一种预测实体瘤免疫检查点阻断剂治疗反应性的B细胞特征检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种预测实体瘤免疫检查点阻断剂治疗反应性的B细胞特征检测试剂盒。本发明专利技术运用套索回归和二分类Logistic回归筛选与多种实体肿瘤免疫治疗疗效相关的B细胞特征基因，并评估其在预测模型中的影响，加权计算形成B细胞特征评分(B cell signature)，经过多个免疫治疗转录组数据库验证可用于预测非小细胞肺癌、膀胱癌、肾透明细胞癌、食管腺癌和黑色素瘤经过免疫检查点阻断剂治疗后的生存获益。该方法相较现有免疫治疗预测生物标记物具有良好的预测效能与稳定性，并拥有检测简便、准确性高、患者获益大的优点，有很好的应用前景。前景。前景。

【技术实现步骤摘要】
一种预测实体瘤免疫检查点阻断剂治疗反应性的B细胞特征检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种预测实体瘤免疫检查点阻断剂治疗反应性的B细胞特征检测试剂盒，属于分子诊断


技术介绍

[0002]免疫检查点阻断剂治疗作为新兴的免疫治疗手段在包括非小细胞肺癌、肾透明细胞癌、黑色素瘤等多种类型实体肿瘤中展现了良好的疗效，为进展期肿瘤患者提供了辅助治疗选择。目前临床常用免疫检查点阻断剂主要包括anti
‑
PD
‑
1、anti
‑
PD
‑
L1与anti
‑
CTLA4单抗，通过阻断免疫检查点介导的免疫抑制信号重新激活抗肿瘤免疫反应，诱导各类免疫细胞识别杀伤肿瘤。然而临床实践中发现其疗效只体现在一小群肿瘤患者中，对具体患者的治疗反应性预测仍是重要研究问题。目前的免疫治疗反应性生物标记物包括PD
‑
L1、CD8、CXCL9、TMB等并不能提供稳定的预测效能。这表明，在具有高度复杂性的肿瘤微环境中，存在着其他免疫因素影响治疗反应性，对这些因素的研究是临床上开发肿瘤个体化精准免疫治疗的重要基础。
[0003]免疫检查点抑制剂发挥抗肿瘤作用依赖于肿瘤局部免疫细胞的浸润。在肿瘤微环境中浸润大量的B淋巴细胞，然而由于B细胞的复杂功能与高度异质性，对于整体B细胞数量的检测并不能很好提示肿瘤患者的预后与治疗响应性。过往研究证实特定的与三级淋巴结构高度相关的生发中心GCB细胞亚群的细胞能够预测更好的免疫治疗反应性。而另一群发挥免疫调节作用的Breg亚群则介导了肿瘤的免疫逃逸与不良治疗反应性。与此同时，不同的B细胞亚群表达不同水平的B细胞特征基因，包括GCB细胞特征、记忆B细胞特征、抗体类别转换重组特征等。总的来说，在肿瘤局部占主导的B细胞亚群特征是决定患者对于免疫治疗反应性的关键因素，而局部B细胞亚群特征可以从肿瘤组织转录组基因测序结果中得到反应。因此检测肿瘤局部B细胞特征对于决定精准治疗手段，预后评估和减轻社会负担意义重大。
[0004]然而目前公认的细胞功能特征检测手段例如流式细胞术、单细胞测序、质谱法等技术由于成本高、操作繁琐、对检测组织质量要求高等原因尚未成为临床常规项目。因此，开发一种实用性强，准确性高的检测方法对于临床患者免疫治疗反应性预测显得尤为重要。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是：针对现有细胞功能特征检测方法存在的问题与缺陷，提出一种通过检测一组实体瘤中B细胞特征基因以预测免疫检查点阻断剂治疗反应性。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供了检测试剂在制备预测实体瘤免疫检查点阻断剂治疗反应性试剂盒中的应用，所述检测试剂由检测以下B细胞特征基因表达量的试剂组成：LMO2、GPR183、BTNL9、FGR、MYC、PTGDS、STAT5A、UQCRH、RBP5、BHLHE40、DDX21、CD2、COX5A；所
述检测试剂作为试剂盒实现预测实体瘤免疫检查点阻断剂治疗反应性的唯一关键成分。
[0007]优选地，所述试剂盒内还包括说明书，所述说明书记载如下评分公式：
[0008]B细胞特征评分＝(0.104
×
LMO2)+(
‑
0.008
×
GPR183)+(0.069
×
BTNL9)+(0.032
×
FGR)+(
‑
0.004
×
MYC)+(
‑
0.004
×
PTGDS)+(0.039
×
STAT5A)+(
‑
0.004
×
UQCRH)+(0.005
