猪营分证模型的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种猪营分证模型的构建方法，包括以下步骤：(1)选取健康的35～42日龄、7～11kg的大白猪，禁食禁水6～8小时；(2)肌肉注射大肠杆菌内毒素，注射剂量为：2μg/kg；(3)6小时后，采用鼻腔吸入猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的方式进行病毒感染，鼻腔吸入量为0.2～0.4mL/只；(4)病毒感染后，症状符合以下条件的，即为构建成功的猪营分证模型：体温升高1℃以上，精神萎靡，呼吸急促，舌质红绛且皮肤开始出现斑疹的，病程持续一周，一周后逐渐好转直至自然痊愈。本发明专利技术构建的猪营分证模型方法简单、易操作，临床症状明显、发病迅速、发病率高，模型稳定、可靠，适合于猪营分证防治用中药的研究。研究。研究。

【技术实现步骤摘要】
猪营分证模型的构建方法


[0001]本专利技术涉及一种猪营分证模型的构建方法，属于猪疾病模型的构建方法。

技术介绍

[0002]猪温热病是养猪场最常见的疾病之一，是以热象偏重为主要特征并具有季节性和不同程度传染性的一类疾病，一年四季均可发生，不分规模、品种、年龄的猪皆能发病，且其发病大多来势急骤、发展迅速，易在猪群中和群体间传播蔓延，造成大流行，给养猪场带来巨大经济损失。营分证是外感温热病的中期症状(持续高热一段时间后，出现斑疹，血瘀的症状)，若前期卫分证、气分证不解，则很快发展为营分证。养猪场常见的猪蓝耳病病毒、圆环病毒2型、狂犬病毒等一种或多种病毒与胸膜性肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、链球菌以及弓形体、附红细胞体等多种病原的混合感染，在发病2～3天即可进入营分证阶段。
[0003]对于猪温热病的治疗，现有技术中的抗病毒化学药物无明显效果且毒副作用非常大，有些病毒病可以用疫苗部分预防控制，但现有的疫苗质量参差不齐，效果很不稳定并且混合感染情况较多；更多的时候是依靠中药治疗，对症治疗是保证药效的首要前提。因此构建科学合理的病症模型是中药研究的重要任务。
[0004]构建猪营分证模型，研究者首先想到给予大量的某种特定细菌或者病毒注射感染以达到猪营分证症状，而这往往会导致毒素的扩散，并对猪体造成不可逆转的伤亡。注射大肠杆菌内毒素构建猪发热模型，生物安全危险较小，但高热维持时间较短，仅有4～12小时，并且注射菌液或大肠杆菌内毒素时引起动物发热迅速而强烈，如剂量掌握不当，往往造成动物死亡。目前有关于通过注射大肠杆菌内毒素构建猪发热模型的报道，比如CN 110251263A，其公开了一种巴马小型猪实热证候模型的造模方法，以巴马小型猪为实验动物，通过肌注大肠杆菌内毒素制造实热证候模型。再比如：陈洪，唐延崇等的“建立实验室猪发热模型”中提到“为筛选有效的退热药，需要建立稳定的实验室发热动物模型”，其采用脱脂牛奶经皮下注射给猪，可维持高热28～32小时，但不会形成猪营分证症状。因此，构建猪营分证的模型已成为中药研究的瓶颈之一。

