弓形虫抗体检测方法及金标检测卡和制备方法技术

本发明专利技术涉及一种弓形虫抗体检测方法及快速检卡和制备方法，其检测方法包括（１）将胶体金标记的弓形虫抗原载于载体上，并在与胶体金载体相连的检测载体上包被弓形虫分泌抗原形成的检测线和由抗弓形虫抗体形成的控制线；（２）取人血清滴于胶体金标记的载体上，如血清中有弓形虫抗体则在检测载体上形成检测线，检测载体上检测线、控制线双线为阳性，否则为阴性。该检测卡包括加样端吸水层、检测层和吸水端吸水层，在检测层和加样端吸水层之间设有金标弓形虫抗原层；在检测层上包被有由弓形虫分泌抗原形成的检测线和由抗弓形虫抗体形成的控制线。本发明专利技术的方法为“一步法”快速检测方法灵敏度高、特异性强；且快速、简便，无需专门设施。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于诊断、检测弓形虫抗体的方法，以及用于该方法的弓形虫抗体金标快速检测卡和其制备方法。
技术介绍
弓形虫感染系全球性分布，是最常见的人畜共患寄生虫病。近年来随着人们生活 水平的提高，养猫、狗等宠物的人越来越多，感染弓形虫的机会也随之增多。估计目前感染 者约占世界人口的四分之一以上。弓形虫是一种机会性致病原虫，免疫功能低下是弓形虫 感染率增高的一个主要因素。据国外报道，艾滋病合并弓形虫病占艾滋病人20% 80%， 国外已有较多恶性肿瘤并发弓形虫的报道，而且长期使用免疫抑制剂者或免疫功能受损或 下降者，器官移植者等合并或出现全身性泛发性弓形虫的报道亦逐渐增多。此外，弓形虫感 染也是引起新生儿出生缺陷的一个重要因素，先天性弓形虫感染对优生优育产生的危害极 大，直接影响着人口素质的发展。近年来，许多经济发达国家已将弓形虫检测作为孕期常规 筛查项目，我国也开展了包括弓形虫在内的TORCH检测项目。弓形虫抗体金标快速检测卡 可用弓形虫感染的快速诊断。 本专利技术的公开 本专利技术的第一目的是为了提供一种弓形虫抗体的检测方法，该方法为"一步法"快 速检测方法，灵敏度高、特异性强；而且速度快，操作简便，无需专门设施，适用于临床检测、 流行病学调查等。 本专利技术的第二目的是为了提供一种弓形虫抗体金标快速检测卡，该检测卡针对弓 形虫抗体检测提供一种简便、快速、而且直接的"一步法"检测卡，利用该检测卡检测弓形虫 抗体的灵敏度高、特异性强，而且速度快，操作简便，无需专门设施。 本专利技术的第三个目的是为了提供一种弓形虫抗体金标快速检测卡的制备方法，该 方法简便、稳定性好、重复性好。 本专利技术的第一 目的可通过如下措施来实现 —种弓形虫抗体检测方法，包括下述步骤(l)将胶体金标记的弓形虫分泌抗原载于玻璃纤维或无纺布载体上；并在与胶体金载体相连的硝酸纤维膜(NC)载体上包被弓形虫分泌抗原形成的检测线和由抗弓形虫分泌抗原抗体形成的控制线；(2)取人血清滴于胶体金标记的载体上，如血清中有弓形虫抗体则在检测载体上形成检测线，检测载体上检测线、控制线双线为阳性，否则为阴性。 本专利技术的第二目的可通过如下措施来实现 —种弓形虫抗体金标快速检测卡由检测条和塑料卡盒组成，检测条安装在塑料卡 内。 所述的检测条是在衬板上设有加样端吸水层、检测层和吸水端吸水层，在检测层 和加样端吸水层之间设有金标弓形虫分泌抗原层；在检测层上包被有由弓形虫分泌抗原形 成的检测线和由抗弓形虫抗体形成的控制线。 本专利技术的第三个目的可通过如下措施来实现 —种弓形虫抗体金标快速检测卡的制备方法主要包括金标抗原层和检测层及其 上包被控制线和检测线的制备，以及检测条和检测卡的组装。 所述的金标抗原层的制备方法包括下述步骤i胶体金的制备在浓度为 0. 004 % 0. 012 %的氯金酸中加入其体积的1. 3 % 2 % 、浓度为1 % 3 %的柠檬酸三 钠，煮沸10 20分钟，可得到15 50纳米的胶体金溶液；ii胶体金标记弓形虫抗原，在 胶体金溶液中用0. 2m碳酸钾溶液调0 8. 4，按4 12mg/100ml加入弓形虫抗原， 搅拌后，再在溶液中按0. 1 0. 6g/100ml加入动物血清蛋白，4t:静置2 4小时；iii将 上述胶体金溶液经2000转/分钟离心10 15分钟，去沉淀物，得上清液；iv将上清液 经10000转/分钟离心60 80分钟离心得沉淀物；v将沉淀物按4 10ml/100ml溶于 0. 02MPh7. 