丁酸梭菌在发酵过程中筛选优质芽孢的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种微生物菌剂在发酵过程中筛选优质芽孢的方法。本发明专利技术由一株丁酸梭菌（Clostridium butyricum）在摇瓶筛选后进入发酵罐生产中再次进行筛选的过程，使其提高芽孢转换率和芽孢活性，所述微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：（1）对丁酸梭菌活化并进行摇瓶培养筛选；（2）对摇瓶筛选后的菌液进行100L发酵罐扩大培养并再次进行筛选；（3）对100L发酵罐筛选后的菌液进行5000L发酵培养；通过筛选后发酵出来的菌液其特征在于芽孢同步率高，芽孢活性强，达到提高发酵水平减少经济锁好的目的。发酵水平减少经济锁好的目的。

【技术实现步骤摘要】
丁酸梭菌在发酵过程中筛选优质芽孢的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种微生物菌剂在发酵过程中筛选优质芽孢的方法。

技术介绍

[0002]随着水产养殖规模的扩大和产量的不断增加水体动物肠道的保护成为大众养殖户的焦点关注问题，水体动物肠道问题已严重影响了水产养殖户的经济问题和水产养殖的可持续发展。利用丁酸梭菌来保护肠道可减少水产动物的发病几率，尤其是水体动物在幼苗期，可大大提高水体动物的存活率，大大减少养殖户经济损失，因此活性高的丁酸梭菌生产成为企业重中之重。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种筛选丁酸梭菌优质芽孢的方法，不仅可有效提高芽孢的转换率，而且可大大提高芽孢的有效活性，才能在水体中起到保护肠道抵抗病害，对筛选方法的选用翻看大量书籍进行多种实验，在解决问题的同时还需要节约成本目的。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：丁酸梭菌在发酵过程中筛选优质芽孢的方法，所述丁酸梭菌通多摇瓶筛选和发酵罐筛选提高发酵水平，其通过摇瓶筛选丁酸梭菌的芽孢同步率达到97%，丁酸梭菌的有效活菌数≥2
×
108cfu/g，再通过发酵罐筛选后丁酸梭菌的芽孢同步率达到99%，丁酸梭菌有效活菌数≥3
×
10
8 cfu/g。
[0005]所述丁酸梭菌发酵过程中筛选优质芽孢的方法，包括以下步骤：（1）摇瓶筛选：将丁酸梭菌进行菌种优化，进入摇瓶培养筛选；（2）100L发酵筛选：对摇瓶筛选后的菌液接入100L发酵罐种进行培养筛选；（3）5000L罐发酵培养：将100L发酵罐培养筛选后的菌液接入5000L发酵罐种再次进行培养，正常培养结束后丁酸梭菌的芽孢同步率达到99%，有效活菌数≥3
×
10
8 cfu/g。
[0006]所述丁酸梭菌摇瓶筛选采用以下步骤：将丁酸梭菌菌株从斜面接种至一级种子培养基中培养2
‑
3 d，挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2
‑
3次，从而得到生长良好的菌落，挑选其中部分菌落接种到摇瓶培养基中培养得到菌液，将菌液进行筛选处理，获得丁酸梭菌发酵筛选产物；所述种子培养基和摇瓶相同，面粉20（g/L），半胱氨酸0.75（g/L），乙酸钠1.8（g/L），磷酸氢二钾2.2（g/L），硫酸锰0.1（g/L），磷酸二氢钾2（g/L），硫酸镁0.4（g/L），酵母粉15（g/L），蛋白胨10（g/L），吐温1（g/L），柠檬酸钠1（g/L），碳酸钙2（g/L）pH6.8，发酵条件为温度为37
‑
37.5℃，其中斜面培养基中需要加琼脂1.5%
‑
2%。
[0007]所述摇瓶筛选方式为将摇瓶培养后的菌液进行无菌80℃水浴筛选。。
[0008]所述丁酸梭菌100L发酵罐筛选采用以下步骤：将摇瓶培养筛选后的菌液接入100L发酵罐培养基中培养得到菌液，将菌液进行筛选处理，获得丁酸梭菌发酵筛选产物；所述100L发酵罐培养基培养配方为面粉20（g/L），牛肉膏5（g/L），硫酸亚铁0.15（g/L），半胱氨酸0.75（g/L），乙酸钠1.8（g/L），磷酸氢二钾2.2（g/L），硫酸锰0.1（g/L），磷酸二氢钾2（g/L），硫酸镁0.4（g/L），酵母粉15（g/L），蛋白胨10（g/L），吐温1（g/L），柠檬酸钠1（g/L），碳酸钙2（g/L），消泡剂0.1（g/L），pH6.8，发酵条件为温度为37
‑
37.5℃。
[0009]所述100L发酵罐筛选方式为将100L发酵罐培养后的菌液进行无菌夹套蒸汽加热80℃筛选。
