鲍内脏糖蛋白纳米硒在制备水产饲料添加剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了鲍内脏糖蛋白纳米硒在制备调节罗非鱼肠道菌群的水产饲料添加剂中的应用。本发明专利技术鲍内脏糖蛋白纳米硒能够用于水产饲料添加剂，提高罗非鱼肠道微生物多样性，显著增加了罗非鱼肠道中一些有益菌属如鲸杆菌属的丰度，显著降低了条件致病菌如邻单胞菌属和柠檬酸杆菌属的丰度以及潜在性病原菌弗氏柠檬酸杆菌Citrobacterfreundii的丰度，显著上调罗非鱼肠道中吡咯

【技术实现步骤摘要】
鲍内脏糖蛋白纳米硒在制备水产饲料添加剂中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体地说涉及鲍内脏糖蛋白纳米硒在制备水产饲料添加剂中的应用。

技术介绍

[0002]硒元素(Se)是生物体的一种必需微量元素，硒不仅能提高机体免疫力、增强生殖功能和促进生长，还具有抗癌、抗氧化、抗应激、延缓衰老、参与保护细胞免受过量的H2O2损害和拮抗重金属镉和汞等作用。硒在生物体内主要以含硒蛋白和含硒氨基酸这两种生物活性形式存在。在硬骨鱼中发现的含硒蛋白已多达41种。一些硒蛋白的功能已被确定，如谷胱甘肽过氧化物酶(GSH
‑
Px)、硫氧还蛋白还原酶(TrxRs)和硒蛋白P(SelP)等。SelP是机体内负责硒体内平衡和转运的主要蛋白质，影响精子的发育。SelP在鱼类中有SelPa和SelPb两种不同的亚型表现；它们在结构水平上有显著的差异，并可能在鱼类体内平衡中发挥不同的作用。
[0003]已有研究表明，若生物体内缺硒会导致机体生长受到抑制，抗氧化性能下降，严重缺硒会损害机体硒蛋白的功能，从而影响机体的健康状况。特别是在生长中的动物，缺硒可导致一些功能性障碍，如肝坏死(大鼠)，胰腺萎缩(小鸡)，砂囊肌病(火鸡雏)和“白肌肉病”(绵羊)等。硒通常大量存在于肝脏、脾脏和淋巴结等免疫组织中，体内缺硒还可能会使细胞介导免疫和B细胞功能受损，导致机体免疫性能下降。
[0004]传统的补硒形式主要有无机硒和有机硒两种，无机硒主要以亚硒酸钠为主，有机硒以硒代蛋氨酸为主。但是无机和有机形式的硒均存在安全范围窄、毒性高、生物活性低等缺点，从而限制了其在硒添加中的应用。纳米硒是近年来研究发现的一种新型的硒添加形式，与传统补硒形式相比，纳米硒(SeNPs)具有生物活性高、生物利用度高、毒性小等优点，是目前报道毒性最低的补硒剂。
[0005]纳米硒是采用纳米技术，在氧化还原体系下，利用蛋白质的酰胺平面或多糖的羟基基团吸引红色元素硒，形成的硒纳米粒子。它不仅保留了硒元素促生长、调节免疫、和抗氧化等生物学活性，而且具有生物学效价高、毒性小等优点，是一种高效、低毒的营养添加剂。目前，已有研究表明纳米硒在促进动物生长、提高抗氧化性具有重要作用，但关于纳米硒特别是鲍内脏糖蛋白纳米硒对水产动物肠道菌群的调节作用的研究较少。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供鲍内脏糖蛋白纳米硒在制备调节罗非鱼肠道菌群的水产饲料添加剂中的用途。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案是：
[0008]本专利技术的目的是提供鲍内脏糖蛋白纳米硒在制备调节罗非鱼肠道菌群的水产饲料添加剂。
[0009]进一步地，所述鲍内脏糖蛋白纳米硒的浓度为3mg/kg。
[0010]进一步地，所述调节罗非鱼肠道菌群及代谢是指：
[0011](1)提高罗非鱼肠道微生物多样性；
[0012](2)显著增加罗非鱼肠道中有益菌鲸杆菌属的丰度；
[0013](3)显著降低了罗非鱼肠道中邻单胞菌属和柠檬酸杆菌属的丰度；
[0014](4)显著降低了弗氏柠檬酸杆菌Citrobacter freundii的丰度；
[0015](5)显著提高罗非鱼肠道氨基酸代谢相关的吡咯
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羧酸含量。
[0016]进一步地，所述鲍内脏糖蛋白纳米硒的制备方法包括如下步骤：
[0017]S1.将1份粉状鲍鱼内脏(预研磨)与39份超纯水混合均匀；
[0018]S2.加入1份木瓜蛋白酶，pH为9.5，将混合物在50℃下孵育19h以水解鲍鱼内脏。
[0019]S3.将水解产物在50℃水浴中加热15分钟以使木瓜蛋白酶失活，而后4℃，4500rpm离心20分钟。
[0020]S4.收集上清液，并用10kDa超滤膜分离，弃去渗透液，收集截留液并和乙醇(95％等级)以1:3的体积比醇化，而后4℃，12000rpm离心20分钟并收集沉淀物。
