一种用于检测膀胱癌的组合物，试剂盒及其用途制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学检测领域，更具体地，涉及膀胱癌检测领域。本发明专利技术提供了一种用于检测膀胱癌的组合物，包括用于检测以下区域的甲基化水平的检测试剂：SLC6A18基因中如SEQ ID NO:1所示的区域；HS3ST2基因中如SEQ ID NO:2所示的区域；以及SIX6基因中如SEQ ID NO:3所示的区域。同时，还提供了包括该组合物的试剂盒，所述组合物的用途。能够在临床上以高灵敏度和好特异性对膀胱癌进行检测；在临床上，在膀胱癌的早期阶段就能灵敏和特异性地检出。在膀胱癌的早期阶段就能灵敏和特异性地检出。在膀胱癌的早期阶段就能灵敏和特异性地检出。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测膀胱癌的组合物，试剂盒及其用途


[0001]本专利技术属于分子生物学检测领域，具体地，属于膀胱癌检测领域，更具体地，涉及膀胱癌基因标志物的甲基化水平的检测。

技术介绍

[0002]膀胱癌(Bladder cancer，BC)是全球第十大常见恶性肿瘤。膀胱癌的诊断与术后随访监测主要依靠尿细胞学、膀胱镜镜检、尿肿瘤标记物检查以及影像学。尿脱落细胞学检查是膀胱癌诊断和术后随诊的主要方法之一，具有无创伤、特异性高、非侵入性的优点，但尿脱落细胞学检查的敏感度与肿瘤分级相关，G3和高级别尿路上皮癌及原位癌者阳性率可高达84％，在G1和低级别肿瘤中的敏感度仅为16％。尿细胞学检查无法检测到早期膀胱癌的发生。内窥镜检查被视为膀胱癌诊断的金标准，但普通膀胱镜检通常令患者十分痛苦，患者依从性差，无痛膀胱镜检查仍然会有麻醉风险，且收费较高，同样无法避免尿路感染等负面影响的风险。常规影像学(超声、CT、MRI)对膀胱原位癌及较小肿瘤(<5mm)诊断能力有限，一般不被应用于膀胱癌的早期筛查及术后复发监测。FISH检测利用荧光原位杂交技术检测膀胱癌中最为常见的染色体畸变，来检测尿液中是否存在膀胱癌细胞的方法，但该检测方法操作繁琐，价格昂贵，对Ta、Tis期肿瘤相对敏感度较低，且低肿瘤负荷，肿瘤细胞未脱落也可能对敏感度有影响，只能作为尿脱落细胞学检查和膀胱镜检查的补充。此外，基于无创的膀胱癌尿液标志物检测方法还包括核基质蛋白22(nuclear matrix protein 22,NMP 22)、膀胱肿瘤抗原(human bladder tumor antigen,BTA)、纤维蛋白(原)降解产物(fibrinogen and fibrin degradation products,FDP)、免疫
‑
细胞检查(ImmunoCyt)等，但这些方法无论敏感性还是特异性都不够理想，漏诊率及误诊率较高，难以满足临床需求，临床实际应用率很低。
[0003]近年来，基于PCR、NGS等分子诊断技术，液体活检不断发展和突破，已成为癌症精准早筛的有力武器。从标志物的信号丰度和信号强度来看，ctDNA甲基化是较为理想的检测标志物。研究表明，抑癌基因甲基化水平升高的现象通常发生在癌症初期，是肿瘤早期发展的标志性改变；而在人类基因组CpG岛中，60
‑
80％的胞嘧啶残基被甲基化修饰，DNA甲基化已成为癌症早筛中普遍而丰富的信号来源；此外，不同癌症类型有其独特的DNA甲基化模式，器官特异性强，可实现组织溯源。因此，ctDNA甲基化是国内外早筛企业采用的主流检测指标。
[0004]本领域亟需一种更有效的膀胱癌诊断产品，使得膀胱癌早期诊断兼具高灵敏度高特异性，且无创、快速。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供一种用于检测膀胱癌的组合物，所述组合物包括用于检测以下区域中至少两个的甲基化水平的检测试剂：
[0006]SLC6A18基因中如SEQ ID NO:1所示的区域；
[0007]HS3ST2基因中如SEQ ID NO:2所示的区域；以及
[0008]SIX6基因中如SEQ ID NO:3所示的区域。
[0009]在一些具体的实施方案中，所述组合物包括检测以下区域中的甲基化水平的检测试剂：
[0010]SLC6A18基因中如SEQ ID NO:1所示的区域；以及
[0011]HS3ST2基因中如SEQ ID NO:2所示的区域。
[0012]在一些具体的实施方案中，所述组合物包括检测以下区域中的甲基化水平的检测试剂：
