【技术实现步骤摘要】
一种电化学发光层析法测定心肌肌钙蛋白I的试剂盒及其测定方法
[0001]本专利技术涉及,特别涉及一种电化学发光层析法测定心肌肌钙蛋白I的试剂盒及其测定方法。
技术介绍
[0002]三联吡啶钌[Ru(bpy)2+3]电化学发光(Electrochemiluminescence,简称ECL)具有原位响应、检测灵敏度高、线性范围宽、信号干扰低等优点,在免疫检测领域得到了广泛应用。与吖啶酯化学发光、鲁米诺/ALP化学发光、ABEI化学发光等化学发光法相比,电化学发光灵敏度更高、重复性更好。
[0003]急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)是一种临床常见的心脏疾病,病因是心肌缺血性坏死造成急性冠状动脉闭塞和血流中断。因其较高的致死率和危害性,AMI的准确诊断具有相当重要的临床价值。目前监测AMI的特异性心肌标志物有肌红蛋白(MYO)、肌酸激酶同工酶(CK
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MB)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)。其中cTnI的心肌特异性最优,且在AMI发生后,心肌组织中的心肌肌钙蛋白I(cTnI)被迅速的释放到血液中并能保持5
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10天的时间窗口,因而可作为心脏损伤前筛查,也是AMI诊断最有效的途径之一。通常认为cTnI在血液中的浓度大于0.5ng/mL时出现心肌损伤,AMI患者血液cTnI通常在1
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25ng/mL的范围内。
[0004]心肌肌钙蛋白I(cTnI)在心肌组织中表达,在胎儿、健康人或疾病状态下的成人骨骼肌中不表达,因而对 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种电化学发光层析法测定心肌肌钙蛋白I的试剂盒,其特征在于,包括:样本稀释液、试纸条;所述试纸条由样品垫、结合物垫、NC膜、吸水纸、PVC底板、丝网印刷电极组组成,所述样品垫、结合物垫、NC膜、吸水纸依次设置在PVC底板上;所述NC膜上设有检测T线和质控C线;所述PVC底板上设有凹槽,用于放置丝网印刷电极组,该丝网印刷电极组置于检测T线正下方;所述检测T线包被有T线抗体,所述质控C线包被有C线抗体;所述结合物垫含有包被了cTnI抗体的三联吡啶钌负载介孔硅球免疫复合物颗粒。2.根据权利要求1所述的电化学发光层析法测定心肌肌钙蛋白I的试剂盒,其特征在于,所述样品垫的头部还与结合物垫的尾部粘贴,所述结合物垫的头部与NC膜尾部粘贴,所述NC膜头部与吸水纸尾部粘贴。3.根据权利要求1所述的电化学发光层析法测定心肌肌钙蛋白I的试剂盒,其特征在于,所述样本稀释液包括3%
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5%甘露醇、2%
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6%三丙胺的20
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100mM四硼酸钠缓冲液,且PH=8.45
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8.55。4.根据权利要求1所述的电化学发光层析法测定心肌肌钙蛋白I的试剂盒,其特征在于,所述样品垫的材料包括玻璃纤维膜或聚酯膜,该样品垫的制备过程:选用玻璃纤维膜或者聚酯膜材料,放置在样品垫预处理液中充分浸泡,待其饱和后从液体中捞出,然后在37℃的烘箱中烘干6
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12h,得到所需样品垫;所述样品垫预处理液包括3%
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5%抗RBC、1%
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2%BSA、0.2%
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1%酪蛋白、0.1%
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1%曲拉通X
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100的20
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100mM HEPES缓冲液。5.根据权利要求1所述的电化学发光层析法测定心肌肌钙蛋白I的试剂盒,其特征在于,所述结合物垫的材料包括玻璃纤维膜或聚酯膜,该结合物垫的制备过程:选用玻璃纤维膜或聚酯膜等材料,经结合物垫处理液预处理后烘干,然后将制备好的包被cTnI抗体1的负载三联吡啶钌的羧基化介孔硅球免疫复合物颗粒用免疫复合物稀释液稀释后,均匀的喷在结合物垫上,然后在37℃烘箱中烘干6
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12h,得到所需的结合物垫。6.根据权利要求5所述的电化学发光层析法测定心肌肌钙蛋白I的试剂盒,其特征在于,所述负载三联吡啶钌的羧基化介孔硅球免疫复合物颗粒制备过程:步骤X1,负载三联吡啶钌的羧基化介孔硅球的制备:将500μL 10mg/mL的羧基化介孔硅球放入5mL棕色玻璃瓶中,放入磁力搅拌子进行旋转搅拌;再加入50
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200μL 5mg/mL的[Ru(bpy)
32+
],在室温下避光搅拌12
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24h;再将上述溶液置于1.5mL EP管中,于RCF=9,000
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10,000
×
g条件下离心10
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25min,取出去除上清,加入500μL纯化水,超声分散;再重复上述操作2次,然后用100μL纯化水重悬,得到负载三联吡啶钌的羧基化介孔硅球,并置于2
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8℃条件下保存;步骤X2:负载三联吡啶钌的羧基化介孔硅球抗体标记:取50μL步骤X1中所得的负载三联吡啶钌的羧基化介孔硅球,加入950μL纯化水,混匀后于RCF=9,000
‑
10,000
×
g条件下离心15
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30min,弃上清;然后加入800μL的50mM MES缓冲液,混匀后加入50
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200μL的20mg/mL EDC溶液、50
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200μL的10mg/mL sulfo
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NHS溶液,室温下...
【专利技术属性】
技术研发人员:张小海,单博文,董婷,陈玮,张继明,
申请(专利权)人:深圳市雷诺华科技实业有限公司,
类型:发明
国别省市:
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