4Tris-Hcl缓冲液得胶体金溶液，该缓冲液中含0. 2 % 0. 6 %的动物血清蛋白 和0. 01% 0. 06%叠氮钠；vi将上述胶体金溶液浸入玻璃纤维或无纺布至液体开始渗出 为止，37t:干燥形成金标抗原层。 所述的检测层的制备，在制备的纯化兔或羊抗弓形虫抗体和弓形虫分泌抗原中 加入固定剂，用专用喷膜机在纤维素膜上形成控制线和检测线；其制备方法是在浓度为 0. 8-2. 4mg/ml的抗原或抗体溶液中加入0. 1% -0. 3%的固定剂，利用专用喷膜机将抗原或 抗体在NC膜上喷线，喷膜后37t:干燥，再用含10%小牛血清的0. 01mPH7. OPBS液封闭30 分钟，O. 01mPH7. OPBS漂洗、37。C干燥得检测层。 所述的固定剂选自甲醛、丙酮中的一种。 本专利技术相比现有技术具有如下优点 1、本专利技术的检测弓形虫抗体的方法为一步法，具有高度的特异性和高灵敏度，其 检测快速，结果判定在3 15分钟内完成，无需专门设施。 2、本专利技术的检测卡检测弓形虫抗体时具有高度的特异性和高灵敏度，检测过程操 作迅速、快捷，方便，适合弓形虫感染人群的临床诊断和流行病学调查。 3、本专利技术的检测卡的制备方法简便、稳定性好、重复性好。 图面说明 附图说明图1是本专利技术检测卡的结构示意图 1-检测卡 2-加样孔 3-观察孔 图2是本专利技术检测卡的内部结构示意图 4-加样端吸水层 5-金标抗体层 6- 7-检测线 8-检测层 9- 10-衬板 本专利技术的实施方式 本专利技术还将结合实施例作进一步详述 实施例一 —种弓形虫抗体检测方法，包括下述步骤(l)将胶体金标记的弓形虫抗原载于 玻璃纤维或无纺布载体上；并在与胶体金载体相连的硝酸纤维膜(NC)载体上包被弓形虫 抗原形成的检测线和由抗弓形虫抗体形成的控制线；(2)取人血清滴于胶体金标记的载体 上，如血清中有弓形虫抗体则在检测载体上形成检测线，检测载体上检测线、控制线双线为控制线吸水端吸水层阳性，否则为阴性。 参照图1， 一种弓形虫抗体快速金标检测卡1 参照图2，所述弓形虫抗体金标快速检测卡1是在衬板10上设有加样端吸水层4、 检测层8和吸水端吸水层9，在检测层8和吸水端吸水层9之间设有金标弓形虫抗原层5 ; 在检测层8上包被有检测线7和控制线6。其中加样端吸水层4由多层玻璃纤维或无纺布 制成；吸水端吸水层9由多层滤纸制成；检测层8为纤维素膜，该纤维素膜可为硝酸纤维素 膜、醋酸纤维膜；金标抗原层为玻璃纤维或无纺布浸取胶体金标记抗体制成。 —种金标弓形虫抗体快速检测卡的制备方法包括金标抗原层5和检测层8上检测 线7和控制线6的包被，然后在衬板10上组合弓形虫抗体金标快速检测卡1。在塑料垫板 10的两端分别粘贴加样端吸水层4和吸水端吸水层9 ;在其中断粘贴包被检测线和控制线 的检测层8，在加样端吸水层4与检测层8的交接部位，夹贴金标抗原层5纤维载体，纤维 载体4/5部分夹在加样吸水层4中间，1/5部分叠在检测层8上。然后按4-5毫米宽、8厘 米长规格切条，在组装在塑料卡盒内，盒盖上加样孔2正对检测条加样端吸水层4，观察孔3 正对检测层8。 所述的金标抗原层5的制备方法包括下述步骤i胶体金的制备，取100mg氯金酸 溶于1000ml三蒸水中，加入15ml、在浓度为1%的拧檬酸三钠，煮沸15分钟，可得到15 50纳米的胶体金溶液；ii胶体金标记弓形虫抗原，取100ml胶体金溶液，用0. 2m碳酸钾溶 液调2，入4mg弓形虫抗原，搅拌20分钟，再加入240mg牛血清白蛋白(BSA)，继续搅拌 5分钟，4t:静置2-4小时；iii将上述胶体金溶液经2000转/分钟离心10 15分钟，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种弓形虫抗体检测方法，包括下述步骤：（１）将胶体金标记的弓形虫抗原载于玻璃纤维或无纺布载体上，并在与胶体金载体相连的硝酸纤维膜（ＮＣ）载体上包被弓形虫分泌抗原形成的检测线和由抗弓形虫抗体形成的控制线；（２）取人血清滴于胶体金标记的载体上，如血清中有弓形虫抗体则在检测载体上形成检测线，检测载体上检测线、控制线双线为阳性，否则为阴性。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李克生，杜惠芬，
申请(专利权)人：李克生，
类型：发明
国别省市：62[中国|甘肃]