一种芽孢杆菌菌株及其在提高白酒酿造过程中4-乙烯基愈创木酚含量中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种芽孢杆菌菌株及其在提高白酒酿造过程中4

【技术实现步骤摘要】
一种芽孢杆菌菌株及其在提高白酒酿造过程中4
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乙烯基愈创木酚含量中的应用


[0001]本专利技术属于酿酒微生物
，具体涉及一种芽孢杆菌菌株及其在提高白酒酿造过程中4
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乙烯基愈创木酚含量中的应用。

技术介绍

[0002]中国白酒是世界六大蒸馏酒之一，有着独特的酿造工艺和深厚的文化底蕴，在世界各类蒸馏酒中独树一帜。中国白酒主要包含了98％～99％的乙醇和水，以及1％～2％的风味成分，其决定了白酒的香型和口感。近年来，随着“健康中国”国家发展战略的提出，白酒消费观念的改变，健康舒适饮酒的理念深入人心。对白酒的研究从解析其成分到究其源头，找到关键发酵微生物，从而实现整个发酵体系的代谢可控为目标。芽孢杆菌是中国白酒酿造过程中影响酒体品质的重要微生物之一，对白酒品质提升有着重大意义。
[0003]4‑
乙烯基愈创木酚(4
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vinylguaiacol，4
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VG)是一种特殊挥发性成分，具有烘焙香、坚果香以及辛香，感官阈值较低，为0.3mg/L，其不仅是白酒中的主要香味成分之一，也是医药合成中间体，具有健康功能性。阿魏酸是存在于酒醅小麦中天然物质，是4
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VG的前体物质，由于沸点较高，无法有效蒸出，最终成为丢糟弃用。目前利用微生物自然发酵生产4
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VG的相关报道有：如专利CN201510748054.0提到利用地衣芽孢杆菌71722进行生物发酵，以阿魏酸底物，当阿魏酸添加量为100mM时，发酵获得55.37mM 4
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VG；专利CN201310413429.9提出：将液体种子液接种到液体发酵培养基中，并依次加入木聚糖酶和阿魏酸酯酶，培养制得含有4
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乙烯基愈创木酚的发酵液；发酵液经过滤、萃取、静置分相，制得含有4
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乙烯基愈创木酚的萃取液，将萃取液真空蒸发，制得4
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乙烯基愈创木酚产品。两者在白酒酿造过程中增加了一定的生产成本和工艺上的繁琐程序。