×
RBP5)+(
‑
0.004
×
BHLHE40)+(
‑
0.010
×
DDX21)+(0.007
×
CD2)+(
‑
0.006
×
COX5A)；
[0009]其中，各基因代表的是各基因表达量的TPM值。
[0010]优选地，所述实体瘤包括非小细胞肺癌、尿路上皮癌、肾透明细胞癌、食管腺癌和黑色素瘤。
[0011]优选地，所述检测样本为实体瘤肿瘤组织样本。
[0012]优选地，各肿瘤对应截断值分别为：非小细胞肺癌：
‑
1.762、尿路上皮癌：
‑
0.237、肾透明细胞癌：0.745、食管腺癌：2.271、黑色素瘤：0.908；
[0013]当检测样本B细胞特征评分高于截断值时，代表该患者对于免疫检查点阻断剂治疗具有良好反应性；当检测样本B细胞特征评分低于截断值时，代表该患者对于免疫检查点阻断剂治疗具有不良反应性。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0015](1)本专利技术首次提出了通过检测一组基因组合物的表达量，用于评估肿瘤局部B细胞特征以预测免疫检查点阻断剂治疗反应性，可以有效指导实体肿瘤患者的个体化免疫治疗，提高临床获益，同时避免不必要的医疗资源浪费；
[0016](2)传统手段检测肿瘤局部B细胞特征以预测免疫检查点阻断剂治疗反应性的方法目前在临床上属于非常规检测项目，且操作繁琐、费用较高；本专利技术可通过临床上已应用的转录组RNA测序技术检测肿瘤组织的基因序列，评估肿瘤局部B细胞特征以预测免疫检查点阻断剂治疗反应性，此技术可以检测新鲜肿瘤组织或冻存、石蜡包埋肿瘤组织，对组织细胞数量要求低，具有经济实惠、准确性高、灵敏度和特异性好的优点。
附图说明
[0017]图1为LASSO回归中均系数与方差随着log(λ)的变化曲线；
[0018]图2为验证该评分在各肿瘤中对免疫治疗反应性的预测能力；
[0019]图3为非小细胞肺癌、尿路上皮癌、肾透明细胞癌高评分组和低评分组经免疫治疗后生存差异曲线；
[0020]图4为食管腺癌和黑色素瘤高评分组和低评分组经免疫治疗后生存差异曲线；
[0021]图5为不同免疫检查点阻断剂治疗生物标记物预测能力的比较。
具体实施方式
[0022]为使本专利技术更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
[0023]实施例
[0024](一)测量肿瘤基因序列评估局部B细胞特征以预测免疫检查点阻断剂治疗反应性的方法的评分模型构建
[0025]首先从GO29293肿瘤免疫检查点阻断剂治疗数据库中获得451个肿瘤样本数据，包括非小细胞肺癌(n＝81)，肾透明细胞癌(n＝162)和尿路上皮癌(n＝208)。根据RECIST 1.1
标准将样本分为响应组(n＝232)和非响应组(n＝219)，通过对451例样本的B细胞相关基因的表达量数据以TPM形式进行LASSO回归分析，从而得到了肿瘤B细胞相关基因中与患者免疫治疗响应性显著相关的基因，最终挑选出14个基因为：本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测试剂在制备预测实体瘤免疫检查点阻断剂治疗反应性试剂盒中的应用，其特征在于，所述检测试剂由检测以下B细胞特征基因表达量的试剂组成：LMO2、GPR183、BTNL9、FGR、MYC、PTGDS、STAT5A、UQCRH、RBP5、BHLHE40、DDX21、CD2、COX5A；所述检测试剂作为试剂盒实现预测实体瘤免疫检查点阻断剂治疗反应性的唯一关键成分。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒内还包括说明书，所述说明书记载如下评分公式：B细胞特征评分＝(0.104
×
LMO2)+(
‑
0.008
×
GPR183)+(0.069
×
BTNL9)+(0.032
×
FGR)+(
‑
0.004
×
MYC)+(
‑
0.004
×
PTGDS)+(0.039
×
STAT5A)+(
‑
0.004
×
UQCRH)+...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宏宇，古杰，刘荣花，葛棣，张宇琛，胥丰恺，马腾，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：