特异性双链RNA结合蛋白嵌合体及其在病毒感染性疾病中的应用制造技术

本发明专利技术涉及双链ＲＮＡ结合蛋白嵌合体在治疗或预防病毒感染性疾病中的应用，特别是涉及四种由双链ＲＮＡ感受器序列ＮＦ９０、ＰＡＣＴ、ＡＤＡＲ１利ＰＫＲ组成的蛋白嵌合体在治疗和预防病毒感染性疾病中的一种或多种应用，特异性双链ＲＮＡ结合蛋白嵌合体，其特征在于将蛋白转导信号，双链ＲＮＡ感受器和细胞凋亡信号通过ＤＮＡ重组的方法按以上顺序连接起来，组成特异性双链ＲＮＡ结合蛋白嵌合体，并分别在原核和真核细胞中表达。特异性双链ＲＮＡ蛋白嵌合体可用于在病毒感染性疾病中的治疗和预防，在哺乳动物细胞水平上作为蛋白药物治疗工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及双链RNA结合蛋白嵌合体在治疗或预防病毒感染性疾病中的应用，特别是涉及四 种由双链RNA感受器序列NF卯、PACT、 ADAR1和PKR组成的蛋白嵌合体在治疗和预防病毒感 染性疾病中的一种或多种应用。
技术介绍
病毒感染是威胁人类生命健康的常见疾病。随着分子病毒学的发展，虽然对病毒感染的机制有 了深入的认识，但在临床上由于病毒种类繁多和诊断技术的限制，只有少部分病毒感染能得到确诊 和有针对性的治疗。 一些严重的病毒感染，如艾滋、SARS、禽流感与Prion病毒感染(海绵样脑 病)等，目前缺乏特异性的治疗手段。因此，如能开发研究一种广谱的抗病毒药物，对拯救这部分 病人的生命，甚至如艾滋病等会很有价值。双链RNA (dsRNA)是所有病毒复制过程的一个显著特征。 一般来说，双链RNA在哺乳动物 细胞复制中不表达，只有在细胞感染病毒后才表达。所以，双链RNA是病毒感染哺乳细胞的分子 标记，它代表着病毒感染的一种早期危险信号。研究证实，人类和所有脊椎动物都存在针对双链 RNA的先天免疫系统。 一般来说，超过30个碱基对的双链RNA就能有效的与其受体(双链RNA 结合蛋白，DRBP)作用，弓l起细库的抗病毒反应。首先，双链RNA与分布在被激活的双链RNA 蛋白激酶(PKR)上的免疫反应性干扰素(IFN)效应蛋白作用，激活IFN介导的抗病毒通路，该 通路与PACT/RAX、 TRBP、 2'， 5'寡腺苷酸合成酶、双链RNA特异的腺苷脱氨酶(ADAR)和核 闲于90 (NF卯)等DRBP的作用有关。通过这个机制双链RNA能诱导快速抗病毒反应，导致蛋 白翻译抑制或凋亡。其次，细胞内双链RNA可与RNA解旋酶RIG-I和MDA-5结合，激活转录蛋 白如干扰素调节因子3 (IRF3)和NF-kB等，这种激活作用对于RNA病毒诱导的干扰素的产生非 常关键。第三，细胞内和细胞外的双链RNA可与Toll样受体3(TLR3)结合，通过IRF3和NF-kB 激活IFN转录。总之，宿主细胞可通过一系列的DRBP在病毒感染早期侦测到细胞内外双链RNA 的存在，并通过不同的机制引起先天免疫应答。虽然在进化过程中人类已形成了对细胞内、外双链RNA应答的先天免疫系统，但病毒也进化 出了一种回避双链RNA诱导的抗病毒反应的途径。为了存活病毒必须在被感染的宿主中成功复制。研究证实，病毒已经进化形成了多种通路，用来抑制IFN的合成、结合并使分泌的IFN分子失活、 阻断IFN活化信号和破坏IFN诱导的抗病毒蛋白的作用。因为双链RNA是IFN反应的一个早期信 号，很多病毒已经进化能够编码其自身的DRBP以竞争宿主中的双链RNA受体，如流感病毒的 NS1、呼吸道肠道病毒的RS3和痘苗病毒的E3L能有效的竞争PKR或其它双链RNA受体，阻断 双链RNA诱导的IFN产生的抗病毒反应；腺病毒和EB病毒都可产生抑制性RNA分子，结合PKR 并使其失活。因此，无论宿主或病毒都可通过各种途径对双链RNA产生应答，掲示了双链RNA 介导的信号传导作用在病毒感染期间的重要性。由此推测双链RNA介导的信号应该是成功预防和 治疗病毒感染的首要目标。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种将蛋白转导信号，双链RNA感受器和细胞凋亡信号通过DNA重组 的方法按以上顺序连接起来，组成特异性双链RNA结合蛋白嵌合体，并分别在原核和真核细胞中 表达的方法。提供一种涉及四种不同双链RNA感受器的特异性双链RNA结合蛋白嵌合体。