提高AAV病毒脑靶向性的多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了提高AAV病毒脑靶向性的多肽及其应用。发明专利技术人研究发现，使用SDGTVANPFR替换野生型AAV9病毒衣壳蛋白的586

【技术实现步骤摘要】
提高AAV病毒脑靶向性的多肽及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及提高AAV病毒脑靶向性的多肽及其应用。

技术介绍

[0002]腺相关病毒(AAV)是一种广泛应用于基因治疗的递送载体，其原理是通过基因工程方法将AAV基因组ITR之间序列替换成目的基因序列，经细胞感染传递到靶细胞，达到基因治疗目的。基于重组AAV具有安全性、高效性、稳定性、持续性、特异性、低整合性等特点，使得AAV成为基因治疗领域主要递送手段之一。在基因治疗应用过程中，活体动物往往需要注射高剂量、高纯度的AAV病毒，而高昂的AAV生产成本成为基因治疗过程中的瓶颈之一。
[0003]伴随着基因治疗下游研发技术的成熟，上游AAV生产通量的问题的限制变得越来越明显。为了解决这个问题，现有的策略集中在以下两个方面，一是优化现有的AAV生产工艺；二是寻找包装能力、组织靶向性更好的病毒载体。AAV生产工艺更多的是通过其外部包装条件的优化，不涉及AAV本身的改造。而基于AAV病毒的结构特征，其病毒特征如组织靶向性、免疫原性、包装产量等特征主要由其表面衣壳蛋白决定。如何对AAV衣壳蛋白的改造，进行提高提高AAV病毒的包装产量，是一项亟待解决的问题。
[0004]AAV衣壳蛋白与其靶向性的关系尚不明确，现有技术中，主要通过突变体发现具有特定靶向性或高靶向性的AAV衣壳蛋白。提高AAV病毒脑靶向性的多肽报导较少，CN113748122A公开了编码腺相关病毒(AAV)衣壳蛋白突变体的核酸，通过AAV随机肽病毒文库进行大量的筛选得到。/>
技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供提高AAV病毒脑靶向性的多肽及其应用。
[0006]本专利技术所采取的技术方案是：本专利技术的第一个方面，提供：提高AAV病毒脑靶向性的多肽，其序列为SDGTVANPFR，用于替换野生型AAV9病毒衣壳蛋白的586
‑
588位氨基酸。
[0007]本专利技术的第二个方面，提供：一种AAV病毒衣壳蛋白突变体MutE，使用多肽SDGTVANPFR替换野生型AAV9病毒衣壳蛋白的586
‑
588位氨基酸得到。更为具体的，AAV病毒衣壳蛋白突变体MutE的氨基酸序列如SEQ ID NO.：4所示。
[0008]本专利技术的第三个方面，提供：表达本专利技术第二个方面所述AAV病毒衣壳蛋白突变体MutE的DNA分子。
[0009]本专利技术的第四个方面，提供：一种表达体系，其可表达本专利技术第二个方面所述AAV病毒衣壳蛋白突变体MutE，或含有本专利技术第三个方面所述的DNA分子序列。
[0010]在一些表达体系的实例中，所述表达体系为重组AAV载体。AAV载体的衣壳蛋白被本专利技术衣壳蛋白突变体MutE替代。
[0011]在一些表达体系的实例中，所述AAV选自AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、
AAV8、AAV9或AAV10及其突变体中的任意一种。
[0012]在一些表达体系的实例中，所述表达体系还包括编码功能性基因产物的核酸分子。
[0013]本专利技术的第五个方面，提供：一种AAV载体，具有本专利技术第二个方面所述的AAV病毒衣壳蛋白突变体MutE。
[0014]本专利技术的第六个方面，提供：一种组合物，包括本专利技术第四个方面所述的表达体系及可接受的载体。
[0015]本专利技术的第七个方面，提供：一种转基因动物模型的构建方法，包括向动物体内导入本专利技术第六个方面所述的组合物。
[0016]本专利技术的有益效果是：本专利技术的一些实例的衣壳蛋白突变体MutE，可以有效提高AAV病毒大脑靶向性，从根本上解决AAV载体，特别是AAV9穿透血脑屏障效率的问题。
附图说明
[0017]图1为本发测试例中所构建的突变质粒的琼脂糖凝胶电泳鉴定图。
[0018]图2为本专利技术实施例中pAAV9包装质粒图谱。
[0019]图3为本专利技术实施例中构建得到的pAAV9
‑
MutE包装质粒图谱。
[0020]图4为本专利技术实施例中病毒包装三质粒系统的pAAV
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CAG
‑
Luciferase表达质粒图谱。
[0021]图5为本专利技术实施例中病毒包装三质粒系统的pHelper辅助质粒图谱。
[0022]图6为本发测试例中的本专利技术方案制备得到的腺相关病毒变体和对照组野生型腺相关病毒的病毒颗粒总量的检测结果图。
[0023]图7为本专利技术实施例的野生型和MutE感染小鼠6W活体成像图。
[0024]图8为本专利技术实施例的野生型和MutE感染小鼠6W的荧光定量图。
[0025]图9为本专利技术实施例的野生型Cap586
‑
588和MutE序列的序列比对图。
具体实施方式
[0026]以下将结合实施例对本专利技术的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本专利技术的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本专利技术的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本专利技术的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本专利技术保护的范围。实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到的试剂和材料。
[0027]实施例1本实施例提供了一种腺相关病毒变体（AAV9
‑
MutE），所述腺相关病毒变体的制备包括以下步骤：1、质粒构建通过基因合成（生工生物工程有限公司）MutE和Mut001
‑
Mut024等氨基酸序列(表1)对应的核酸序列，
将合成得到的序列通过现有方法克隆至pAAV9质粒，将Cap9 586
‑
588氨基酸替换成突变序列，构建pAAV
‑
突变质粒载体；连接产物转化大肠杆菌感受态DH5α，挑取单菌落进行酶切验证与测序验证。
[0028]表1序列名称序列信息序列编号AAV9
‑
MutESDGTVANPFR3AAV9
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Mut001SAQNISRING5AAV9
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Mut002SAQYNSRLNS6AAV9
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Mut003SAQNIIRSNG7AAV9
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Mut004SAQSISRISG8AAV9
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Mut005SAQRCSARSL9AAV9
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Mut006SAQTSCAGSL10AAV9
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Mut007SAQRSCATRL11AAV9
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Mut008SAQRCSMTRL12AAV9
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Mut009SAQRGSCGRL13AAV9
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Mut010SAQSSCGPST14AAV9
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Mut011SAQRSCGATL15AAV9
‑
Mut01本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.提高AAV病毒脑靶向性的多肽，其序列为SDGTVANPFR，用于替换野生型AAV9病毒衣壳蛋白的586
‑
588位氨基酸。2.一种AAV病毒衣壳蛋白突变体MutE，其特征在于，使用多肽SDGTVANPFR替换野生型AAV9病毒衣壳蛋白的586
‑
588位氨基酸得到。3.表达权利要求2所述AAV病毒衣壳蛋白突变体MutE的DNA分子。4.一种表达体系，其特征在于，其可表达权利要求2所述的AAV病毒衣壳蛋白突变体MutE，或含有权利要求3所述的DNA分子。5.根据权利要求4所述的表达体系，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：‑，
申请(专利权)人：广州译码基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：