[0013]HS3ST2基因中如SEQ ID NO:2所示的区域；以及
[0014]SIX6基因中如SEQ ID NO:3所示的区域。
[0015]在一些具体的实施方案中，所述组合物包括检测以下区域中的甲基化水平的检测试剂：
[0016]SLC6A18基因中如SEQ ID NO:1所示的区域；以及
[0017]SIX6基因中如SEQ ID NO:3所示的区域。
[0018]在一些具体的实施方案中，所述组合物包括检测以下区域中的甲基化水平的检测试剂：
[0019]SLC6A18基因中如SEQ ID NO:1所示的区域；
[0020]HS3ST2基因中如SEQ ID NO:2所示的区域；以及
[0021]SIX6基因中如SEQ ID NO:3所示的区域。
[0022]SLC6A18基因中如SEQ ID NO:1所示的区域、HS3ST2基因中如SEQ ID NO:2所示的区域，以及SIX6基因中如SEQ ID NO:3所示的区域为各自基因区域的CpG岛的一段序列。
[0023]具体地，SLC6A18(Genbank登录号：NM_182632)基因的SEQ ID NO:1区域如下所示：
[0024]GCCCTGACTGAGGCTGCCAGGGACAGGGCCCTCCTGGATGAGAGGTGGG
[0025]GCGGGGGCGGGTCCATGCCTGTGGTACGGAAGCGGCCAGGCCAGGCCGG
[0026]CGGGTGGGGTGGCAGGGAGCCCTTGGGTGTGTGTGAGAAGCAGCGGTGA
[0027]CTCGGGGAGAATTAGAGATGGAGAACATGTGTGCCAGGACATCCCGGAA
[0028]GGACCTGGAAGCTGGTGTTGCCATTCACATGTGAGGTGTGAGGGAGGCCT
[0029]GGCTTTCAGCTGCGCCCTTCAGCATGTGTTATTTTATGTTGTTATTTTGTTTT
[0030]ATTCTCACTGCTTCTGGGCAGAGGGAGCTGGGAAGGAGCCCCGGGGCCA
[0031]CCTGACATGGTCCCTGTCCACAGGGCTGGGCTGTGTCACGCTGTCCTTCC
[0032]TGATCAGCCTGTACTACAACACCATCGTGGCGTGGGTGCTGTGGTACCTCCTCAACTCCTTCCAGCACCCGCTGCCCTGGA；
[0033]HS3ST2(Genbank登录号：NM_006043)基因的SEQ ID NO:2区域如下所示：
[0034]GCTCCTCGACGCATCTTCAACATGTCCCGAGACACCAAGCTGATCGTGGT
[0035]TGTGCGGAACCCTGTGACCCGTGCCATCTCTGATTACACGCAGACACTCT
[0036]CCAAGAAGCCCGACATCCCGACCTTTGAGGGCCTCTCCTTCCGCAACCGC
[0037]ACCCTGGGCCTGGTGGACGTGTCATGGAACGCCATCCGCATCGGCATGTA
[0038]CGTGCTGCAC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测膀胱癌的组合物，其特征在于，所述组合物包括用于检测以下区域中至少两个的甲基化水平的检测试剂：SLC6A18基因中如SEQ ID NO:1所示的区域；HS3ST2基因中如SEQ ID NO:2所示的区域；以及SIX6基因中如SEQ ID NO:3所示的区域。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述检测试剂为扩增
‑
测序、芯片，或甲基化荧光定量PCR检测甲基化水平中所使用的检测试剂。3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述检测试剂为核酸引物测序Tag序列、甲基化芯片、核酸探针中的任意一种或多种。4.如权利要求1～3中任一项所述的试剂组合在制备用于检测膀胱癌的试剂盒中的用途。5.根据权利要求4所...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈明，郭鑫武，洪梅，纪博知，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：