一种转移因子冻干赋形保护剂及方法技术

本发明专利技术属于生物制药技术领域，具体涉及一种转移因子冻干制剂及方法。转移因子冻干赋形保护剂，包括以下重量份的组分：脱脂乳粉10％、海藻糖5％、聚乙烯吡咯烷酮K

【技术实现步骤摘要】
一种转移因子冻干赋形保护剂及方法


[0001]本专利技术属于生物制药
，具体涉及一种转移因子冻干制剂及方法。

技术介绍

[0002]转移因子(transfer factor，常简写为TF)是存在于致敏淋巴细胞内与迟发型超敏反应有关的一类可透析小分子物质，可使供体的细胞免疫性转移给受体正常的淋巴细胞，使其具有供体的细胞免疫性，为免疫调节剂。在人，畜，禽中都有应用。
[0003]使用便利，保存性能好的冻干制剂是常用的药剂剂型。冻干过程中一般需要使用赋形剂保护有效成分并提供相应的溶解等性能，甘露醇是冻干药物中最常用的赋形剂之一，但冻干用甘露醇价格较高(人用药和保健品中此问题不明显，但用量大且成本控制要求严格的兽药对此问题敏感)，且在转移因子类的多肽混合物药物中保护效果不佳，寻找适合转移因子的冻干赋形保护剂及方法，特别是兽用/禽用转移因子冻干制剂，在兽药领域中很有意义。

