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捕获与释放含CD44抗原的细胞的组合物及其方法技术

技术编号:37848156 阅读:14 留言:0更新日期:2023-06-14 22:34
一种捕获与释放含CD44抗原的细胞的组合物及其方法,包括胆固醇

【技术实现步骤摘要】
捕获与释放含CD44抗原的细胞的组合物及其方法


[0001]本专利技术涉及一种细胞来源物质的检测组合物,特别涉及一种应用于电化学方法,对来自于如:干细胞的生物物质实施定性和定量的检测的组合物及其方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞是一种多能干细胞,它具有干细胞的所有共性,即自我更新和多向分化能力。近年来,间充质干细胞(MSCs)因其在细胞治疗方面的巨大潜力而备受关注。事实上,它们分泌多种感兴趣的免疫调节因子,用于治疗免疫相关疾病和炎症疾病。MSCs可以从人体的多个组织中提取。然而,有几个因素可能会限制它们在临床应用中的应用,例如,隔离需要侵入性程序,数量有限,以及根据来源或供体组织的异质性。由于间充质干细胞治疗在临床应用过程中依然面临着许多挑战,因此,建立一种高效灵敏的间充质干细胞捕获、释放以及定量分析方法进而开展更为深入的生物学研究显得尤为重要。
[0003]在许多能够强效抵抗蛋白质吸附的非生物污染材料中,脂基材料被认为是最接近生物系统的,它为细胞

细胞和细胞

生物材料的相互作用创造了一个细胞膜模拟环境。这类脂基材料由于自身的非极性和惰性化学性质,能够有效的避免溶液中各类非感兴趣物质的吸附,因此能做到强效防污。近年来,电化学技术与自组装单分子膜、脂双层膜、Langmuir

Blodgett层和支持脂双层膜结合所制备的电化学生物传感技术层出不穷,利用脂双层优良特性分离细胞的技术也有报道,为细胞捕获和释放新策略发展提供了理论依据。
专利技术内容
[0004]本专利技术的一个目的在于提供一种捕获与释放含CD44抗原的细胞的组合物,应用于电化学检测细胞的捕获与释放。
[0005]本专利技术的另一个目的在于提供一种捕获与释放含CD44抗原的细胞的方法,通过电化学方法对细胞释放进行有效监视。
[0006]本专利技术的再一个目的在于提供一种捕获与释放含CD44抗原的细胞的方法,获取差异化的电化学信号检测细胞。
[0007]本专利技术的又一个目的在于提供一种捕获与释放含CD44抗原的细胞的方法,实现细胞的定量检测。
[0008]CD44抗原是一组分布广泛、分子量为(85~160)
×
10kD的多分子形式的膜整合蛋白,含糖量很高。CD44分子量范围为85~250kD,介导细胞与细胞间及细胞与细胞外基质间的相互作用,也是由胞外、跨膜及胞质三个部分构成的糖蛋白,糖链为硫酸软骨素和硫酸乙酰肝素。
[0009]本专利技术构建了脂双层膜修饰电极,利用脂双层与胆固醇分子之间的高亲和力实现核酸适体的固定,进而结合博来霉素

亚铁离子复合物(博来霉素

亚铁复合物)的核酸切割活性,实现了含有CD44抗原的细胞的捕获、释放和检测。对于间充质干细胞的意义尤为重
大。
[0010]一种捕获与释放含CD44抗原的细胞的组合物,应用于电化学检测细胞的捕获与释放,包括:
[0011]胆固醇

适体,其所含的核苷选序列如下,5'含有胆固醇基团:
[0012]5'

Cholesteryl

AAAGCGCGTAAGTGAAATGAGATTCATCACGCGCATAGTCCCAAGGCCTGCAAGGGAACCAAGGACACAGCGACTATGCGATGATGTCTTC

3';
[0013]银纳米修饰适体,其所含的核苷选序列如下:
[0014]5'

CCCCCCCCCCCCGAGATTCATCACGCGCATAGTCCCAAGGCCTGCAAGGGAACCAAGGACACAGCGACTATGCGATGATGTCTTC

3';和
[0015]博来霉素

亚铁离子复合物。
[0016](1)相较于金电极而言,脂双层膜修饰电极能够避免复杂环境中的非特异性吸附,同时具有更高的生物相容性和稳定性用于核酸探针分子的固定。
[0017](2)博来霉素与二价铁离子结合形成的博来霉素

亚铁复合物可以在氧气作用下特异性地切割5'

GT和5'

