一种RAG重组酶抑制剂及其用于制备治疗白血病药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种RAG重组酶抑制剂及其用于制备治疗白血病药物中的应用，该重组酶抑制剂为诃子鞣酸，在较低的浓度下便能强烈的抑制急性淋巴白血病细胞REH的体外生长，该RAG重组酶抑制剂无毒副作用，且对急性淋巴白血病具有较好的治疗效果，可有效解决现有的药物存在的副作用大，治疗效果差的问题。治疗效果差的问题。治疗效果差的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种RAG重组酶抑制剂及其用于制备治疗白血病药物中的应用


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及一种RAG重组酶抑制剂及其用于制备治疗白血病药物中的应用。

技术介绍

[0002]重组激活基因1(recombination activating gene 1,RAG1)编码的RAG1蛋白和重组激活基因2(recombination activating gene 2,RAG2)编码的RAG2蛋白组成的复合物重组酶RAG对淋巴细胞的正常发育和免疫功能的实现起重要作用。重组酶RAG的异常活性可能导致急性淋巴白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)的发生。
[0003]ALL是儿童最常见的恶性肿瘤，是目前恢复效果最好、治愈率最高的恶性肿瘤之一。急性淋巴细胞白血病存在一定的异质性，患者临床病例特征不尽相同，可表现为发热、贫血、出血、肝脾肿大、淋巴结肿大、中枢神经系统白血病、睾丸白血病等临床特征。目前研宄表明急性淋巴细胞白血病的发病原因之一为广泛的遗传异常，包括基因突变、染色体易位和非整倍体等。目前白血病的治疗仍以化疗为主，但随之出现的药物副作用及多药耐药性的产生严重影响患者的生存质量。虽然急性淋巴细胞白血病的多药物联合化疗方案的结果有了很大的改善，提高了患者的生存率，降低治疗过程中化疗毒性作用及化疗药物的耐药性，但在高危患者和复发患者中治疗效果欠佳，预后较差。因此寻找新的治疗策略和发现新的有效、低毒、安全的抗白血病药物成为国际社会研究的热点。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供了一种RAG重组酶抑制剂及其用于制备治疗白血病药物中的应用，该RAG重组酶抑制剂为诃子鞣酸，该RAG重组酶抑制剂无毒副作用，且对急性淋巴白血病具有较好的治疗效果，可有效解决现有的白血病治疗药物存在的副作用大，治疗效果差的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：
[0006]RAG重组酶作为白血病治疗靶点的应用。
[0007]RAG重组酶抑制剂为诃子鞣酸。
[0008]上述RAG重组酶抑制剂在制备治疗白血病药物或白血病药物组合物中的应用。
[0009]进一步地，白血病为急性淋巴白血病。
[0010]一种急性淋巴白血病治疗药物，包括上述的RAG重组酶抑制剂。
[0011]RAG重组酶作为诊断标志物在制备白血病诊断试剂盒、诊断试剂或诊断芯片中的应用。
[0012]一种急性淋巴白血病诊断试剂盒，试剂盒中包括RAG重组酶检测试剂。
[0013]本申请中的有益效果为：
[0014]本申请中要求保护的RAG重组酶抑制剂在较低的浓度下便能强烈的抑制急性淋巴
白血病REH细胞(人急性淋巴细胞白血病细胞，RAG高表达细胞)的体外生长，但是对K562细胞(人慢性髓系白血病细胞，RAG阴性表达细胞)几乎没有抑制作用，证明诃子鞣酸对急性淋巴白血病细胞具有较强的抑制作用，对急性淋巴白血病具有较好的治疗作用。
附图说明
[0015]图1为RAG剪切DNA的三个阶段以及催化机制图以及RAG三维结构图；
[0016]图2为诃子鞣酸(Chebulagic acid)、莱苞迪苷D(Rebaudioside D)、羟基积雪草苷(Madecassoside)小分子与蛋白的对接结果图；
[0017]图3为急性淋巴细胞白血病细胞REH与K562细胞中RAG1/RAG2表达情况；
[0018]图4为羟基积雪草苷、莱苞迪苷D、诃子鞣酸对REH细胞增殖的影响统计图；
[0019]图5为诃子鞣酸对急性淋巴白血病细胞REH以及K562细胞增殖的影响统计图；
[0020]图6为诃子鞣酸对REH细胞以及K562细胞凋亡的影响统计图；
[0021]图7为诃子鞣酸对REH细胞周期的影响图；
[0022]图8为诃子鞣酸调控RAG及c
‑
Myc等相关蛋白表达量统计图。
具体实施方式
[0023]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术，即所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0024]因此，以下对提供的本专利技术的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本专利技术的范围，而是仅仅表示本专利技术的选定实施例。基于本专利技术的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]需要说明的是，术语“第一”和“第二”等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个
……”
限定的要素，并不排除在包括要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
[0026]下面结合实施例和附图对本专利技术的特征和性能作进一步的详细描述。
[0027]一、虚拟筛选实验
[0028]1、RAG蛋白结构准备
[0029]从PDB蛋白数据库中下载RAG1/2蛋白晶体结构后，去除水分子、配体，然后进行杂原子处理，再使用PDB2PQR进行加氢和加电荷处理。RAG切割DNA有三个阶段，首先RAG会结合含抗体基因的RSS序列，形成预反应复合物(Pre
‑
reaction complex，PRC)，然后通过RAG和DNA同时发生构象变化，复合物会从PRC态会变成切刻发生态(Nick
‑
forming complex，NFC)，最后复合物需要发生一个整体性的构象变化，形成发卡发生态(Hairpin
‑
forming complex，HFC)，从而完成DNA的双链切割。如图1所示，图1A为PRC构象下，重组酶活性中心的催化机制示意图，图1B为催化位点与DNA间结合情况二维图，图1C为NFC构象下，催化位点与
DNA间结合情况二维图，图1D为HFC构象下，催化位点与DNA间结合情况二维图，图1E为RAG三维结构及RAG催化位点示意图；根据上述催化机制以及重组酶结合DNA的构象来看，当DNA结合在重组酶上时，没有合适的空间位置来进行虚拟筛选，因此需要删除DNA结构，针对重组激活酶的催化位点进行筛选。
[0030]2、中药单体分子库处理
[0031]中药单体化合物2D分子库分别由“陶素”，“MCE”和“Selleck”提供，“陶素”，“MCE”和“Selleck”小分子库中分别包含1642、1483和1943本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.RAG重组酶作为白血病治疗靶点的应用。2.RAG重组酶抑制剂，其特征在于，所述抑制剂为诃子鞣酸。3.权利要求2中所述RAG重组酶抑制剂在制备治疗白血病药物或白血病药物组合物中的应用。4.如权利要求3中的应用，其特征在于，所述白血病为急性淋巴白血病。5.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭蕊蓉，李睿，魏平，廖益钒，伍怡颖，黄震，赵军宁，张翼冠，
申请(专利权)人：四川芸释新医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：