技术实现思路

[0005]针对上述现有技术，为克服现有技术的不足，本专利技术提供了一种猪营分证模型的构建方法。本专利技术采用首先肌肉注射大肠杆菌内毒素的方法，降低猪体的抵抗力，再通过滴鼻感染低剂量猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒，成功地构建了稳定的猪营分证模型，为预防和治疗猪营分证中药的研究提供了可靠的疾病模型。
[0006]本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0007]一种猪营分证模型的构建方法，包括以下步骤：
[0008](1)选取健康的35～42日龄、7～11kg的大白猪，禁食禁水6～8小时；
[0009](2)肌肉注射大肠杆菌内毒素，注射剂量为：2μg/kg；
[0010](3)6小时后，采用鼻腔吸入猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的方式进行病毒感染；
[0011]所述猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒，TCID50(半数组织培养感染剂量，又称50％组织细胞感染量)为10
5.5
，鼻腔吸入量为0.2～0.4mL/只，优选0.3mL/只；
[0012](4)病毒感染后，症状符合以下条件的，即为构建成功的猪营分证模型：体温升高1℃以上，精神萎靡，呼吸急促，舌质红绛且皮肤开始出现斑疹的，病程持续一周，一周后逐渐好转直至自然痊愈。
[0013]本专利技术的猪营分证模型的构建方法，成功率高。利用本专利技术的构建方法得到的猪营分证模型，表现出：体温升高——精神沉郁——呼吸急促——舌质红绛——皮肤斑疹隐隐——自然痊愈(自然痊愈需要15天)的疾病进程，病程可持续一周，以后逐渐好转直至自然痊愈，不会导致猪的死亡，不会对猪造成不可逆的伤害。
[0014]本专利技术的猪营分证模型的构建方法，以肌注大肠杆菌内毒素(大肠杆菌内毒素造成的高热没有生物安全危险，且会在短时间内代谢掉大肠杆菌内毒素，对猪危害小)，鼻腔吸入猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的方式进行病毒感染(抵抗力下降后，少量病毒感染就会造成营分证，对动物损伤较小，不会造成死亡)(若肌肉注射猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒，对猪群的刺激较大，会导致发病较急，病程短且发病比较严重甚至死亡，不利于药物的预防或治疗效果的验证)。实验研究的结果显示，模型组大白猪直肠温度、体重、临床症状变化以及剖检病变、血常规指标(白细胞计数、血小板计数)及生化指标(肝功、肾功、血凝等)与对照组有显著性差异，这一系列特征符合猪营分证特点，证明猪营分证动物模型造模成功。
[0015]本专利技术通过筛选、优化感染剂量、感染方法等，构建的猪营分证模型方法简单、易操作，临床症状明显、发病迅速、发病率高，模型稳定、可靠(不会出现进一步恶化，如血分证、死亡等)，适合于猪营分证防治用中药的研究。本专利技术构建的猪营分证动物模型，可以为中西医研究工作提供基础技术支持，对动物生理、药理毒理、传染病、新药评价等具有重要的应用价值。
附图说明
[0016]图1：各组实验猪攻毒后直肠温度变化示意图。
[0017]图2：模型组的大白猪的照片。
具体实施方式
[0018]下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明。然而，本专利技术的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本专利技术的精神和范围的前提下，可以对本专利技术进行各种变化和修饰。
[0019]本专利技术对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本专利技术目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本专利技术仍然在此作尽可能详细描述。
[0020]下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。
[0021]本专利技术所采用的大肠杆菌内毒素(LPS)，型号：L2880，批号：0000114327，美国
Sigma公司。
[0022]本专利技术所采用的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒，毒株HP
‑
PRRSV 08F13，批号：20210106，青岛动保国家工程技术研究中心有限公司提供。
[0023]实验猪营分证模型的构建
[0024](一)在猪场正常饲养的大白猪中，选择12只35～42日龄、体重7～11kg的大白猪，随机分成对照组和模型组(营分证组)，每组6只。模型的构建方法如下：
[0025](1)禁食禁水6小时；
[0026](2)用生理盐水将大肠杆菌内毒素稀释至20μg/ml，模型组颈部肌肉注射，注射剂量为：2μg/kg；对照组肌肉注射等量的生理盐水；
[0027](3)6小时后，采用鼻腔吸入猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的方式进行病毒感染：猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒HP
‑
PRRSV 08F13的TCID50为10
5.5
，模型组鼻腔吸入量为0.3mL/只；对照组鼻腔吸入等量的生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪营分证模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)选取健康的35～42日龄、7～11kg的大白猪，禁食禁水6～8小时；(2)肌肉注射大肠杆菌内毒素，注射剂量为：2μg/kg；(3)6小时后，采用鼻腔吸入猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的方式进行病毒感染，鼻腔吸入量为0.2～0.4mL/只；(4)...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘月月，林树乾，杨世发，殷斌，黄中利，赵增成，吴家强，李桂明，
申请(专利权)人：山东省农业科学院家禽研究所山东省无特定病原鸡研究中心，
类型：发明
国别省市：