本发明专利技术涉及一种利用酶比色法及酶联法技术的乳糖诊断／测定试剂（盒），同时本发明专利技术还涉及测定乳糖浓度的方法、试剂的组成及成分，属于医学／食品检验测定技术领域。本发明专利技术的试剂（盒）主要成分包括：缓冲液、尿苷二磷酸、乳糖合成酶、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、还原型色原体组合及稳定剂；通过一系列的酶促反应，最终将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染料，从而可以通过可见光分析仪器，在４００－７００ｎｍ波长处，测定染料含量的高低，进而直接反映出乳糖浓度的大小。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种乳糖诊断/测定试剂(盒)，同时本专利技术还涉及测定乳糖浓度的方法，属于医学/食品检验测定
技术介绍
乳糖是婴幼儿主要的能量来源，进入体内后经小肠乳糖酶作用分解成葡萄糖和半 乳糖，半乳糖是婴幼儿脑发育的必需物质，与婴幼儿大脑的迅速成长有密切联系。为防止乳 清粉中掺加用其他还原糖如葡萄糖替代乳糖，乳糖的检测十分必要。 牛奶是一种营养丰富的食品，但如饮用不当，也会给健康带来不良影B向。很多人在 饮奶后出现腹部不适、腹胀、多屁、腹痛甚至腹泻等症状，这种现象在医学上称为乳糖不耐 受症，其原因是这些人小肠缺乏乳糖酶、不能消化牛奶中的乳糖，乳糖进入结肠后，经结肠 中的细菌发酵，产生大量气体、醋酸等物质所致。大量研究证实，患有乳糖不耐受的人还有 大部分没有任何症状、只有人体生化指标改变的隐性不耐受者，医学上称为乳糖吸收不良 或乳糖酶缺乏。 据统计，全世界都存在乳糖不耐受的问题，其中亚洲人发生率最高，为 95%-100%。据中国疾病控制中心调查，我国北京、上海、广州等地3_13岁儿童乳糖不耐受 症和乳糖吸收不良的发生率约为80%。乳糖不耐受除引起消化道症状外，还可造成人体营 养吸收不良。据国外研究，乳糖不耐受可减少钙的摄入、减少峰值骨量、增加骨丢失从而引 发骨质疏松症，乳糖不耐受可影响铁和锌的吸收，造成铁缺乏和锌缺乏，并可影响小儿的脑 发育，对人体健康危害很大。 在食品分析领域中，酶分析法是广为使用并倍受诸如ISO等国际标准机构推荐的 一种方法。酶析法理论发展成熟并且已为实验室普遍接受。使用高质量经纯化的酶可以实 现对复杂物质中特定成份的检测。该方法可以检测的目标代谢物有糖类、酸类及其盐类、醇 类和其他物质等。由此，各种食品样品均可被快速检测并获得良好的结果。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶联法(Couple Reaction)技术，计量通过酶联反应生成喷嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)所导致在400-700nm波长处吸光度的上升，得以测 定乳糖浓度的方法，同时，本专利技术还将给出用以实现该方法的乳糖诊断/测定试剂(盒)，采 用该试剂不仅可以在可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行乳糖浓度测定，而且测 定速度快、灵敏度大、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。 本专利技术乳糖浓度测定方法如下 乳糖+尿苷二磷酸乳糖合成酶尿苷二磷酸_半乳糖+葡萄糖 葡萄糖+氧葡萄糖氧化酶葡糖酸内酯+过氧化氢 过氧化氢+还原型色原体组合过氧化物酶吲嗒胺色原或 醌亚胺色原+水 这个方法应用乳糖合成酶(lactose synthase ;EC 2. 4. 1. 22)(偶)联葡萄糖氧化 酶(Glucose Oxidase ;EC 1. 1. 3. 4)及过氧化物酶(peroxidase ;EC 1. 11. 1. 7)酶促反应终 点比色法。乳糖合成酶酶解乳糖反应产生葡萄糖，再通过(偶)联合葡萄糖氧化酶的作用， 最后生成的过氧化氢在过氧化物酶的作用下，将无色的还原型色原体组合氧化成有色的染 料，从而可以通过可见光分析仪器，在400-700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)波 长处，测定染料-喷嗒胺色原(Indamine dye)或醌亚胺色原(Quioneimine dye)-含量高 低的光吸收大小；通过测量400-700nm(根据还原型色原体组合的不同而定)处吸光度上升 的程度，得出乳糖浓度大小测定结果。 实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，如下成分 关系的本专利技术乳糖诊断/测定试剂(盒)较为理想缓冲液稳定剂过氧化物酶乳糖合成酶葡萄糖氧化酶尿苷二磷酸还原型色原体组合100,1/L500,1/L30000U/L10000U/L12000U/L6mmol/L0. 