[0021]S5.取20份超纯水溶解沉淀物，通过DEAE Sepharose CL
‑
6B离子交换柱，使用0.25mol/L NaCl以0.5mL/min的流速进行梯度洗脱，得到纯度为96.38％的鲍内脏糖蛋白母液。
[0022]S6.取20份1mM亚硒酸钠，100份5mM Vc溶液，16份鲍内脏糖蛋白母液，364份灭菌超纯水，在25℃、600rpm条件下反应10h。最终获得500份鲍内脏糖蛋白纳米硒。
[0023]本专利技术相对于现有技术，具有如下的优点及有益效果：
[0024]鲍内脏糖蛋白纳米硒能够用于制备水产饲料添加剂，提高罗非鱼肠道微生物多样性，显著增加了罗非鱼肠道中一些有益菌属如鲸杆菌属的丰度，显著降低了条件致病菌如邻单胞菌属和柠檬酸杆菌属的丰度以及潜在性病原菌弗氏柠檬酸杆菌Citrobacter freundii的丰度，特异富集了益生菌葡萄乳球菌，上调罗非鱼肠道中吡咯
‑2‑
羧酸水平。
附图说明
[0025]下面结合附图表和具体实施例对本专利技术作进一步的说明。
[0026]图1为PSP
‑
SeNPs的透射电镜、粒径分布、Zeta电位和X射线衍射图。其中a、b为透射电镜图、c为粒径分布图、d为Zeta电位图、e为X射线衍射(XRD)图。
[0027]图2为罗非鱼肠道群落Alpha多样性图。
[0028]图3为罗非鱼肠道菌群Beta多样性及NMDS图。
[0029]图4为PSP
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SeNPs处理后罗非鱼肠道门水平菌群组成图。
[0030]图5为PSP
‑
SeNPs处理后罗非鱼肠道显著性差异菌门KW秩和检验图。其中a为变形菌门、b为梭杆菌门、c为拟杆菌门、d为浮霉菌门
[0031]图6为属水平各组肠道群落组成图及显著差异菌属KW秩和检验图。其中a为属水平菌群组成图，b为邻单胞菌属、c为鲸杆菌属、d为柠檬酸杆菌属、e为Fimbriiglobus属、f为Gemmata属
[0032]图7为种水平各组肠道群落组成图及显著差异菌种KW秩和检验图。其中a为种水平菌群组成图，b为弗氏柠檬酸杆菌Citrobacter freundii、c为Gemmata sp_Br1
‑
2菌种、d为Pantoea agglomerans菌种
具体实施方式
[0033]为了更好地理解本专利技术，下面结合实施例和附图对本专利技术做进一步的详细说明，但本领域技术人员了解，下述实施例不是对本专利技术保护范围的限制，任何在本专利技术基础上做出的改变和变化，都在本专利技术的保护范围之内。
[0034]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0035]下述实施例中所用的材料、试剂、仪器设备等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0036]实施例1鲍内脏糖蛋白纳米硒(PSP
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SeNPs)的制备及表征
[0037]S1.鲍本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鲍内脏糖蛋白纳米硒的用途，其特征在于：用于制备调节罗非鱼肠道菌群的水产饲料添加剂。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述鲍内脏糖蛋白纳米硒的浓度为3mg/kg。3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述调节罗非鱼肠道菌群是指：(1)提高罗非鱼肠道微生物多样性；(2)增加罗非鱼肠道中鲸杆菌属丰度；(3)降低了罗非鱼肠道中邻单胞菌属和柠檬酸杆菌属的丰度；(4)降低了弗氏柠檬酸杆菌Citrobacterfreundii的丰度；(5)显著提高罗非鱼肠道氨基酸代谢相关的吡咯
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羧酸含量。4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述鲍内脏糖蛋白纳米硒的制备方法包括如下步骤：S1.将1份粉状鲍鱼内脏(预研磨)与39份超纯水混合均匀；S2.加入1份木瓜蛋白酶，pH为9.5，将混合物...

【专利技术属性】
技术研发人员：马英，熊何健，倪靓，任丽蓉，简文杰，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：