一种用于同时检测并鉴别猴痘病毒I型、IIa型和IIb型的多重qPCR试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于同时检测并鉴别猴痘病毒I型、IIa型和IIb型的多重qPCR试剂盒。本发明专利技术所述多重qPCR试剂盒中含有用于同时检测并鉴别猴痘病毒I型、IIa型和IIb型的多重qPCR引物和探针组合，所述试剂盒的检测特异性好、灵敏度高，检测样本的浓度为200copies/mL及以上时的检出率为100％。除所述多重qPCR引物和探针组合外，该试剂盒中同时还含有内标基因的检测引物和探针，可以对采集样本的质量及PCR抑制因素进行评估，对检测过程进行质量控制，使检测结果更加准确，重复性极好，对于猴痘病毒感染者的正确治疗及疫情的控制具有重要意义。义。义。

【技术实现步骤摘要】
一种用于同时检测并鉴别猴痘病毒I型、IIa型和IIb型的多重qPCR试剂盒


[0001]本专利技术属于病毒检测
更具体地，涉及一种用于同时检测并鉴别猴痘病毒I型、IIa型和IIb型的多重qPCR试剂盒。

技术介绍

[0002]猴痘病毒(MPXV)是一种可引发与天花类似症状(毒血症状和皮肤脓包)的双链DNA病毒，潜伏期为6～16天，通过血液和体液在人与人之间传播。目前已知感染人类的猴痘病毒分为猴痘病毒I型(中非分支)和猴痘病毒II型(西非分支)两种；其中，猴痘病毒II型又包含两个亚型，分别为猴痘病毒IIa型和IIb型。与猴痘病毒I型相比，猴痘病毒II型的致死率更低，致使感染不同型别的猴痘病毒后的处置方式有所不同。猴痘病毒IIb型虽很少引起致命的感染，但对免疫系统薄弱，有湿疹病史，以及处于妊娠或哺乳期等的人来说，感染后可能更容易患重病或死亡。因此，对不同型别的猴痘病毒进行区分检测，有助于开展及时、准确的治疗，也是阻碍猴痘传播的关键。
[0003]目前，检测猴痘病毒的方法主要包括形态学法、测序法、qPCR法以及血清学检测法。其中，形态学病毒检测法，主要通过根据生长特征可区分痘病毒和其他种属，该法只可鉴别正痘病毒和负痘病毒，但它不能区分种类，还得依赖血清学试验，生物学试验和DNA分析试验等实验，才得以确认猴痘病毒的存在，因而周期长，依赖设备昂贵，操作极其繁琐。测序检测需要配合测序专用的仪器进行使用，样品质量要求高、通量有限、适用性较差，且对操作人员的技术水平要求较高。血清学检测法属于抗体检测，主要是检测患者的血清中是否含有目标病毒特异性抗体，但正痘病毒基因组内抗原部分很保守，导致血清学检测时易产生广泛的交叉反应，研究进展较为缓慢：其次，患者从感染病毒到体内生成抗体需要的时间较长，通常只能检测出感染时间较长的患者，对处于潜伏期患者的检测效果不佳，且不利于患者的管控。对比之下，qPCR诊断法通过加入特异的荧光标记探针可对扩增产物进行实时检测，因而更省时、特异性高、并能精确地对多个样本进行定量分析，可以快速定位爆发人群的范围，适合于疾病爆发的流行病学评估以及回顾性人群研究。但现有用于检测猴痘病毒的试剂盒等多存在对感染初期患者的检测灵敏度低、准确性差且基因分型难确定的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供一种用于同时检测并鉴别猴痘病毒I型、IIa型和IIb型的多重qPCR试剂盒。
[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种用于检测并鉴别猴痘病毒IIa型和IIb型的多重qPCR引物和探针组合。
[0006]本专利技术的第二个目的是提供一种用于同时检测并鉴别猴痘病毒I型、IIa型和IIb型的多重qPCR引物和探针组合。
[0007]本专利技术的第三个目的是提供任一所述多重qPCR引物和探针组合在制备检测并鉴别猴痘病毒I型、猴痘病毒IIa型和/或猴痘病毒IIb型的产品中的应用。
[0008]本专利技术的第四个目的是提供一种用于检测并鉴别猴痘病毒IIa型和IIb型的多重qPCR试剂盒。
[0009]本专利技术的第五个目的是提供一种用于同时检测并鉴别猴痘病毒I型、IIa型和IIb型的多重qPCR试剂盒。
[0010]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0011]本专利技术提供了一种可用于检测并鉴别猴痘病毒IIa型和IIb型的多重qPCR引物和探针组合；所述用于检测猴痘病毒IIa型的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～5所示，用于检测猴痘病毒IIa型的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；用于检测猴痘病毒IIb型的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～8所示，用于检测猴痘病毒IIb型的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述探针的5
’
端标记有不同的荧光发生基团，所述探针的3
’
端标记有荧光淬灭基团。
[0012]本专利技术同时还提供了一种可用于同时检测并鉴别猴痘病毒I型、IIa型和IIb型的多重qPCR引物和探针组合，所述用于检测猴痘病毒I型的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～2所示，用于检测猴痘病毒I型的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；用于检测猴痘病毒IIa型的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～5所示，用于检测猴痘病毒IIa型的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；用于检测猴痘病毒IIb型的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.7～8所示，用于检测猴痘病毒IIb型的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述探针的5