GC序列,高效地释放所捕获的间充质干细胞以及细胞表面结合的信号探针。
[0018](3)可以通过与电化学生物芯片传感器阵列相结合,实现更为便利的含有CD44抗原的细胞(如:间充质干细胞)捕获、检测和释放。
[0019]本专利技术的组合物,还包括功能化的金电极,具体为:脂双层的功能化金电极。
[0020]一种制取脂双层的功能化金电极的实施方式,先将金电极置于0.5M~0.6M H2SO4溶液中,在0~1.6V电压范围内进行循环伏安扫描,扫描圈数为25~30,随后用氮气吹干电极。
[0021]接着,将含有2~2.5mM DPPTE的乙醇溶液加入到金工作电极表面,并在室温下孵育16~20小时,通过Au

S相互作用形成第一脂质层。
[0022]之后,用乙醇冲洗电极并用20~25mg/mL DPPC溶液处理5~7分钟后将电极置于

20℃下30~40分钟,然后转移到室温下再放置30~40分钟以形成脂双层膜,制得脂双层的功能化金电极。
[0023]一种捕获与释放含CD44抗原的细胞的方法,包括:
[0024]把功能化金电极置于含有1~2μM胆固醇

适体和10~15mM PBS的溶液中,放入4℃避光反应2~3个小时之后,用5~10mLPBS冲洗电极表面;
[0025]将含有CD44的细胞溶液与功能化的金电极共孵育1.5~2h,用PBS清洗2~3次以去除没有捕获的细胞,然后将1~1.5μM银纳米修饰适体加入到捕获细胞的电极上,室温反应1~1.5h。
[0026]最后,加入45~50μM的博来霉素

亚铁复合物,反应60~65min,收集反应液体。以500~1000rpm对获取的反应溶液进行离心分离,下层沉淀物为释放的细胞,收集。
[0027]对修饰电极表面进行捕获与释放的电化学阻抗表征,三电极系统包括工作电极为脂双层修饰电极,饱和的甘汞电极作为参比电极和铂丝作为对电极。
[0028]在离心获取的上清溶液加入0.5~1M硝酸溶液于室温反应2h,使用溶出伏安法将银离子富集到石墨电极上。随即用0.5~1M乙酸钠电解液以差分脉冲伏安法在

0.4V到0.4V的范围来检测银纳米颗粒的电化学信号。用CHI660c电化学工作站来进行电化学测量。三电
极系统包括工作电极为石墨电极,饱和的甘汞电极作为参比电极和铂丝作为对电极。
[0029]经验证,本专利技术的方法在外泌体浓度范围为102个细胞/mL至106个细胞/mL与得到的电化学信号呈线性相关,能在此浓度范围内实现定量化的电化学检测。线性方程为I(微安)本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种捕获与释放含CD44抗原的细胞的组合物,应用于电化学检测细胞的捕获与释放,包括:胆固醇

适体,其所含的核苷选序列如下,5'含有胆固醇基团:5'

Cholesteryl

AAAGCGCGTAAGTGAAATGAGATTCATCACGCGCATAGTCCCAAGGCCTGCAAGGGAACCAAGGACACAGCGACTATGCGATGATGTCTTC

3';银纳米修饰适体,其所含的核苷选序列如下:5'

CCCCCCCCCCCCGAGATTCATCACGCGCATAGTCCCAAGGCCTGCAAGGGAACCAAGGACACAGCGACTATGCGATGATGTCTTC

3';和博来霉素

亚铁离子复合物。2.根据权利要求1所述的捕获与释放含CD44抗原的细胞的组合物,其特征在于所述的细胞为间充质干细胞。3.根据权利要求1所述的捕获与释放含CD44抗原的细胞的组合物,其特征在于还包括脂双层功能化的金电极。4.根据权利要求3所述的捕获与释放含CD44抗原的细胞的组合物,其特征在于按如下方法制取所述的脂双层功能化的金电极:先将金电极置于0.5M~0.6M H2SO4溶液中,在0~1.6V电压范围内进行循环伏安扫描,扫描圈数为25~30,随后用氮气吹干电极;接着,将含有2~2.5mM DPPTE的乙醇溶液加入到金工作电极表面,并在室温下孵育16~20小时,通过Au

S相互作用形成第一脂质层;之后,用乙醇冲洗电极并用20~25mg/mL DPPC溶液处理5~7分钟后将电极置于

20℃下30~40分钟,然后转移到室温下再放置30~40分钟以形成脂双层膜,制得脂双层的功能化金电极。5.根据权利要求1所述的捕获与释放含CD44抗原的细胞的组合物,其特征在于还包括石墨电极,饱和的甘汞电极和铂丝。6.一种捕获与释放含CD44抗原的细胞的方法,其特征在于包括:把功能化金电极置于含...

【专利技术属性】
技术研发人员:章毅伍婷陈侃俊胡肖希陈亮
申请(专利权)人:中国干细胞集团上海生物科技有限公司中国干细胞集团海南博鳌附属干细胞医院有限公司重庆市干细胞技术有限公司上海市干细胞技术有限公司陕西省干细胞技术有限公司苏州市干细胞技术有限公司三亚市干细胞技术有限公司
类型:发明
国别省市:

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