HA标签单克隆抗体的制备、鉴定及应用制造技术

ＨＡ标签单克隆抗体的制备、鉴定及应用，属于生物医药技术领域。本发明专利技术用碳化二亚胺法合成ＨＡ－ｔａｇ完全抗原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术进行细胞融合，通过有限稀释法和间接ＥＬＩＳＡ法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株。常规制备腹水，用辛酸－硫酸铵法纯化，并对纯化的ｍＡｂ进行特异性鉴定。结果显示：ＨＡ－ｔａｇ完全抗原偶联成功，经细胞融合、筛选及克隆化，成功获得１株分泌ＨＡ标签ｍＡｂ的杂交瘤细胞株。制备腹水测得腹水效价高于１∶１０↑［６］，且此株ｍＡｂ与其他融合蛋白标签无交叉反应，单抗用于融合蛋白的Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｔｉｎｇ和免疫组化检测，建立了可用于ＨＡ融合蛋白纯化和检测的方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
ＨＡ标签单克隆抗体的制备方法，其特征是用碳二亚胺法合成ＨＡ－ｔａｇ完全抗原，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术进行细胞融合，通过有限稀释法和间接ＥＬＩＳＡ法克隆和筛选阳性杂交瘤细胞株，得到ＨＡ标签单克隆抗体，步骤为：　（１）免疫抗原 的合成：称取４．４ｍｇ　ＨＡ－ｔａｇ和５ｍｇ　ＯＶＡ溶于１ｍＬｐＨ７．０、０．０５ｍｏｌ／Ｌ的ＰＢ中，充分溶解后，将２００μＬ含有２．２ｍｇ碳二亚胺的ＰＢ溶液逐滴加入，边滴入边混匀，摇床１００ｒ／ｍｉｎ反应４ｈ，４℃静置过夜，用０．０１ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ７．０　ＰＢＳ透析７２ｈ，得到ＨＡ－ｔａｇ－ＯＶＡ免疫抗原，存储于－２０℃备用；　（２）包被抗原的合成；合成方法同免疫抗原的合成，载体蛋白为ＢＳＡ，得到ＨＡ－ｔａｇ－ＢＳＡ包被抗原，存储于－２０℃备用；　（３）杂交瘤 细胞株的建立按常规方法免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，２０～３０μｇ／只，末次免疫后免疫小鼠血清效价达到１∶１００００以上，进行细胞融合，并以间接ＥＬＩＳＡ法筛选分泌抗ＨＡ－ｔａｇ的阳性克隆，得到ＨＡ标签单克隆抗体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱晓林，
申请(专利权)人：朱晓林，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]