本发明专利技术涉及乙醇氧化酶稳定化纳米粒子及制备方法、应用和解酒药，乙醇氧化酶稳定化纳米粒子中，乙醇氧化酶负载于壳体中，所述的壳体包含第一链段和第二链段的交联结构，所述的第一链段的原料为壳聚糖及其衍生物中的一种或多种，所述的第二链段的原料为聚谷氨酸及其衍生物中的一种或多种；制备方法包括将乙醇氧化酶水溶液与三聚磷酸钠水溶液、第二链段原料的水溶液初步反应后，加入第一链段原料的醋酸溶液继续反应形成含有乙醇氧化酶稳定化纳米粒子的混合液；上述乙醇氧化酶稳定化纳米粒子或制备方法可用于制造解酒用的药物中。本申请的乙醇氧化酶能够在体内的肠道位置稳定、持续地发挥对乙醇的氧化作用。地发挥对乙醇的氧化作用。地发挥对乙醇的氧化作用。
【技术实现步骤摘要】
乙醇氧化酶稳定化纳米粒子及制备方法、应用和解酒药
[0001]本专利技术涉及装载于有机载体的酶及其制备方法，具体涉及乙醇氧化酶稳定化纳米粒子及制备方法、应用和解酒药。
技术介绍
[0002]乙醇氧化酶(Alcohol Oxidase)由于可以氧化乙醇中的羟基，形成醛、酸，并相应产生过氧化氢，具有作为解酒药物成分的前景。然而由于其本身稳定性的缺陷，在体内易受到胃酸、蛋白水解酶、胰液等影响，现有技术依然无法很好的利用其特性来制造能够帮助人们解酒药物。
技术实现思路
[0003]本申请的主要目的在于提供一种乙醇氧化酶稳定化纳米粒子及其制备方法，以实现乙醇氧化酶能够在肠道内稳定、持续的发挥作用。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术的第一方面提供一种乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，乙醇氧化酶负载于壳体中，所述的壳体包含第一链段和第二链段的交联结构，
[0005]所述的第一链段的原料为壳聚糖及其衍生物中的一种或多种，
[0006]所述的第二链段的原料为聚谷氨酸及其衍生物中的一种或多种。
[0007]在本专利技术第一方面的一些实施例中，交联结构中具有第三链段，第三链段的原料为交联剂，所述的第三链段交联于第一链段与第二链段之间。
[0008]在本专利技术第一方面的一些实施例中，所述的交联剂采用戊二醛。
[0009]在本专利技术第一方面的一些实施例中，粒径范围在270nm～320nm之间。
[0010]在本专利技术第一方面的一些实施例中，所述的壳体中还含有十二烷基硫酸钠。
[0011]在本专利技术第一方面的一些实施例中，所述的壳体中还含有三聚磷酸钠。
[0012]在本专利技术第一方面的一些实施例中，含有所述第一链段占粒子总重量的12％～24％。所述第二链段占粒子总重量的16％～32％。
[0013]在本专利技术第一方面的一些实施例中，所述的壳聚糖及其衍生物的分子量为200000～1000000。
[0014]在本专利技术第一方面的一些实施例中，所述的聚谷氨酸及其衍生物的分子量为700000～1000000。
[0015]在本专利技术第一方面的一些实施例中，原料中包含8～20重量份的乙醇氧化酶、12～24重量份的壳聚糖、16～32重量份的聚谷氨酸。
[0016]在本专利技术第一方面的一些实施例中，原料中还包含8～16重量份的三聚磷酸钠。
[0017]在本专利技术第一方面的一些实施例中，原料中还包含2.75～5.5重量份的戊二醛。
[0018]在本专利技术第一方面的一些实施例中，原料中还包含3.25～6.5重量份的十二烷基硫酸钠。
[0019]本专利技术的第二方面涉及乙醇氧化酶稳定化纳米粒子的制备方法，将乙醇氧化酶水
溶液与三聚磷酸钠水溶液、第二链段原料的水溶液初步反应后，加入第一链段原料的醋酸溶液继续反应形成含有乙醇氧化酶稳定化纳米粒子的混合液，
[0020]所述的第一链段原料为壳聚糖及其衍生物中的一种或多种，
[0021]所述的第二链段原料为聚谷氨酸及其衍生物中的一种或多种。
[0022]在本专利技术第二方面的一些实施例中，所述的壳聚糖及其衍生物的分子量为200000～1000000。
[0023]在本专利技术第二方面的一些实施例中，所述的聚谷氨酸及其衍生物的分子量为700000～1000000。
[0024]在本专利技术第二方面的一些实施例中，所述的第一链段原料的醋酸溶液的浓度为0.5～1.5mg/ml。
[0025]在本专利技术第二方面的一些实施例中，所述的第二链段原料的水溶液的浓度为1～5mg/ml。
[0026]在本专利技术第二方面的一些实施例中，所述的三聚磷酸钠水溶液的浓度为1～5mg/ml。
[0027]在本专利技术第二方面的一些实施例中，所述的乙醇氧化酶水溶液的浓度为0.5～1.5mg/ml。
[0028]在本专利技术第二方面的一些实施例中，在所述的混合液中还加入阴离子表面活性剂。
[0029]在本专利技术第二方面的一些实施例中，所述的阴离子表面活性剂采用十二烷基硫酸钠。
[0030]在本专利技术第二方面的一些实施例中，在所述的混合液中还加入交联剂。
[0031]在本专利技术第二方面的一些实施例中，所述的交联剂采用戊二醛。
[0032]在本专利技术第二方面的一些实施例中，还包括透析所述的混合液，以纯化其中乙醇氧化酶稳定化纳米粒子的步骤。
[0033]在本专利技术第二方面的一些实施例中，包括低温保存乙醇氧化酶稳定化纳米粒子的步骤。
[0034]在本专利技术第二方面的一些实施例中，用透析袋透析所述的混合液。
[0035]在本专利技术第二方面的一些实施例中，制备过程在冰水浴的环境下进行。
[0036]在本专利技术第二方面的一些实施例中，原料中包含8～20重量份的乙醇氧化酶、12～24重量份的壳聚糖、16～32重量份的聚谷氨酸。
[0037]在本专利技术第二方面的一些实施例中，原料中还包含8～16重量份的三聚磷酸钠。
[0038]在本专利技术第二方面的一些实施例中，原料中还包含2.75～5.5重量份的戊二醛。
