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一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法技术

技术编号:3786571 阅读:964 留言:1更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术涉及一种鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)的表达和纯化,特别涉及一种鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)的可溶性表达及纯化方法。属生物化学领域。本发明专利技术通过载体构建将MMLV-RT基因和肠激酶酶切位点克隆到pET28a载体中,在低温的条件下MMLV-RT与分子伴侣共表达,蛋白的表达量提高到15%,而可溶性是常规方法表达的10倍。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种重组鼠白血病病毒逆转录酶(MMLV-RT)在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化方法:其特征是:通过载体构建将MMLV-RT基因和肠激酶(enterokinase,EK)酶切位点克隆到pET28a载体中,在低温条件下通过与分子伴侣(TF,GroEL和GroES)共表达,来提高蛋白表达量和可溶性。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:孙启明徐卫国陈宇
申请(专利权)人:孙启明徐卫国
类型:发明
国别省市:32[中国|江苏]

网友询问留言 已有1条评论
  • 来自[浙江省绍兴市电信] 2014年12月08日 16:34
    逆转录reversetranscription是以RNA为模板合成DNA的过程即RNA指导下的DNA合成此过程中核酸合成与转录DNA到RNA过程与遗传信息的流动方向RNA到DNA相反故称为逆转录逆转录过程是RNA病毒的复制形式之一需逆转录酶的催化逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现是对中心法则的重要修正和补充人们通过体外模拟该过程以样本中提取的mRNA为模板在逆转录酶的作用下合成出互补的cDNA构建cDNA文库并从中筛选特异的目的基因该方法已成为基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略之一
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