’
端标记有不同的荧光发生基团，所述探针的3
’
端标记有荧光淬灭基团。
[0013]本专利技术同时还基于内标基因(RNaseP)获得了可与上述多重qPCR引物和探针组合同时使用的内标基因的检测引物和探针，可以对采集样本的质量及PCR抑制因素进行评估，对检测过程进行质量控制，使检测结果更加准确，避免假阴性结果出现。
[0014]具体地，用于检测内标基因RNaseP的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.10～11所示，用于检测内标基因RNaseP的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；所述探针的5
’
端标记有与上述检测猴痘病毒I型、IIa型和IIb型的探针不同的荧光发生基团，所述探针的3
’
端标记有荧光淬灭基团
[0015]具体地，当检测没有检出RNaseP时，代表核酸中没有人的DNA，需要重新提取，重新提取后如果依然没有检出，则代表采样没有采集到人的细胞，需要重新采样。
[0016]具体地，所述荧光发生基团选自FAM、HEX、ROX或Cy5；所述荧光淬灭基团为MGB。
[0017]在本专利技术的实施例中，所述用于检测猴痘病毒I型的探针的5
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端标记有荧光发生基团FAM，用于检测猴痘病毒IIa型的探针的5
’
端标记有荧光发生基团HEX，用于检测猴痘病毒IIb型的探针的5
’
端标记有荧光发生基团ROX，用于检测内标基因RNaseP的探针的5
’
端标记有荧光发生基团Cy5，上述探针的3
’
端均标记有荧光淬灭基团MGB。
[0018]本专利技术所述多重qPCR引物和探针组合可以在同管反应体系中检测并鉴别出猴痘病毒I型、猴痘病毒IIa型和猴痘病毒IIb型。因此，本专利技术还申请保护所述多重qPCR引物和探针组合在制备检测并鉴别猴痘病毒I型、猴痘病毒IIa型和/或猴痘病毒IIb型的产品中的应用。
[0019]本专利技术还提供了一种用于检测并鉴别猴痘病毒IIa型和IIb型的多重qPCR试剂盒，所述试剂盒中含有SEQ ID NO.4～9所示多重qPCR引物和探针组合或SEQ ID NO.4～12所示多重qPCR引物和探针组合。
[0020]本专利技术同时申请保护该试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测并鉴别猴痘病毒IIa型和IIb型的多重qPCR引物和探针组合，其特征在于，所述用于检测猴痘病毒IIa型的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～5所示，用于检测猴痘病毒IIa型的探针的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示；用于检测猴痘病毒IIb型的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ IDNO.7～8所示，用于检测猴痘病毒IIb型的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述探针的5
’
端标记有不同的荧光发生基团，所述探针的3
’
端标记有荧光淬灭基团。2.根据权利要求1所述多重qPCR引物和探针组合，其特征在于，还包括用于检测内标基因RNaseP的qPCR引物和探针，用于检测内标基因RNaseP的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.10～11所示，用于检测内标基因RNaseP的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；所述探针的5
’
端标记有不同的荧光发生基团，所述探针的3
’
端标记有荧光淬灭基团。3.一种用于同时检测并鉴别猴痘病毒I型、IIa型和IIb型的多重qPCR引物和探针组合，其特征在于，所述用于检测猴痘病毒I型的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～2所示，用于检测猴痘病毒I型的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；用于检测猴痘病毒IIa型的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～5所示，用于检测猴痘病毒IIa型的探针的核苷酸序列如SEQ IDNO.6所示；用于检测猴痘病毒IIb型的qPCR引物的核苷酸序列依次如SEQ IDNO.7～8所示，用于检测猴痘病毒IIb型的探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；所述探针的5
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端标记有不同的荧光发生基团，所述探针的3
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端标记有荧光淬灭基团。4.根据权利要求3所述多重qPCR...

【专利技术属性】
技术研发人员：许泽仰，葛毅媛，谢龙旭，何诗琼，郭津津，
申请(专利权)人：深圳凯鹏医学检验实验室潮州凯普生物化学有限公司广东凯普生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：