技术实现思路

[0004]为解决现有技术存在的问题，本专利技术提供一种转移因子冻干赋形保护剂，能实现成本和冻干效果的良好平衡。
[0005]为解决其技术问题，本专利技术首先提供了一种转移因子冻干赋形保护剂，包括以下重量份的组分：脱脂乳粉10％、海藻糖5％、聚乙烯吡咯烷酮K
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30 5％、L
‑
亮氨酸0.1％、乳糖0.3％、表面活性剂0.2
‑
0.5％。
[0006]进一步地，所述的表面活性剂为0.5％的脱氧胆酸钠或者0.2％的鼠李糖脂。
[0007]本专利技术还提供一种采用上述冻干赋形保护剂进行转移因子冻干的方法：将液态的转移因子产品50℃真空浓缩至10％，加入冻干赋形保护剂剂，真空冻干。
[0008]本本专利技术的转移因子冻干赋形保护剂成本低廉且能提供良好的保存性能。
具体实施方式
[0009]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。以下对至少一个示例性实施例的描述实际上仅仅是说明性的，绝不作为对本专利技术及其应用或使用的任何限制。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0010]主要原料和试剂：
[0011]猪脾脏：采购自申请人所在地的生猪养殖屠宰企业；有结果对比的实验中尽量使用同一批次，至少为同一来源的猪脾脏；使用前保存于
‑
20℃下。
[0012]生产用水：除专门指出的外，生产用水为申请人自制的二级反渗透纯净水。
[0013]甘露醇、脱脂乳粉、海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮K
‑
30、脱氧胆酸钠、鼠李糖脂、L
‑
亮氨
酸、乳糖、淀粉均购为符合兽药要求的国产产品。
[0014]主要实验方法：
[0015]澄清度检测：
[0016]使用分光光度仪测定600nm光吸收以表征浑浊度。
[0017]E
‑
玫瑰花环形成试验：
[0018]取3mL EDTA抗凝人静脉血，加入等量Hank
’
s液混匀后，用毛细吸管转移至3mL人淋巴细胞分离液上，1500r/min离心15min，吸取淋巴细胞加适量Hank
’
s液洗涤，吹打混匀，1500r/min离心5min，弃上清，洗涤3次后，向沉淀中加入适量RPMI 1640液，混匀，分为两份：
[0019]一份在45℃恒温水浴保温30min，1500r/min离心3min，弃去上清液，加入适量RPMI 1640液，混匀后，置45℃恒温水浴保温30min，取出后以每分钟1500r/min离心5min，弃上清；Hank
’
s液洗涤3次，用Hank
’
s液适当稀释并计数，使最终浓度为每1mL
[0020]中5
×
106个细胞，作为脱E受体外周血单个核细胞悬液。另一份用RPMI 1640液调节使其终浓度为5
×
106/mL，为未脱E受体外周血单个核细胞悬液。
[0021]取绵羊血，用Hank
’
s液洗涤绵羊红细胞3次。加适量Hank
’
s液稀释并计数，使最终浓度为5
×
107/mL)。设实验组、阴性对照组及阳性对照组：阳性对照组管中加未脱E受体T细胞悬液0.2mL；阴性对照组管中加脱E受体胸腺T细胞悬液0.2mL；实验组管中加不同转移因子产品溶液0.1mL(多肽浓度调整为1mg/mL)，脱E受体胸腺T细胞悬液0.2mL；37℃保温1h后，加入绵羊红血球悬液0.2mL，摇匀，500r/min离心3min，放入4℃冰箱过夜，次日取出，弃上清液，每管中各加入0.8％戊二醛0.1mL，摇匀，静置10min，加入吉姆萨染色液2滴,摇匀，静置15min后开始计数，统计实验各组的E玫瑰花环结合的细胞数求得E玫瑰花结合百分率(3批平均值)。
[0022]猪脾转移因子冻干制剂的基本生产方法
[0023](1)挑选去脂肪：猪脾解冻后，将发黑的、有病变组织的不合格脾脏挑出，合格的用剪刀将脂肪组织、系膜、颜色发暗或者肿胀的组织全部剪掉。
[0024](2)清洗：去脂肪后的脾脏用自来水冲洗，用手轻轻搓洗猪脾3分钟后将水放掉排空，连续清洗3次。
[0025](3)消毒：以1kg水加入1g新洁尔配制的消毒剂灭完全浸没脾脏，搅拌均匀后浸泡30分钟，将消毒剂放掉。
[0026](4)清洗：消毒后的脾脏先用纯化水洗一遍，再用0.9％w/v生理盐水洗一遍。
[0027](5)猪脾粉碎：将清洗后的猪脾放入斩拌机内，先低速斩1分钟，再高速斩5分钟，使其变成肉泥。
[0028](6)称量：将粉碎好的猪脾进行称重，然后加入1.5倍重量的0.9％的生理盐水并搅拌均匀。
[0029](7)冻融：将搅拌均匀的猪脾装入桶中，放入冷库或者冰箱中
‑
20℃冷冻24小时，将冻好的猪脾放入室温下的水中解冻，直至全部融化，再放入冷库冷冻，重复3次。
[0030](8)离心：冻融好的组织，离心去掉肉泥。
[0031](9)消泡：视情况不加入或加入适量消泡剂。
[0032](10)酸沉：离心出的上清液边搅拌边加入浓盐酸，至pH 4.0，离心20
‑
30分钟去沉淀。
[0033](11)向酸沉后的液体中边搅拌边加入0.2％w/v(v为酸沉后的液体体积)的壳聚糖，将加入絮凝剂的猪脾液体放入保鲜库，1
‑
2℃絮凝48小时。
[0034](12)絮凝后的液体离心20
‑
30分钟，取上清液。
[0035](13)上清液过0.45微米的滤膜。
[0036](14)50℃真空浓缩至体积的10％，加入冻干赋形保护剂，真空冻干，冻干曲线如表1所示。
[0037]表1冻干本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种转移因子冻干赋形保护剂，其特征在于，包括以下重量份的组分：脱脂乳粉10％、海藻糖5％、聚乙烯吡咯烷酮K
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30 5％、L
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亮氨酸0.1％、乳糖0.3％、表面活性剂0.2
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0.5％。2.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜新永，刘长太，刘爽，李先胜，张得彦，
申请(专利权)人：青岛润达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：