一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂及其制备方法技术

一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂及其制备方法。本发明专利技术属于药物制剂领域。本发明专利技术的目的是为了解决现有靶向纳米载药制剂存在的受体配体特异性结合作用力差而导致容易脱靶的技术问题。本发明专利技术的一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂由药物、包载药物的载体及靶向材料构成，所述载体为介孔二氧化硅纳米粒，所述靶向材料为透明质酸和纳米抗体偶联而成的具有双靶向功能的分子。本发明专利技术的透明质酸和纳米抗体肿瘤靶向纳米粒的制备方法简单、反应条件温和，药物释放具有明显的pH及氧化还原响应性，并且具有良好的生物相容性和肿瘤靶向性，精准杀伤肿瘤细胞而对正常细胞影响较小。精准杀伤肿瘤细胞而对正常细胞影响较小。精准杀伤肿瘤细胞而对正常细胞影响较小。

【技术实现步骤摘要】
一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂及其制备方法


[0001]本专利技术属于药物制剂领域，具体涉及一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]恶性肿瘤已成为严重威胁人类生命健康与安全的一个主要因素，其中结直肠癌是全球第三大恶性肿瘤，同时，结直肠癌死亡人数位居癌症死亡人数第二。目前，治疗结直肠癌的方式包括手术、化疗、放疗、生物免疫以及手术结合辅助化疗，现阶段主要是手术结合辅助化疗的方式治疗结直肠癌，但由于结直肠癌发病机制复杂且化疗药物存在可溶性差、毒副作用大的弊端，研究人员仍没有找到治疗结直肠癌的最优方法。肿瘤精准靶向治疗，可在不损伤正常组织的情况下，实现对病变部位癌细胞的精准清除，是当今抗肿瘤药物研究的热点。
[0003]受体介导的主动靶向是指以肿瘤高度表达的特异性受体为靶点，利用相应配体修饰纳米载体，将药物递送到阳性表达受体的肿瘤细胞中，表现出更好的特异性。结直肠癌细胞表面受体种类较多，如细胞因子受体、白细胞介素
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4α受体、叶酸受体、CD44受体、癌胚抗原CEA等，依据表面受体特性制备药物传递系统的研究越来越多。其中，CD44受体是各种癌细胞中普通存在的跨膜蛋白，尤其在一些原发性和转移性结直肠癌的表面高度表达。CEA是目前应用最广泛的结直肠癌血液标记物，术前检测患者血清CEA对转移性患者的诊断与治疗意义更大。利用抗体药物治疗癌症是一个快速发展的领域，纳米抗体是目前研究最热的抗体药物之一，未来将在癌症治疗中发挥不可估量的作用。特异性识别抗原的纳米抗体与携带药物的纳米粒结合，可以定向杀死病变细胞。
[0004]介孔二氧化硅纳米粒(MSNs)是一种新型的无机介孔纳米材料，因其具有巨大的比表面积和孔积，高度有序的介孔结构，对药物具有较高的包封率与载药量，并且能够长效、缓释药物。因此，介孔二氧化硅是制备抗癌靶向药物的优良载体，在生物医学领域具有广阔的应用前景。但现有靶向纳米载药制剂仍然存在诸多问题，例如由于受体配体特异性结合作用力差而容易“脱靶”，进而导致对正常细胞损伤大的问题，因此亟待开发一种综合性能优异的靶向纳米载药制剂。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是为了解决现有靶向纳米载药制剂存在的受体配体特异性结合作用力差而导致容易脱靶的技术问题，而提供一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂及其制备方法。
[0006]本专利技术的一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂由药物、包载药物的载体及靶向材料构成，所述载体为介孔二氧化硅纳米粒，所述靶向材料为透明质酸和纳米抗体偶联而成的具有双靶向功能的分子。
[0007]进一步限定，所述药物为阿霉素，所述纳米载药制剂中阿霉素的质量分数≥26％。
[0008]进一步限定，所述介孔二氧化硅纳米粒与纳米抗体的质量比为(10～30):1。
[0009]进一步限定，所述透明质酸与介孔二氧化硅纳米粒的质量比为(0.5～2):1。
[0010]进一步限定，所述透明质酸的分子量为50KDa～70KDa。
[0011]本专利技术的一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂的制备方法按以下步骤进行：
[0012]步骤1：将介孔二氧化硅纳米粒超声分散于PBS缓冲溶液中，然后加入阿霉素的水溶液，室温避光搅拌过夜，将沉淀离心洗涤后，得到载阿霉素的介孔二氧化硅纳米粒；
[0013]步骤2：将透明质酸溶于水，调节pH值至4.7～6.0，加入1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N
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羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化1h～1.5h，然后调节pH值至7～8，得到活化的透明质酸溶液；
[0014]步骤3：将步骤1得到的载阿霉素的介孔二氧化硅纳米粒重新分散于PBS缓冲溶液中，加入步骤2活化的透明质酸溶液，室温避光搅拌反应过夜，将沉淀离心洗涤后，得到载阿霉素的透明质酸修饰的介孔二氧化硅纳米粒；
[0015]步骤4：将步骤3得到的载阿霉素的透明质酸修饰的介孔二氧化硅纳米粒重新分散于PBS缓冲溶液中，加入聚乙二醇化的纳米抗体的PBS溶液，4℃避光搅拌反应过夜，将沉淀离心洗涤后，得到纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂。
[0016]进一步限定，步骤1中所述介孔二氧化硅纳米粒的制备方法步骤如下：
[0017](1)将十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)加入到由水、乙二醇和浓氨水组成的混合溶液中，在45～55℃的水浴中剧烈搅拌25min～35min后，加入正硅酸乙酯(TEOS)和3