技术实现思路

[0004]本专利技术针对上述现有技术的不足，提供了一种芽孢杆菌菌株及其在提高白酒酿造过程中4
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乙烯基愈创木酚含量中的应用。
[0005]本专利技术在自身的微生物体系中，不引入外来菌种，挖掘发现的芽孢杆菌Bacillus sp.B100，在做成强化曲后，能够利用酒醅五粮中天然存在的阿魏酸，提高酒醅中阿魏酸的利用率，实现酒醅的高附加值利用，同时提高酒体中健康成分4
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乙烯基愈创木酚的含量，该方法未额外添加，无食品安全风险。
[0006]本专利技术芽孢杆菌菌株，从古井贡酒高温大曲中获得，分类命名为Bacillus sp.B100，已送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO：M 20221674，保藏日期为2022年10月26日。
[0007]本专利技术芽孢杆菌Bacillus sp.B100的应用，是以其制备强化大曲，在发酵过程中，利用酒醅中天然存在的阿魏酸，转化成4
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乙烯基愈创木酚，提高白酒中4
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乙烯基愈创木酚含量。
[0008]本专利技术提供的芽孢杆菌Bacillus sp.B100具有高产4
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乙烯基愈创木酚的能力。将Bacillus sp.B100制成强化大曲后，使其参与到酒醅发酵过程，消耗酒醅中天然存在的阿魏酸，使其转化成4
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乙烯基愈创木酚，并在蒸馏环节，随着酒蒸出。
[0009]具体包括如下步骤：
[0010](1)从斜面试管中挑取单个Bacillus sp.B100菌株，于LB液体培养基(市购，下同)中培养20～24h；
[0011](2)将步骤1得到的菌悬液按照5％～10％接种量，接入种子罐中进行二级培养，培养基采用LB液体培养基，37℃培养1～2天后，再按照5％～10％接种量转移至发酵罐中进行三级培养，37℃培养2～3天，三级培养采用培养基配方为：2％～3％粉碎的高粱，加水煮沸30min，冷却至室温；将得到的菌悬液接种到麸皮上，经过摊晾后，得到强化大曲。
[0012](3)在酒醅入池发酵时加入强化大曲，发酵45～60天。
[0013]进一步地，步骤(3)中，强化大曲的添加量为生产用粮质量的0.1％～0.5％。
[0014]本专利技术的优点在于：所述的Bacillus sp.B100在制成强化大曲后，既提高了酒醅中阿魏酸的利用率，避免了资源浪费，又提高了酒中的健康成分4
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乙烯基愈创木酚的含量。
附图说明
[0015]图1为Bacillus sp.B100菌落照片(左)和菌体革兰氏染色显微照片(右)。
[0016]图2为4
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乙烯基愈创木酚GC
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MS谱图。
具体实施方式
[0017]下面通过具体的实施方案叙述本专利技术。除非特别说明，本专利技术中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法，另外所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0018]实施例1：Bacillus sp.B100的分离和鉴定
[0019]1、取中高温大曲(安徽古井贡酒股份有限公司)，破碎称重10g，到90mL生理盐水中，振荡混匀后取上清液进行逐级稀释至10
‑5，将10
‑5稀释液进行涂布到营养琼脂平板中，37℃培养箱中培养1天，对单个菌落进行划线后培养，重复两次得到纯化菌株。
[0020]2、菌落在平板上表现为表面粗糙不透明，呈污白色，显微镜下观察确定为革兰氏阳性菌(见图1)。
[0021]3、菌株鉴定。对纯化后的菌株进行16S rDNA鉴定。测序结果在GenBank上进行BLAST比对，确定该菌株为芽孢杆菌属。该菌株已送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCC NO：M 20221674。
[0022]实施例2：芽孢杆菌发酵产生4
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乙烯基愈创木酚
[0023]1、挑取活化后的芽孢杆菌，于市购LB液体培养基中37℃160rpm培养24h；
[0024]2、按照2％的接种量转接到发酵培养基中，37℃培养72h。所述发酵培养基的构成为：麸皮100g/L、葡萄糖10g/L，蒸馏水定容。
[0025]3、取步骤2培养72h的发酵液与等体积10％乙醇混合，稀释100倍后进GC
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MS进行定量分析。检测条件为：HS
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SPME萃取温度为50℃；GC条件：色谱柱为DB
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wax(60m
×
0.25mm
×
0.25μm)；气相色谱进样口温度为250℃，载气为He，流速为1.6mL/min，不分流进样；色谱程序升温条件为：40℃保持2min，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种芽孢杆菌菌株，其特征在于：所述芽孢杆菌菌株的分类命名为Bacillussp.B100，已送至中国典型培养物保藏中心保藏，保藏编号为：CCTCCNO：M20221674，保藏日期为2022年10月26日。2.一种权利要求1所述芽孢杆菌菌株的应用，其特征在于：以所述芽孢杆菌菌株Bacillussp.B100制备强化大曲，在发酵过程中，利用酒醅中天然存在的阿魏酸，转化成4
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乙烯基愈创木酚，提高白酒中4
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乙烯基愈创木酚含量。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于包括如下步骤：(1)从斜面试管中挑取单个Bacillussp.B100菌株，于LB液体培养基中培养20～24h；(2)将步骤1得到的菌悬液按照5％...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘青阳，陆玮，张松祥，杨贞，
申请(专利权)人：安徽古井贡酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：