其中双链RNA 感受器可以分别是NF90, PACT, ADAR1或PKR中的任一种，可以是其部分或全部双链RNA结合区域。本专利技术的另一个目的是所述蛋白嵌合体用于制备抗病毒的药物。本专利技术的再一个目的是特异性双链RNA蛋白嵌合体在治疗和预防病毒感染性疾病中的应用。 本专利技术的目的是这样实现的，特异性双链RNA结合蛋白嵌合体，其特征在于将蛋白转导信号，双链RNA感受器和细胞凋亡信号通过DNA重组的方法按以上顺序连接起来,组成特异性双链RNA结合蛋白嵌合体，并分别在原核和真核细胞中表达。所述涉及四种不同双链RNA感受器的特异性双链RNA结合蛋白嵌合体,其中双链RNA感受器可以分别是NF90， PACT, ADAR1或PKR中的任一种，可以是其部分或全部双链RNA结合区域。所述包含蛋白转导信号、细胞凋亡信号和不同双链RNA感受器序列，特异性双链RNA结合 蛋白所组成的嵌合体，其cDNA和氨基酸序列如下 No.l dsCARE (PKR) cDNA序列ATGTACGCCCGTGCCGCCGCCCGTCAGGCCCGTGCCAGTGGTCTCGAGATGGCTGGTGAT CTTTCAGCAGGTTTCTTCATGGAGGAACTTAATACATACCGTCAGAAGCAGGGAGTAGTA CTTAAATATCAAGAACTGCCTAATTCAGGACCTCCACATGATAGGAGGTTTACATTTCAAGTTATAATAGATGGAAGAGAATTTCCAGAAGGTGAAGGTAGATCAAAGAAGGAAGCAAAAAATGCCGCAGCCAAATTAGCTGTTGAGATACTTAATAAGGAAAAGAAGGCAqiTAGTCCTTTATTATTGACAACAACGAATTCTTCAGAAGGATTATCCATGGGGAATTACATAGGCCTTATCAATAGAATTGCCCAGAAGAAAAGACTAACTGTAAATTATGAACAGTGTGCATCGGGGGTGCATGGGCCAGAAGGATTTCATTATAAATGCAAAATGGGACAGAAAGAATATAGTATTGGTACAGGTTCTACTAAACAGGAAGCAAAACAATTGGCCGCTAAACTTGCATATCTTCAGATATTATCAGAAGAAACCTCAGTGAAATCTGACTACCTGTCCTCTGGTTCCGGTACCATGGATGCAAAAGCTCGAAATTGTTTGCTTCAACATAGAGAAGCTCTGGAAAAGGACATCAAGACATCCTACATCATGGATCACATGATTAGTGATGGATTTTTAACAATATCAGAAGAGGAAAAAGTAAGAAATGAGCCCACTCAACAGCAAAGAGCAGCTATGCTGATTAAAATGATACTTAAAAAAGATAATGATTCCTACGTATCATTCTACAATGCTCTACTACATGAAGGATATAAAGATCTTGCTGCCCTTCTCCATGATGGCATTCCTGTTGTCTAA蛋白序列MYARAAARQARASGLEMAGDLSAGFFMEELNTYRQKQGVVLKYQELPNSGPPHDRRFTFQVIIDGREFPEGEGRSKKEAKNAAAKLAVEILNKEKKAVSPLLLTTTNSSEGLSMGNYIGLINRIAQKKRLTVNYEQCASGVHGPEGFHYKCKMGQKEYSIGTGSTKQEAKQLAAKLAYLQILSEETSVKSDYLSSGSGTMDAKARNCLLQHREALEKDKTSYIMDHMISDGFL本文档来自技高网...

【技术保护点】
特异性双链ＲＮＡ结合蛋白嵌合体，其特征在于将蛋白转导信号，双链ＲＮＡ感受器和细胞凋亡信号通过ＤＮＡ重组的方法按以上顺序连接起来，组成特异性双链ＲＮＡ结合蛋白嵌合体，并分别在原核和真核细胞中表达。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：费舟，杨静华，樊代明，汪爱勤，程光，晁晓东，
申请(专利权)人：中国人民解放军第四军医大学，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]