一种在杆状病毒-昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Per a 9的方法技术方案

本发明专利技术涉及一种生产美洲大蠊过敏原蛋白Ｐｅｒ　ａ　９的方法，尤其是一种在杆状病毒－昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Ｐｅｒａ　９的方法，属于基因工程技术领域。本发明专利技术通过杆状病毒－昆虫表达系统生产美洲大蠊过敏原Ｐｅｒ　ａ　９蛋白，从而避免在不同的表达系统中（例如细菌和酵母菌）对Ｐｅｒ　ａ　９过敏原结构造成影响的问题，并提供一种亲和层析的方法，解决天然Ｐｅｒ　ａ　９过敏原纯化工艺复杂的问题。使用杆状病毒－昆虫表达系统得到的Ｐｅｒ　ａ　９蛋白的活性是使用大肠杆菌得到的Ｐｅｒ　ａ　９蛋白活性的２．１倍。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种在杆状病毒－昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Ｐｅｒ　ａ　９的方法，其步骤包括：　（１）从美洲大蠊组织中提取总ＲＮＡ；　（２）将总ＲＮＡ反转录为ｃＤＮＡ，以ｃＤＮＡ为模板，用引物ＡＴＧＧＴＧＧＡＣＧＣＣＧＣＡＧＴＴＣＴＧＧ Ａ和ＴＴＡＧＡＧＣＧＡＧＣＴＣＴＣＣＡＧＣＴ进行ＰＣＲ反应，获得美洲大蠊过敏原Ｐｅｒ　ａ　９蛋白的编码基因；　（３）将Ｐｅｒ　ａ　９蛋白的编码基因克隆到杆状病毒载体中，转染昆虫细胞诱导表达Ｐｅｒ　ａ　９蛋白；　（４）采用亲和层析 方法对Ｐｅｒ　ａ　９蛋白进行纯化，从而得到美洲大蠊过敏原Ｐｅｒ　ａ　９蛋白。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：魏继福，何韶衡，
申请(专利权)人：江苏省人民医院，
类型：发明
国别省市：84[中国|南京]