小胶质细胞特异性表达的MS4A6A在胶质母细胞瘤治疗或预后评估试剂盒上的应用制造技术

本发明专利技术公开小胶质细胞特异性表达的MS4A6A在胶质母细胞瘤治疗或预后评估试剂盒上的应用。本发明专利技术将采用多重免疫荧光染色检测MS4A6A在肿瘤的小胶质细胞内特异性高表达；将小胶质细胞和神经胶质瘤细胞分别置于孵育箱中进行培养；将MS4A6A转染入小胶质细胞使其过表达MS4A6A蛋白，取上清对胶质瘤细胞进行培养；采用CCK8来检测MS4A6A对胶质瘤细胞增殖的影响；采用细胞划痕实验检测MS4A6A对胶质瘤细胞的迁移影响。本发明专利技术提供了一种新的研究脑胶质瘤发生发展的新途径，小胶质细胞高表达MS4A6A能够促进胶质母细胞瘤的发生和发展，发现其治疗胶质瘤可能的分子机制，可应用于胶质瘤的诊断、治疗及预后。治疗及预后。治疗及预后。

【技术实现步骤摘要】
小胶质细胞特异性表达的MS4A6A在胶质母细胞瘤治疗或预后评估试剂盒上的应用


[0001]本专利技术属于癌症诊断
，涉及小胶质细胞特异性表达的MS4A6A在胶质母细胞瘤治疗或预后评估试剂盒上的应用。

技术介绍

[0002]神经胶质瘤(Glioma，也叫胶质瘤或胶质细胞瘤)，胶质瘤是发生率较高的一种原发性恶性神经系统肿瘤，目前认为恶性神经胶质瘤来源于神经干细胞、星形胶质细胞、少突胶质细胞等。世界卫生组织(WHO)中枢神经系统肿瘤分类将脑胶质瘤分为I至IV级，I、II级为低级别脑胶质瘤，III、IV级为高级别脑胶质瘤。胶质母细胞瘤(GBM，glioblastoma)是胶质瘤的最高级别形式，为IV级胶质瘤。GBM也是成人中最常见的神经胶质瘤，是最致命的癌症之一。高度恶性胶质瘤好发于老年人群，极难治愈，易复发，严重威胁人类健康，给家庭和社会带来沉重负担。目前虽然放疗、化疗、手术、抗EGFR治疗、BRAF靶向治疗等多种手段可用于治疗胶质瘤，但对于恶性程度较高的胶质瘤，目前尚缺乏有效的防治7手段，因而迫切需要新的疗法，如靶向治疗、免疫治疗、中药治疗等方式来延长患者的生存期。所以开发新的安全有效的治疗药物、深入研究胶质瘤的调控机制，具有重要的科学和社会意义。
[0003]小胶质细胞是中枢神经系统(CNS)的主要免疫群体，在调节多种生理和病理状况中发挥作用。小胶质细胞是具有记忆样功能的多功能细胞，可与中枢神经系统中的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞相互作用，可对脑内的病理刺激作出快速反应，并参与一系列免疫反应，如病原体检测、损伤后的突触修剪、吞噬凋亡和受损细胞、炎症反应、组织修复等。研究表明，胶质瘤中30
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50％的细胞是小胶质细胞或巨噬细胞(GAMs)，参与了GBM肿瘤微环境的建立，能够促进胶质瘤的生长和迁移。许多重要的小胶质细胞衍生的促炎细胞因子，如CCL2、TNFα、IL
‑
1β、IL
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6等也影响星形胶质细胞活化或星形胶质细胞增生。
[0004]MS4A编码跨膜4A基因家族的成员。随着对MS4A家族成员的深入研究，观察到MS4A蛋白在肺癌、结肠癌、黑色素瘤、胃癌、卵巢癌等多种实体瘤组织中表达异常并发挥多种功能。MS4A6A是跨膜4A基因家族的成员之一。它在造血细胞和非淋巴组织中显示出独特的表达模式。编码该蛋白的基因位于一组家族成员的11q12.1。在MS4A6A(rs610932)的3
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UTR和MS4A4E和MS4A6A(rs670139)之间的基因间区域中发现了相关的SNP。rs610932与小脑和颞叶皮质中MS4A6A的表达水平在相关。MS4A6A被认为通过增加具有促炎表型的小胶质细胞数量而对大脑有害。然而，小胶质细胞特异性表达MS4A6A对胶质母细胞瘤发生发展的机制尚不清楚。
[0005]胶质母细胞瘤是恶性程度最高的胶质瘤，目前尚无有效治疗方法和策略。
①
本专利技术通过分子水平，细胞水平深入探讨MS4A6A作用胶质瘤的机制，从分子水平MS4A6A治疗胶质瘤的作用机制；
②
提供MS4A6A的新应用在制备检测试剂、胶质瘤诊断、肿瘤药物对胶质瘤的治疗效果以及胶质瘤预后评估为临床应用奠定基础。
③
