一种人乳头瘤病毒L1蛋白的制备方法技术

本发明专利技术涉及生物工程领域，尤其涉及一种人乳头瘤病毒L1蛋白的制备方法。本发明专利技术提供了蛋白的制备方法，取病毒接种于预培养的细胞后培养，离心，收集沉淀，纯化后，获得所述蛋白；所述接种的接种量为0.01～0.1MOI。本发明专利技术的制备方法，减少了病毒接种量，可以制备出等量的L1蛋白，并且杂蛋白量明显减少，减少后续纯化的困难，有利于大规模生产。有利于大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种人乳头瘤病毒L1蛋白的制备方法


[0001]本专利技术涉及生物工程领域，尤其涉及一种人乳头瘤病毒L1蛋白的制备方法。

技术介绍

[0002]人乳头瘤病毒(HPV)的主要类型有HPV 1、2、6、11、16、18、31、33、及35型。而HPV 16和18型长期感染可能与女性宫颈癌有关。该病毒主要感染区域有人类的表皮和粘膜鳞状上皮，至今已经分离出130多种。该病毒仅侵犯人类对其他动物无致病性，感染途径有性传播途径密切接触，间接接触，通过接触感染者的衣物、生活用品、用具等。医源性感染衣服人员在治疗、护理时防护不好，造成自身感染或通过医务人员传给患者，还有母婴传播。
[0003]使用重组杆状病毒系统表达外源蛋白的技术已经很成熟，广泛应用于除虫剂等药品。因此可以利用杆状病毒表达系统大量制备HPV L1蛋白。
[0004]国内有关于使用杆状病毒表达体系制备HPV L1蛋白的论文。但是所使用的病毒接种量过大，都是10MOI及以上。大规模生产时不可能使用这么多的毒种，而且保存起来也不方便。
[0005]因此，研究一种纯化步骤简单、杂蛋白少的制备HPV L1蛋白的方法至关重要。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了一种人乳头瘤病毒L1蛋白的制备方法。本专利技术的制备方法，减少了病毒接种量，可以制备出等量的L1蛋白，并且杂蛋白量明显减少，减少后续纯化的困难。有利于大规模生产。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了蛋白的制备方法，取病毒接种于预培养的细胞后培养，离心，收集沉淀，纯化后，获得所述蛋白；
[0009]所述接种的接种量为0.01～0.1MOI。
[0010]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中中所述细胞为Sf9
‑
ZY细胞。
[0011]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述蛋白为HPV L1蛋白。
[0012]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述预培养前所述细胞的密度为5～8
×
105个/mL。
[0013]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述预培养后所述细胞的密度为2.5～3
×
106个/mL。
[0014]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述预培养的溶氧量为不低于20％。
[0015]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述预培养的溶氧量为65％。
[0016]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述预培养的温度为26～28℃，pH为6.0～6.4。
[0017]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述预培养的温度为27℃，pH为
6.2。
[0018]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述预培养的气体的流量为0.2～0.3LPM。
[0019]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述气体不包括CO2。
[0020]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述培养的时间为24～120h。
[0021]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述离心的转速为700g，时间为10～20min。
[0022]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述离心的转速为700g，时间为10min。
[0023]在本专利技术的一些实施方案中，上述制备方法中所述病毒包括人乳头瘤病毒。
[0024]本专利技术提供了蛋白的制备方法，取病毒接种于预培养的细胞后培养，离心，收集沉淀，纯化后，获得所述蛋白；
[0025]所述接种的接种量为0.01～0.1MOI。
[0026]本专利技术的有益效果包括：
[0027](1)本专利技术的制备方法，减少了病毒接种量，可以制备出等量的L1蛋白，并且杂蛋白量明显减少，减少后续纯化的困难。有利于大规模生产。
[0028](2)本专利技术的制备方法，采用从0.01MOI～10MOI的病毒量侵染Sf9
‑
ZY细胞，均可以表达HPV L1蛋白。杆状病毒可以特异性地侵染Sf9
‑
ZY细胞，接种病毒量少，蛋白表达时间相对较长；接种病毒量大，蛋白表达时间相对较短，并且加快细胞死亡的速度，导致最终目的蛋白的产量并不高。并且生产过程中，低MOI的病毒量相对更容易保存，生产毒种和保存毒种的成本会大大减少。因此较低的MOI侵染细胞表达HPV L1蛋白的工艺更适合于生产。
附图说明
[0029]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0030]图1示实施例1接种病毒96小时后样品电泳结果；其中：从左至右依次为：Marker、BSA、三个HPV16型样品；黑色部分为HPV L1蛋白
[0031]图2示实施例2接种病毒96小时后样品电泳结果；其中：从左至右依次为：Marker、BSA、三个HPV16型样品；黑色部分为HPV L1蛋白；
[0032]图3示实施例3接种病毒96小时后样品电泳结果；其中：从左至右依次为：两个HPV16型样品、Marker、BSA、HPV16型样品；黑色部分为HPV L1蛋白；
[0033]图4示实施例4接种病毒72和96小时后样品电泳结果；其中：从左至右依次为：Marker、BSA、4个接种病毒72小时HPV16型样品、4个接种病毒96小时HPV16型样品；黑色部分为HPV L1蛋白及杂蛋白。
具体实施方式
[0034]本专利技术公开了一种人乳头瘤病毒L1蛋白的制备方法。
[0035]应该理解，表述
“……
中的一种或多种”单独地包括每个在所述表述后叙述的物体以及所述叙述的物体中的两者或更多者的各种不同组合，除非从上下文和用法中另有理
解。与三个或更多个叙述的物体相结合的表述“和/或”应该被理解为具有相同的含义，除非从上下文另有理解。
[0036]术语“包括”、“具有”或“含有”，包括其语法同义语的使用，通常应该被理解为开放性和非限制性的，例如不排除其他未叙述的要素或步骤，除非另有具体陈述或从上下文另有理解。
[0037]应该理解，只要本专利技术仍可操作，步骤的顺序或执行某些行动的顺序并不重要。此外，两个或更多个步骤或行动可以同时进行。
[0038]本文中的任何和所有实例或示例性语言如“例如”或“包括”的使用，仅仅打算更好地说明本专利技术，并且除非提出权利要求，否则不对本专利技术的范围构成限制。本说明书中的任何语言都不应解释为指示任何未要求保护的要素对于本专利技术的实践是必不可少的。
[0039]此外，用以界定本专利技术的数值范围与参数皆是约略的数值，此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而，任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。因此，除非另有明确的说明，应当理解本公开所用的所有范围、数量、数值与百分比均经过“约”的修饰。在此处，“约本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.蛋白的制备方法，其特征在于，取病毒接种于预培养的细胞后培养，离心，收集沉淀，纯化后，获得所述蛋白；所述接种的接种量为0.01～0.1MOI。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述预培养前所述细胞的密度为5～8
×
105个/mL。3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述预培养后所述细胞的密度为2.5～3
×
106个/mL。4.如权利要求1至3任一项所述的制备方法，其特征在于，所述预培养的溶氧量为不低于20％。5.如权利要求1至4任一项所述的制备方...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜旭辉，郭晶，丰强强，王东，王振萍，侯玉婷，时成波，苗丽，
申请(专利权)人：长春卓谊生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：