一种抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物及其制备方法和NGAL检测试剂盒技术

本申请涉及体外试剂检测技术领域，更具体地说，它涉及一种抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物及其制备方法和NGAL检测试剂盒。一种抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物由抗NGAL单克隆抗体负载到复合荧光微球上获得，所述复合荧光微球的粒径为200nm；所述复合荧光微球由碳量子点和稀土铕荧光微球制备而成，所述碳量子点和稀土铕荧光微球的重量比为(0.4

【技术实现步骤摘要】
一种抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物及其制备方法和NGAL检测试剂盒


[0001]本申请涉及体外试剂检测
，更具体地说，它涉及一种抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物及其制备方法和NGAL检测试剂盒。

技术介绍

[0002]中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)，又称人脂质运载蛋白2(Ln2)或噬铁蛋白，是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。因为NGAL可能参与不同的生理、病理过程，所以NGAL是急性肾损伤的标志物。早期诊断急性肾功能损伤(AKI)时，血、尿中的NGAL浓度通常会迅速升高，2h最为明显(比临界值升高几十至几百倍)，而血清肌酐(sCr)、尿酶等传统指标往往要在24～72h才后明显升高，因而NGAL可用于AKI的早期诊断。
[0003]目前，NGAL的检测方法主要有酶联免疫法、放射免疫法、Western
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blotting、胶乳增强免疫透射比浊法以及化学发光法。其中，因为胶乳增强免疫透射比浊法，对仪器设备要求不高，没有环保和操作人员自身防护等问题，与其他检测方法比较，该方法简便快速、灵敏可靠，普通自动或半自动生化分析仪就可，有较大应用范围，较大的实用价值。如公告号为CN102590524B的中国专利技术，公开中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒，其检测NGAL抗原的最低检测限为10.39ng/ml，线性范围为0～7000ng/ml，R＝0.9982。
[0004]但是，NGAL浓度在正常人尿液中低于10ng/ml，如此低的浓度下，对NGAL检测试剂盒的灵敏度提出了较高的要求。所以，上述公开的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测试剂盒明显已经不满足灵敏度的检测要求。因此现在急需一种灵敏度更高的NGAL检测试剂盒。