本专利技术并非针对肿瘤细胞本身，而是针对小胶质细胞介导胶质瘤途径，为胶质瘤的诊断和治疗的提供新方法、新思路。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一目的是针对现有技术的不足，提供一种MS4A6A基因在制备用于胶质瘤治疗或预后评估的试剂盒中的应用。
[0007]本专利技术的第二目的是一种胶质瘤治疗或预后评估的试剂盒，包括用于检测分子标志物MS4A6A基因表达水平的试剂。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供一种胶质瘤治疗或预后评估药物，为MS4A6A基因抑制剂。
[0009]本专利技术的第四个目的是提供一种药物组合物，包括MS4A6A基因抑制剂。
[0010]作为优选，还包括药学上可接受的载体。
[0011]本专利技术的第五个目的是提供一种用于检测MS4A6A基因的试剂在制备用于胶质瘤诊断或预后评估的试剂盒中的应用。
[0012]作为优选，所述检测MS4A6A基因的试剂选自：对MS4A6A基因具有检测特异性的探针、基因芯片。
[0013]作为优选，MS4A6A通过在小胶质特异性高表达参与促进胶质瘤的生长。
[0014]本专利技术通过以下技术方案实现：
[0015]本专利技术采用免疫应荧光双重染色确定MS4A6A为小胶质细胞特异性表达蛋白；采用western blot检测人胶质瘤样本中MS4A6A表达情况；将小胶质细胞、神经胶质瘤细胞置于孵育箱中分别进行培养；将MS4A6A质粒转染入小胶质细胞；采用CCK8、免疫荧光、细胞克隆来检测小胶质细胞特异性表达的MS4A6A对胶质瘤细胞增殖的影响；采用细胞划痕和transwell实验检测小胶质细胞特异性表达的MS4A6A对胶质瘤细胞的迁移影响。
[0016]本专利技术研究小胶质细胞特异性表达的MS4A6A对胶质瘤细胞生长的影响，经研究发现，MS4A6A可明显促进胶质瘤的生长，可通过促进胶质瘤细胞的增殖、迁移来实现。因此，本专利技术既可为胶质瘤的治疗提供了新的思路，也可为抗肿瘤药物的开发提供物质基础。
[0017]所述神经胶质瘤细胞为大鼠胶质瘤细胞株C6，小胶质细胞为小鼠小胶质细胞Bv2。
[0018]所述孵育箱中CO2浓度为5％，培养温度为37℃，细胞培养基为含10％Fetal Bovine Serum(FBS)以及1％Penicillin
‑
Streptomycin(PS)的DMEM。
[0019]因此，本专利技术具有以下有益效果：
[0020](1)通过MS4A6A转染入小胶质细胞，取用其上清处理胶质瘤细胞，易于操作，并且成功率高，效果良好；
[0021](2)既可为胶质瘤的研究和诊断提供了新的思路，也可为抗肿瘤药物的开发提供物质基础。
附图说明
[0022]图1为MS4A6A基因DNA序列；
[0023]图2为MS4A6A蛋白在GBM组织中富集结果；其中(A
‑
B)分别是MS4A6A在正常脑组织和GBM组织中的多重免疫荧光染色；(C)是Western blotting检测正常脑组织和GBM组织中MS4A6A的表达；(D)分别是A和B中MS4A6A总强度的量化(每组n＝10)；(E)是MS4A6A的量化，如(C)所示(每组n＝5)。数据为平均值
±
s.e.m.*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001，****p＜0.0001.GBM(glioblastoma).Scale bars＝25μm。GBM(胶质母细胞瘤)。比例尺＝25μm。
[0024]图3为MS4A6A促进C6细胞的增殖和迁移结果；其中(A)是体外细胞实验示意图；(B)是GBM细胞的伤口愈合试验。，在24和48小时获本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种MS4A6A基因在制备用于胶质瘤治疗或预后评估的试剂盒中的应用。2.一种胶质瘤治疗或预后评估的试剂盒，其特征在于包括用于检测分子标志物MS4A6A基因表达水平的试剂。3.一种胶质瘤治疗或预后评估药物，其特征在于为MS4A6A基因抑制剂。4.一种药物组合物，其特征在于包括MS4A6A基因抑制剂。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：王永杰，林晟艳，黄智慧，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：