[0039]在本专利技术第二方面的一些实施例中，原料中还包含3.25～6.5重量份的十二烷基硫酸钠。
[0040]本专利技术的第三方面涉及以上任一述乙醇氧化酶稳定化纳米粒子或制备方法在制造药物中的应用，所述的药物用于解酒。
[0041]本专利技术的第四方面一种解酒药，含有以上任一所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子。
[0042]本申请的乙醇氧化酶能够在体内的肠道位置稳定、持续地发挥对乙醇的氧化作
用。
附图说明
[0043]图1a显示25℃下，PB缓冲溶液中(10mM，pH＝7.4)，乙醇氧化酶的粒径大小；图1b显示25℃下，PB缓冲溶液中(10mM，pH＝7.4)，乙醇氧化酶稳定化纳米粒子
①
的粒径大小；图1c显示25℃下，PB缓冲溶液中(10mM，pH＝7.4)，乙醇氧化酶稳定化纳米粒子
②
的粒径大小；图1d显示25℃下，PB缓冲溶液中(10mM，pH＝7.4)，乙醇氧化酶稳定化纳米粒子
③
的粒径大小。
[0044]图2显示25℃下，PB缓冲溶液中(10mM，pH＝7.4)，乙醇氧化酶、乙醇氧化酶稳定化纳米粒子
①
、乙醇氧化酶稳定化纳米粒子
②
及乙醇氧化酶稳定化纳米粒子
③
的表面电荷。
[0045]图3显示壳聚糖与乙醇氧化酶之间的荧光能量共振转移实验图。
[0046]图4显示25℃下，水溶液中，乙醇氧化酶、乙醇氧化酶稳定化纳米粒子
①
及室温下放置24小时后乙醇氧化酶稳定化纳米粒子
①
的相对酶活性。
[0047]图5a显示乙醇氧化酶稳定化纳米粒子
①
、乙醇氧化酶稳定化纳米粒子
①
经人工胃液处理20分钟及乙醇氧化酶稳定化纳米粒子...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于乙醇氧化酶负载于壳体中，所述的壳体包含第一链段和第二链段的交联结构，所述的第一链段的原料为壳聚糖及其衍生物中的一种或多种，所述的第二链段的原料为聚谷氨酸及其衍生物中的一种或多种。2.如权利要求1所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于交联结构中具有第三链段，第三链段的原料为交联剂，所述的第三链段交联于第一链段与第二链段之间。3.如权利要求2所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于所述的交联剂采用戊二醛。4.如权利要求1所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于粒径范围在270nm～320nm之间。5.如权利要求1所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于所述的壳体中还含有十二烷基硫酸钠。6.如权利要求1所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于所述的壳体中还含有三聚磷酸钠。7.如权利要求1所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于含有所述第一链段占粒子总重量的12％～24％。所述第二链段占粒子总重量的16％～32％。8.如权利要求1所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于所述的壳聚糖及其衍生物的分子量为200000～1000000。9.如权利要求1所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于所述的聚谷氨酸及其衍生物的分子量为700000～1000000。10.如权利要求1所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于原料中包含8～20重量份的乙醇氧化酶、12～24重量份的壳聚糖、16～32重量份的聚谷氨酸。11.如权利要求10所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于原料中还包含8～16重量份的三聚磷酸钠。12.如权利要求10所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于原料中还包含2.75～5.5重量份的戊二醛。13.如权利要求10所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子，其特征在于原料中还包含3.25～6.5重量份的十二烷基硫酸钠。14.乙醇氧化酶稳定化纳米粒子的制备方法，其特征在于将乙醇氧化酶水溶液与三聚磷酸钠水溶液、第二链段原料的水溶液初步反应后，加入第一链段原料的醋酸溶液继续反应形成含有乙醇氧化酶稳定化纳米粒子的混合液，所述的第一链段原料为壳聚糖及其衍生物中的一种或多种，所述的第二链段原料为聚谷氨酸及其衍生物中的一种或多种。15.如权利要求14所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子的制备方法，其特征在于所述的壳聚糖及其衍生物的分子量为200000～1000000。16.如权利要求14所述的乙醇氧化酶稳定化纳米粒子的制备方法，其特征在于所述的聚谷氨酸及其衍生物的分子量为700000～100...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘阳，史林启，李秋实，姚筱暄，霍艺杰，李雪梅，
申请(专利权)人：南开大学北京益醒生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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