技术实现思路

[0005]为了提高NGAL检测的灵敏度，本申请提供一种抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物及其制备方法和NGAL检测试剂盒。
[0006]第一方面，本申请提供一种抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物，采用如下的技术方案：一种抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物，由抗NGAL单克隆抗体负载到复合荧光微球上获得，所述复合荧光微球的粒径为200nm；所述复合荧光微球由碳量子点和稀土铕荧光微球制备而成，所述碳量子点和稀土铕荧光微球的重量比为(0.4～0.8):1；碳量子点和稀土铕荧光微球的粒径比为(0.04～0.08):1。
[0007]稀土铕是一种镧系稀土，其具有荧光寿命长、发射谱线窄、stokes位移大、背景干扰少、生物毒性小等特点。碳量子点是一种新型的荧光纳米材料，其具有水溶性好、低毒性、生物相同性好和光稳定性好等优点。
[0008]通过采用上述技术方案，本申请通过使用碳量子点与稀土铕荧光微球复配，通过
促使碳量子点与稀土铕配位，并接种在稀土铕荧光微球，得到的复合荧光微球，荧光强度更强。因在特定的粒径下，碳量子点与稀土铕荧光微球的分级复配效果较优，所得复合荧光微球的结构较稳定均一，可促进碳量子点与稀土铕荧光微球中的稀土铕的能量转移效应的发生；再结合碳量子点与稀土铕荧光微球特定的重量比例，可在稀土铕荧光微球掺量较少的情况下，制得具有荧光强度较强的复合荧光微球。所以，碳量子点与稀土铕荧光微球在特定重量和粒径下，所得的复合荧光微球中，可使得碳量子点与稀土铕荧光微球中的稀土铕具有较强的能量转移效应，促使碳量子点将能量转移给稀土铕，提高稀土铕的荧光强度。
[0009]因此，抗NGAL单克隆抗体负载到复合荧光微球表面形成的抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物，具有较强的荧光强度，应用于NGAL检测试剂盒中时，当样品中的NGAL与抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物结合，并形成NGAL
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抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物，并层析至被另一抗NGAL单克隆抗体捕获时，因抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物的荧光强度较强，可被荧光分析仪器检测出较强的荧光强度，从而提高了NGAL检测试剂盒检测NGAL的灵敏度。
[0010]同时，所得的复合荧光微球经检测的粒径为200nm，该复合荧光微球具有良好的比表面积和较多的有效基团，其对抗NGAL单克隆抗体的负载量较多，可进一步提高最终所得NGAL检测试剂盒检测NGAL的灵敏度。
[0011]特别是，稀土铕本身具有一定的生物毒性，在本申请复合荧光微球的制备过程中，碳量子点的加入，减少了稀土铕的使用量，提高了所得复合荧光微球以及的抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物、NGAL试剂盒的安全性能。
[0012]优选的，所述碳量子点和稀土铕荧光微球的重量比为(0.4～0.6):1。
[0013]优选的，所述碳量子点和稀土铕荧光微球的粒径比为(0.05～0.08):1。
[0014]通过采用上述技术方案，通过进一步的优化碳量子点和稀土铕荧光微球的粒径和重量，不仅提高所得复合荧光微球的荧光荧光强度，还能延长复合荧光微球荧光寿命。将复合荧光微球负载抗NGAL单克隆抗体后，应用于NGAL检测试剂盒中，可将其灵敏度提高至0.2ng/mL。
[0015]优选的，所述复合荧光微球的制备方法为：A1：将碳量子点溶于水中，得到碳量子点水溶液；将稀土铕荧光微球溶于水中，得到稀土铕荧光微球水溶液；将碳量子点水溶液加入到稀土铕荧光微球水溶液中，搅拌混合，得到混合溶液；A2：将混合溶液在180～200℃，反应3～4h，自然冷却至25～30℃，使用截留分子量1000的透析膜进行20～22h的透析纯化后，通过冻干法即得复合荧光微球。
[0016]通过采用上述技术方案，在上述制备条件下的碳量子点与稀土铕荧光微球相容性较好，促使碳量子点表面活化，从而可促进稀土铕配位在碳量子点表面，形成碳点
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铕的复合荧光微球。同时，因为碳量子点具有较好的光稳定性和抗外界环境影响的能力，将碳量子点配位在稀土铕表面后，不仅可提高所得复合荧光微球的光稳定性和抗外界环境影响的能力，提高所得抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物的稳定性；还可加速碳量子点与稀土铕发生能量转移效应，提高所得复合荧光微球的荧光强度，也即提高抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物的荧光强度。进一步的，在上述方法下制得的复合荧光微球，比表面积大，有效基团多，从而耦连抗NGAL单克隆抗体的负载量较大。所以，最终所得的抗NGAL单克
隆抗体复合荧光微球复合物，用于制备NGAL检测试剂盒，具有较高的灵敏度和稳定性。
[0017]优选的，所述稀土铕荧光微球为羧基修饰的稀土铕荧光微球。
[0018]通过采用上述技术方案，羧基修饰的稀土铕荧光微球表面含有大量的羧基，有助于稀土铕与碳量子点的配位，提高形成碳点
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铕的复合荧光微球的荧光强度和稳定性。
[0019]第二方面，本申请提供一种抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物的制备方法，采用如下的技术方案：一种抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物的制备方法，包括以下步骤：S1:将复合荧光本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物，其特征在于，由抗NGAL单克隆抗体负载到复合荧光微球上获得，所述复合荧光微球的粒径为200nm；所述复合荧光微球由碳量子点和稀土铕荧光微球制备而成，所述碳量子点和稀土铕荧光微球的重量比为(0.4～0.8):1；碳量子点和稀土铕荧光微球的粒径比为(0.04～0.08):1。2.根据权利要求1所述的抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物，其特征在于，所述碳量子点和稀土铕荧光微球的重量比为(0.4～0.6):1。3.根据权利要求1所述的抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物，其特征在于，所述碳量子点和稀土铕荧光微球的粒径比为(0.05～0.08):1。4.根据权利要求1所述的抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物，其特征在于，所述复合荧光微球的制备方法为：A1：将碳量子点溶于水中，得到碳量子点水溶液；将稀土铕荧光微球溶于水中，得到稀土铕荧光微球水溶液；将碳量子点水溶液加入到稀土铕荧光微球水溶液中，搅拌混合，得到混合溶液；A2：将混合溶液在180～200℃，反应3～4h，自然冷却至25～30℃，使用截留分子量1000的透析膜进行20～22h的透析纯化后，通过冻干法即得复合荧光微球。5.根据权利要求4所述的抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物，其特征在于，所述稀土铕荧光微球为羧基修饰的稀土铕荧光微球。6.权利要求1～5任一所述抗NGAL单克隆抗体复合荧光微球复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1:将复合荧光微球加入pH值为5.8～7.2的活化缓冲液中，搅拌混合后，离心3～5次，去除上清液，得到清洗后的复合荧光微球；S2：S21：将清洗后的复合荧光微球加入到pH值为7.2～8.5的耦连...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈璐，张国华，林家妍，
申请(专利权)人：上海凯创生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：