【技术实现步骤摘要】
一种高纯度外泌体分离装置
[0001]本技术涉及外泌体分离
，属于生物物质分离纯化领域。
技术介绍
[0002]外泌体作为细胞之间重要的通讯介质今年来逐渐受到重视，其在基础研究，临床诊断以及治疗方面的应用前景正在被不断的挖掘，如何获得高纯度的外泌体是外泌体基础研究及临床应用所要面临的首要问题，目前常见外泌体提纯的方法包括：1.梯度离心法，此方法虽然简单，但前期工作和临繁杂，比较耗时,得到的外泌体含量较少，且纯度不高；2.免疫磁珠法，耗时短，无需超速离心，但对外泌体的生物活性有所影响，且分离纯化成本高；此外还有PEG沉淀方法以及超速离心法等都面临纯度不高等问题。针对上述问题，在原有的外泌体分离纯化的基础上进行创新设计，我们开发一种高纯度外泌体分离装置。
技术实现思路
[0003]本技术的目的在于提供一种高纯度外泌体分离装置，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。
[0004]为实现上述目的，本技术提供如下技术方案：一种高纯度外泌体提取装置，包括装置I(1)以及装置II(2)，所述装置I依靠孔径大小分选外泌体颗粒，所述装置II为温敏型外泌体分离装置。
[0005]所述装置I含有U型管路，管路有进口(3)以及出口(4)，U型管路上开有小孔(7)，孔径大小为150nm。所述装置II(2)温敏型外泌体分离管内设置有S型玻璃微管(5)。所述S型玻璃微管(5)的直径为100um，且S型玻璃微管(5)的管道总长度为1m。所述装置II(2)温敏型外泌体分离管,其特征在于：形成温敏型特性包括如下步骤：>[0006]步骤一：
[0007]S型玻璃微管(5)内壁经硅烷偶联剂APTES改性后通过层层自组装(layer by layer)技术使管道内部均匀涂抹上一层明胶；
[0008]步骤二：
[0009]然后使用生物素化抗体连接明胶表面的链霉亲和素用于分离外泌体；
[0010]步骤三：
[0011]经装置I初步筛选后的包含外泌体悬液流经装置II S型玻璃微管(5)；
[0012]步骤四：
[0013]温敏型外泌体分离管主体(2)分离获得外泌体后将装置II置于37
°
培养箱中；
[0014]步骤五：
[0015]用PBS液体冲洗管道，脱落的外泌体就会从右边出口(6)流出被收集用于下游应用分析。
[0016]与现有技术相比，本技术的有益效果是：该高纯度外泌体分离装置，
[0017]1、可以通过装置I对外泌体进行初步的筛选，获得直径小于150nm的颗粒；
[0018]2、S型玻璃微管内壁经硅烷偶联剂APTES改性后通过层层自组装技术使管道内部均匀涂抹上一层明胶，且明胶表面使用链霉亲和素改性，同时使用生物素化抗体连接明胶表面的链霉亲和素，有利于对细胞的分离工作；
[0019]3、明胶在37℃温度之下从固态变成液态，从而可使连接在明胶表面的外泌体完整解离，方便后续通过液体对管道进行冲洗的工作，便于脱落的目的外泌体就会从右边出口流出被收集到，这样的分离方法能够保持较高的外泌体活性和完整性。
附图说明
[0020]图1为本技术整体正视剖面结构示意图；
[0021]图中：1、分离装置I；2、分离装置II 3、样品进口4、废液出口5、S型玻璃微管6、样品出口7、U型管路
[0022]图2为分离到的外泌体电镜下图片；
具体实施方式
[0023]下面将结合本技术实施例中的附图，对本技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本技术保护的范围。
[0024]实施例1温敏型外泌体分离特性的形成
[0025]请参阅图1，本技术提供一种技术方案：本技术提供如下技术方案：一种高纯度外泌体提取装置，包括装置I(1)以及装置II(2)，装置II(2)温敏型外泌体分离管,其特征在于：形成温敏型特性包括如下步骤：
[0026]步骤一：
[0027]S型玻璃微管(5)内壁经硅烷偶联剂APTES改性后通过层层自组装(layer by layer)技术使管道内部均匀涂抹上一层明胶；
[0028]步骤二：
[0029]然后使用生物素化抗体连接明胶表面的链霉亲和素用于分离外泌体；
[0030]步骤三：
[0031]经装置I初步筛选后的包含外泌体悬液流经装置II S型玻璃微管(5)；
[0032]步骤四：
[0033]温敏型外泌体分离管主体(2)分离获得外泌体后将装置II置于37
°
培养箱中；
[0034]步骤五：
[0035]用PBS液体冲洗管道，脱落的外泌体就会从右边出口(6)流出被收集用于下游应用分析。
[0036]实施例2快速分离高纯度外泌体
[0037]将获得的包含外泌体悬液(如干细胞上清液)，流经装置I及装置II，速率控制在0.1ml/min，使用PBS溶液按同样速率过装置两遍，将温敏型细胞分离管(装置II)置于37℃细胞培养箱20分钟，使用PBS溶液按同样速率流经装置II，收获目的外泌体，电镜检测外泌体数量(图2)，4℃或超低温存储供下游使用。
[0038]以上便是整个装置的工作过程，且本说明书中未作详细描述的内容均属于本领域专业技术人员公知的现有技术。尽管已经示出和描述了本技术的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本技术的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本技术的范围由所附权利要求及其等同物限定。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种高纯度外泌体分离装置，包括装置I(1)以及装置II(2)，其特征在于：所述装置I(1)依靠孔径大小分选外泌体颗粒，所述装置II(2)为温敏型外泌体分离装置，所述装置II(2)内设置有S型玻璃微管(5)，S型玻璃微管(5)内壁经硅烷偶联剂APTES改性后通过层层自组装技术使管道内部均匀涂抹上一层明胶，且明胶表面使用链霉亲和素改性，生物素化抗体连接明胶表...
【专利技术属性】
技术研发人员：叶永清，黄能平，王力，左鹏举，仇宇光，
申请(专利权)人：北京三一造血技术有限公司，
类型：新型
国别省市：
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