶95～15∶85，优选10∶90。
[0018]所述系统适用性溶液中，出峰顺序为对映异构体(LB
‑
SM5
‑
c)峰和衍生物峰，两峰的分离度应不小于3。
[0019]本专利技术提供了一种L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐对映异构体的分离测定方法，该方法色谱条件能有效分离L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐及其对映异构体，专属性强，准确度与耐用性良好，能够严格控制L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐的产品质量。
[0020]附图：
[0021]图1：空白溶剂的结果；
[0022]图2：系统适用性溶液的结果；
[0023]图3：供试品溶液的结果；
[0024]图4：对照品溶液的结果；
[0025]图5：线性关系图。
具体实施方式
[0026]实施例1
[0027]本专利技术中的相关色谱条件
[0028]仪器：SHIMADZU LC
‑
20AT高效液相色谱仪，SPD
‑
20Avp紫外检测器；
[0029]色谱柱：CHIRALPAK AY
‑
H 250
×
4.6mm，5μm；
[0030]流动相：正已烷
‑
异丙醇(70∶30)；
[0031]检测波长：220nm；
[0032]柱温：30℃
[0033]流速：1.0mL/min
[0034]空白溶剂：正己烷
‑
异丙醇(10∶90)
[0035]系统适用性溶液：取本品衍生物与对映异构体(LB
‑
SM5
‑
c)适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中各约含1mg的溶液。
[0036]供试品溶液：取本品衍生物适量，精密称定，用溶剂溶解并定量稀释制成每1ml中约含2mg的溶液。
[0037]样品的衍生化反应：取本品约5.0g，置反应瓶中，加二氯甲烷约48ml使溶解，滴加三乙胺约10ml后搅拌反应1h，待反应液温度降至5℃以下开始滴加苯甲酰氯约3.8ml，并保持5℃以下的温度继续搅拌反应30min，反应结束后将温度缓慢升至室温并搅拌15h～20h，
加入水约50ml继续进行搅拌，收集下层二氯甲烷层溶液，并依次用饱和碳酸氢钠溶液约50ml、水约50ml进行洗涤。洗涤结束后加入无水硫酸镁约5g干燥30min，待滤液浓缩后采用柱层析法纯化，即得。
[0038]测定：取上述溶液5μl，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图。图谱见附图1～4。空白溶剂不干扰对映异构体的测定，系统本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种采用高效液相色谱法分离测定L
‑
丙氨酸异丙酯盐酸盐及其对映异构体的方法，其特征在于包括如下条件：填充剂(如CHIRALPAK AY
‑
H 250
×
4.6mm，5μm)，1)采用正相分离方式；2)色谱柱填充剂：表面涂敷有直链淀粉
‑
三(5
‑
氯
‑2‑
甲基苯基氨基甲酸酯)；3)流动相：正己烷/异丙醇组合溶液；4)柱温：25℃～35℃；5)流速：0.8ml/min～1.2ml/min；6)检查的波长：215nm～225nm；7)进样体积：5μl；8)溶剂：正己烷/异丙醇组合溶液；9)系统适用性溶液配制：取本品衍生物与对映异构体(LB
‑
SM5
‑
c)适量，加正己烷
‑
异丙醇(10∶90)溶解并稀释制成每1ml中各约含1mg的溶液；10)供试品溶液配制：取本品衍生物适量，精密称定，用正己烷
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异丙醇(10∶90)溶解并定量稀释制成每1ml中约含2mg的溶液；11)样品的衍生化反应：取本品约5.0g，置反应瓶中，加二氯甲烷约48ml使溶解，滴加三乙胺约10ml后搅拌反应1h，待反应液温度降至5℃以下开始滴加苯甲酰氯约3.8ml，并保持5℃以下的温度继续搅拌反应30min，反应结束后将温度缓慢升至室温并搅拌15h～20h，加入水约50ml继续进行搅拌，收集下层二氯甲烷层溶液，并依次用饱和碳酸氢钠溶液约50ml、水约50m...

【专利技术属性】
技术研发人员：滕红菊，汪炜燕，王春雪，
申请(专利权)人：南京海辰药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：