1-20,1/L所述还原型色原体组合(Chromogen)可以是下列28个组合中的任何一个配对组 -2-苯噻唑酮腙3-石碳酸 3-甲基 乙基N-3-N， 3-2， 3-2， 3-3， 3-3， 3-N-3-仨 3-2-苯噻唑酮腙 N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺 2-苯噻唑酮腙 双乙基-m-甲苯胺 2-苯噻唑酮腙4- 双氯石碳酸 甲基-2-苯噻唑酮腙4，6-仨溴-3-羟基-甲基-2-苯噻唑酮腔5- 双氯石碳酸磺酸 甲基-2-苯噻唑酮腔5-双氯-2-羟基 甲基-2-苯噻唑酮腙乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐 甲基-2-苯噻唑酮腙 溴羥基苯甲酸2-苯噻唑酮腙 双甲基苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺3-甲基-2-苯噻唑酮腙2， 2， -AZIN0-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)3- 甲基-2-苯噻唑酮腙4- 羥基-3-甲氧基苯甲酸 3-甲基-2-苯噻唑酮腙 3_甲基-乙基. 4_氨基抗砒 石碳酸氨基抗砒乙基-N- (3-硫丙基)-m-噻啶胺 氨基抗砒N-双乙基-m-甲苯胺 氨基抗砒4- 双氯石碳酸 氨基抗砒4，6-仨溴-3-羟基 氨基抗砒5- 双氯石碳酸磺酸 氨基抗砒 5-双氯-2-羟基 氨基抗砒乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺钠盐 氨基抗砒 溴羥基苯甲酸 氨基抗砒 双甲基苯胺4_氨基抗砒N-乙基-N- (2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺 4_氨基抗砒2， 2， -AZINO-双(3-乙基苯噻唑-6-磺酸) 4_氨基抗砒4-羥基-3-甲氧基苯甲酸 4_氨基抗砒3-甲基-乙基-羥基苯胺本专利技术的乳糖诊断/测定试剂(盒)可以是单剂，包括缓冲液、稳定剂、乳糖合成4-N-4-N， 4-2， 4-2， 4-3， 4-3， 4-N-4-仨 4—酶、葡萄糖氧化酶、尿苷二磷酸、过氧化物酶、还原型色原体组合。试剂(盒)可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。 也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂 试剂1 缓冲液、稳定剂、还原型色原体组合、尿苷二磷酸。 试剂2 缓冲液、稳定剂、过氧化物酶、还原型色原体组合、乳糖合成酶、葡萄糖氧化酶。 过氧化物酶、还原型色原体组合、乳糖合成酶、葡萄糖氧化酶、尿苷二磷酸在试剂1 或试剂2中的位置可以不限。试剂(盒)可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可 以配制成液体试剂，直接使用。也可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂 试剂1 缓冲液、稳定剂、还原型色原体组合、尿苷二磷酸。 试剂2 缓冲液、稳定剂、还原型色原体组合、葡萄糖氧化酶、过氧化物酶。 试剂3 缓冲液、稳定剂、乳糖合成酶。 过氧化物酶、还原型色原体组合、乳糖合成酶、葡萄糖氧化酶、尿苷二磷酸在试剂 1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂(盒)可以是干粉状态，在使用前加水溶解后 使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。具体实施例方式下面结合实施例子对本专利技术作进-实施例一-步的说明, 本实施例的乳糖诊断/; 三(羧甲基)氨基甲烷 稳定剂 乳糖合成酶 葡萄糖氧化酶 过氧化物酶 尿苷二磷酸 4_氨基抗砒 石碳酸J定试本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种酶比色法及酶联法技术的乳糖浓度测定方法，其方法如下： 乳糖＋尿苷二磷酸 乳糖合成酶 尿苷二磷酸－半乳糖＋葡萄糖 葡萄糖＋氧 葡萄糖氧化酶 葡糖酸内酯＋过氧化氢 过氧化氢＋还原型色原体组合 过氧化物酶 吲嗒胺色原或醌亚胺色原＋水将最终反应物置于可见光分析仪下，检测４００－７００ｎｍ处直接反映吲嗒胺色原或醌亚胺色原含量高低的光吸收程度，得出乳糖浓度大小测定结果。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王尔中，
申请(专利权)人：苏州艾杰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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