乳糖诊断／测定试剂（盒）及乳糖浓度测定方法技术

本发明专利技术涉及一种利用酶比色法及酶联法技术的乳糖诊断／测定试剂（盒），同时本发明专利技术还涉及测定乳糖浓度的方法、试剂的组成及成分，属于医学／食品检验测定技术领域。本发明专利技术的试剂（盒）主要成分包括：缓冲液、乳糖酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合及稳定剂；通过一系列的酶促反应，最终将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料，从而可以通过可见光分析仪器，在４００－７００ｎｍ波长处，测定染料含量的高低，进而直接反映出乳糖浓度的大小。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种乳糖诊断/测定试剂(盒)，同时本专利技术还涉及测定乳糖浓度的方法，属于医学/食品检验测定

技术介绍
乳糖是婴幼儿主要的能量来源，进入体内后经小肠乳糖酶作用分解成葡萄糖和半 乳糖，半乳糖是婴幼儿脑发育的必需物质，与婴幼儿大脑的迅速成长有密切联系。为防止乳 清粉中掺加用其他还原糖如葡萄糖替代乳糖，乳糖的检测十分必要。 牛奶是一种营养丰富的食品，但如饮用不当，也会给健康带来不良影B向。很多人在 饮奶后出现腹部不适、腹胀、多屁、腹痛甚至腹泻等症状，这种现象在医学上称为乳糖不耐 受症，其原因是这些人小肠缺乏乳糖酶、不能消化牛奶中的乳糖，乳糖进入结肠后，经结肠 中的细菌发酵，产生大量气体、醋酸等物质所致。大量研究证实，患有乳糖不耐受的人还有 大部分没有任何症状、只有人体生化指标改变的隐性不耐受者，医学上称为乳糖吸收不良 或乳糖酶缺乏。 据统计，全世界都存在乳糖不耐受的问题，其中亚洲人发生率最高，为 95%-100%。据中国疾病控制中心调查，我国北京、上海、广州等地3_13岁儿童乳糖不耐受 症和乳糖吸收不良的发生率约为80%。乳糖不耐受除引起消化道症状外，还可造成人体营 养吸收不良。据国外研究，乳糖不耐受可减少钙的摄入、减少峰值骨量、增加骨丢失从而引 发骨质疏松症，乳糖不耐受可影响铁和锌的吸收，造成铁缺乏和锌缺乏，并可影响小儿的脑 发育，对人体健康危害很大。 在食品分析领域中，酶分析法是广为使用并倍受诸如ISO等国际标准机构推荐的 一种方法。酶析法理论发展成熟并且已为实验室普遍接受。使用高质量经纯化的酶可以实 现对复杂物质中特定成份的检测。该方法可以检测的目标代谢物有糖类、酸类及其盐类、醇 类和其他物质等。由此，各种食品样品均可被快速检测并获得良好的结果。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetricMethod)及酶联法(Couple Reaction)技术，计量通过酶联反应生成喷嗒胺色原(Indaminedye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)所导致在400-700nm波长处吸光度的上升，得以测定乳糖浓度的方法，同时，本专利技术还将给出用以实现该方法的乳糖诊断/测定试剂(盒)，采用该试剂不仅可以在可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行乳糖浓度测定，而且测定速度快、灵敏度大、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。 本专利技术乳糖浓度测定方法如下 乳糖+水乳糖酶半乳糖+葡萄糖 葡萄糖+氧葡萄糖氧化酶葡糖酸内酯+过氧化氢 过氧化氢+还原型色原体组合过氧化物酶吲嗒胺色原或5 醌亚胺色原+水 这个方法应用乳糖酶(lactase ;EC 3. 2. 1. 108)(偶)联葡萄糖氧化酶 (GlucoseOxidase ;EC 1. 1. 3. 4)及过氧化物酶(peroxidase ;EC 1. 11. 1. 7)酶促反应终点 比色法。乳糖酶酶解乳糖反应产生葡萄糖，再通过(偶)联合葡萄糖氧化酶的作用，最后生 成的过氧化氢在过氧化物酶的作用下，将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料，从 而可以通过可见光分析仪器，在400-700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)波长处， 测定染料-吲嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)-含量高低的光 吸收大小；通过测量400-700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)处吸光度上升的程 度，得出乳糖浓度大小测定结果。 实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，如下成分 关系的本专利技术乳糖诊断/测定试剂(盒)较为理想缓冲液 稳定剂 过氧化物酶 乳糖酶葡萄糖氧化酶 还原型色原体组合100,1/L500,1/L30000U/L10000U/L12000U/L0. 