[0010]所述5000L发酵罐培养采用以下步骤：将100L发酵罐培养筛选后的菌液接入5000L发酵罐培养基中培养，获得丁酸梭菌筛选后发酵产物；所述5000L发酵罐培养基培养配方为面粉20（g/L），牛肉膏5（g/L），硫酸亚铁0.15（g/L），半胱氨酸0.75（g/L），乙酸钠1.8（g/L），磷酸氢二钾2.2（g/L），硫酸锰0.1（g/L），磷酸二氢钾2（g/L），硫酸镁0.4（g/L），酵母粉15（g/L），蛋白胨10（g/L），吐温1（g/L），柠檬酸钠1（g/L），碳酸钙2（g/L），消泡剂0.1（g/L），pH6.8，发酵条件为温度为37
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37.5℃。
[0011]本专利技术具有以下优点：本专利技术所述丁酸梭菌（Clostridium butyricum）在发酵过程中通过80℃高温筛选再发酵的产物，本专利技术能够有效提高芽孢同步率和芽孢活性，其操作简单生产成本低，投入水体使用效果持久，达到提高发酵水平，减少成本，有效保护水体动物肠道的目的。
附图说明
[0012]图1为本专利技术丁酸梭菌在发酵过程中筛选优质芽孢的方法流程图。
具体实施方式
[0013]下面结合具体附图和实施例对本专利技术作进一步说明。
[0014]实施例1以上所述，仅是本专利技术的较佳实施例，并非对本专利技术作任何限制。凡是根据本专利技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变化，均仍属于本专利技术技术方案的保护范围内。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.丁酸梭菌在发酵过程中筛选优质芽孢的方法，其特征在于，所述丁酸梭菌通多摇瓶筛选和发酵罐筛选提高发酵水平，其通过摇瓶筛选丁酸梭菌的芽孢同步率达到97%，丁酸梭菌的有效活菌数≥2
×
108cfu/g，再通过发酵罐筛选后丁酸梭菌的芽孢同步率达到99%，丁酸梭菌有效活菌数≥3
×
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8 cfu/g。2.权利要求1所述丁酸梭菌发酵过程中筛选优质芽孢的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）摇瓶筛选：将丁酸梭菌进行菌种优化，进入摇瓶培养筛选；（2）100L发酵筛选：对摇瓶筛选后的菌液接入100L发酵罐种进行培养筛选；（3）5000L罐发酵培养：将100L发酵罐培养筛选后的菌液接入5000L发酵罐种再次进行培养，正常培养结束后丁酸梭菌的芽孢同步率达到99%，有效活菌数≥3
×
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8 cfu/g。3.如权利要求2所述丁酸梭菌发酵过程中筛选优质芽孢的方法，其特征在于，所述摇瓶筛选采用以下步骤：将丁酸梭菌菌株从斜面接种至一级种子培养基中培养2
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3 d，挑选培养基茁壮的菌落，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中培养，重复此步骤2
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3次，从而得到生长良好的菌落，挑选其中部分菌落接种到摇瓶培养基中培养得到菌液，将菌液进行筛选处理，获得丁酸梭菌发酵筛选产物；所述种子培养基和摇瓶相同，面粉20（g/L），半胱氨酸0.75（g/L），乙酸钠1.8（g/L），磷酸氢二钾2.2（g/L），硫酸锰0.1（g/L），磷酸二氢钾2（g/L），硫酸镁0.4（g/L），酵母粉15（g/L），蛋白胨10（g/L），吐温1（g/L），柠檬酸钠1（g/L），碳酸钙2（g/L）pH6.8，发酵条件为温度为37
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37.5℃，其中斜面培养基中需要加琼脂1.5%
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2%；所述摇瓶筛选方式为将摇瓶培养后的菌液进行无菌80℃水浴筛选。4.如权利要求2所述丁酸梭菌发酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：张六六，朱选，陆沙，
申请(专利权)人：江苏纳克生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：