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氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)，45～55℃下继续搅拌1.5h～2.5h，然后在45～55℃下静置陈化18h～20h，离心分离后沉淀用去离子水和无水乙醇交替清洗，真空干燥过夜，得到二氧化硅纳米粒；
[0018](2)采用离子交换法去除有机模板剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，得到具有介孔结构的二氧化硅纳米粒，即介孔二氧化硅纳米粒。
[0019]进一步限定，步骤(1)中所述正硅酸乙酯、3
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氨丙基三乙氧基硅烷、十六烷基三甲基溴化铵、浓氨水、乙二醇、水的物质的量的比为1:(0.15～0.2):(0.15～0.2):(4.5～5):(8～12):(500～600)。
[0020]进一步限定，步骤(1)中所述剧烈搅拌的转速为550rpm～650rpm。
[0021]进一步限定，步骤(1)中所述离心的转速为13000rpm～15000rpm，时间为15min～25min。
[0022]进一步限定，步骤(2)中采用离子交换法去除有机模板剂的具体过程为：步骤(a)：将二氧化硅纳米粒超声分散到NH4Cl的乙醇溶液中，得到纳米粒悬浮液，在搅拌状态下于55～65℃下加热10min～20min，然后离心分离；步骤(b)：重复步骤(a)2～3次，用无水乙醇清洗，离心后真空干燥过夜，完成有机模板剂的去除。
[0023]进一步限定，所述二氧化硅纳米粒和NH4Cl的质量比为(4～6):1。
[0024]进一步限定，所述NH4Cl的乙醇溶液中NH4Cl的质量与乙醇溶液的体积的比为0.2g：(50～100)mL，其中乙醇溶液的体积浓度为95％。
[0025]进一步限定，步骤1中所述PBS缓冲溶液的pH值为7.4，步骤3中PBS缓冲溶液的pH值
为7.4，步骤4中PBS缓冲溶液的pH值为7.4。
[0026]进一步限定，步骤1中所述阿霉素的水溶液中阿霉素的浓度为1.5mg/mL～2.5mg/mL。
[0027]进一步限定，步骤4中所述聚乙二醇化的纳米抗体的PBS溶液的制备过程如下：在纳米抗体的PBS溶液中加入Traut
’
s试剂，于pH值为8的室温条件下孵育0.5h～1.5h，使用超滤管分离纯化，得到硫醇化的纳米抗体的PBS溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂，其特征在于，该纳米载药制剂由药物、包载药物的载体及靶向材料构成，所述载体为介孔二氧化硅纳米粒，所述靶向材料为透明质酸和纳米抗体偶联而成的具有双靶向功能的分子。2.根据权利要求1所述的一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂，其特征在于，所述药物为阿霉素，所述纳米载药制剂中阿霉素的质量分数≥26％。3.根据权利要求1所述的一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂，其特征在于，所述介孔二氧化硅纳米粒与纳米抗体的质量比为(10～30):1。4.根据权利要求1所述的一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂，其特征在于，所述透明质酸与介孔二氧化硅纳米粒的质量比为(0.5～2):1，所述透明质酸的分子量为50KDa～70KDa。5.如权利要求1
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4任意一项权利要求所述的一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂的制备方法，其特征在于，该制备方法按以下步骤进行：步骤1：将介孔二氧化硅纳米粒超声分散于PBS缓冲溶液中，然后加入阿霉素的水溶液，室温避光搅拌过夜，将沉淀离心洗涤后，得到载阿霉素的介孔二氧化硅纳米粒；步骤2：将透明质酸溶于水，调节pH值至4.7～6.0，加入1
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乙基
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(3
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二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N
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羟基琥珀酰亚胺活化1h～1.5h，然后调节pH值至7～8，得到活化的透明质酸溶液；步骤3：将步骤1得到的载阿霉素的介孔二氧化硅纳米粒重新分散于PBS缓冲溶液中，加入步骤2活化的透明质酸溶液，室温避光搅拌反应过夜，将沉淀离心洗涤后，得到载阿霉素的透明质酸修饰的介孔二氧化硅纳米粒；步骤4：将步骤3得到的载阿霉素的透明质酸修饰的介孔二氧化硅纳米粒重新分散于PBS缓冲溶液中，加入聚乙二醇化的纳米抗体的PBS溶液，4℃避光搅拌反应过夜，将沉淀离心洗涤后，得到纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂。6.根据权利要求5所述的一种纳米抗体介导的双重肿瘤靶向介孔二氧化硅纳米载药制剂的制备方法，其特征在于，步骤1中所述介孔二氧化硅纳米粒的制备方法步骤如下：(1)将CTAB加入到由水、乙二醇和浓氨水组成的混合溶液中，在45～55℃的水浴中剧烈搅拌25min～35min后，加入TEOS和APTES，45～55℃下继续搅拌1....

【专利技术属性】
技术研发人员：王婷婷，樊喜英，年锐，刘文帅，孙国川，古一，牟汝华，
申请(专利权)人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：