1-20,1/L所述还原型色原体组合(Chromogen)可以是下列28个组合中的任何一个配对组3-甲基-2-苯噻唑酮腙 石碳酸3-甲基-2-苯噻唑酮腙 N-乙基-N- (3-硫丙基)-m-噻啶胺 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 N， N-双乙基-m-甲苯胺 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2 ，4-双氯石碳酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2，4，6-仨溴-3-羟基 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3， 5-双氯石碳酸磺酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3， 5-双氯_2-羟基. 3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 仨溴羥基苯甲酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 双甲基苯胺 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)_m-甲苯胺 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2， 2' -AZIN0-双(3_乙基苯噻唑_6_磺酸) 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 4-羥基-3-甲氧基苯甲酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3-甲基_乙基_羥基苯胺 4-氨基抗砒 石碳酸 4-氨基抗砒 N-乙基-N- (3-硫丙基)-m-噻啶胺 4-氨基抗砒 N， N-双乙基-m-甲苯胺 4-氨基抗砒 2，4-双氯石碳酸 4-氨基抗砒 2， 4， 6-仨溴-3-羟基 4-氨基抗砒 3，5-双氯石碳酸磺酸 4-氨基抗砒 3，5-双氯-2-羟基. 4-氨基抗砒 N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)_m-甲苯胺钠盐 4-氨基抗砒 仨溴羥基苯甲酸 4-氨基抗砒 双甲基苯胺 4-氨基抗砒 N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺 4-氨基抗砒 2， 2' -AZINO-双(3_乙基苯噻唑_6_磺酸) 4-氨基抗砒 4-羥基-3-甲氧基苯甲酸 4-氨基抗砒 3-甲基-乙基-羥基苯胺。 本专利技术的乳糖诊断/测定试剂(盒)可以是单剂，包括 缓冲液、稳定剂、乳糖酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合。试剂 (盒)可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。 也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂 试剂1 缓冲液、稳定剂、还原型色原体组合。 试剂2 缓冲液、稳定剂、过氧化物酶、还原型色原体组合、乳糖酶、葡萄糖氧化酶。 过氧化物酶、还原型色原体组合、乳糖酶、葡萄糖氧化酶在试剂1或试剂2中的位 置可以不限。试剂(盒)可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试 剂，直接使用。 也可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂 试剂1 缓冲液、稳定剂、还原型色原体组合。 试剂2 缓冲液、稳定剂、还原型色原体组合、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶。 试剂3 缓冲液、稳定剂、乳糖酶。 过氧化物酶、还原型色原体组合、乳糖酶、葡萄糖氧化酶在试剂1、试剂2或试剂3 中的位置可以不限。试剂(盒)可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成 液体试剂，直接使用。具体实施例方式下面结合实施例子对本专利技术作进一步的说明。 实施例一 本实施例的乳糖诊断/测定试剂为单试剂，包括 三(羧甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液 100mmol/L 稳定剂 500mmol/L 乳糖酶 10000U/L 葡萄糖氧化酶 12000U/L 过氧化物酶 30000U/L 4-氨基抗砒 2mmol/L 石碳酸 10mmol/L 试剂全部溶解配好后，分装入瓶，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酶比色法及酶联法技术的乳糖浓度测定方法，其方法如下：　　乳糖＋水　乳糖酶　半乳糖＋葡萄糖　　葡萄糖＋氧　葡萄糖氧化酶　葡糖酸内酯＋过氧化氢　　过氧化氢＋还原型色原体组合　过氧化物酶　吲嗒胺色原或　醌亚胺色原＋水　　将最终反应物置于可见光分析仪下，检测４００－７００ｎｍ处直接反映吲嗒胺色原或醌亚胺色原含量高低的光吸收程度，得出乳糖浓度大小测定结果。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]