一种D-二聚体测定试剂盒制造技术

本发明专利技术属于体外诊断的生物检测试剂盒技术领域，公开了一种用于D

【技术实现步骤摘要】
一种D
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二聚体测定试剂盒


[0001]本专利技术属于生物检测试剂盒
，更具体的涉及一种检测灵敏度、精确度高，检测线性范围宽，且检测成本低的D
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二聚体(D
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Dimer)测定试剂盒。

技术介绍

[0002]纤维蛋白溶解系统(fibrinolysis system)是人体最重要的抗凝系统，由4种主要部分组成：纤溶酶原(plasmingen)、纤溶酶原激活剂(plasmingen activator,如t
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PA,u
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PA)、纤溶酶(plasmin)、纤溶酶抑制物(plasmin activator inhibitor,PAI
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1,antiplasmin)。当纤维蛋白凝结块(fibrin clot)形成时，在tPA的存在下,纤溶酶原激活转化为纤溶酶,纤维蛋白溶解过程开始,纤溶酶降解纤维蛋白凝结块形成各种可溶片段,形成纤维蛋白产物(FDP)，FDP由下列物质：X
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寡聚体(X
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oligomer)、D
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二聚体(D
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Dimer)、中间片段(Intermediate fragments)、片段E(Fragment E)组成。其中,X
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寡聚体和D
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聚体均含D
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二聚体单位。
[0003]人体纤溶系统，它对保持血管壁的正常通透性、维持血液的流动状态和组织修复起着重要作用。D
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二聚体血浆中水平增高说明存在继发性纤溶过程，而先生凝血酶,后又有纤溶系活化；并且也反映在血栓形成的局部纤溶酶活性或浓度超过血浆2％—抗纤溶酶活性或浓度。溶栓治疗是指用药物来活化纤维蛋白溶解系统。一般为投入一种纤溶酶原活化物如尿液酶、链激酶或组织型纤溶酶原活化物(tpA)，使大量纤溶酶生成，从而加速已形成血栓的溶解。FDP或D
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二聚体生成，则表明达到溶栓效果。
[0004]D
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二聚体(D
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Dimer)是交联纤维蛋白经纤溶酶作用后的终末产物，在凝血过程中，凝血酶在水解纤维蛋白原后，即相继释放出纤维蛋白肽A(FPA)和肽B(FPB)，剩余部分为可溶性纤维蛋白单体(SFM)，在转行酰胺酶作用下，SFM转变为纤维蛋白，继而血液凝固，其过程是经过一系列交联后完成，此后形成的纤维蛋白性质稳定，一般不溶解，但可被纤溶酶所降解，交联纤维蛋白在纤溶酶降解过程中逐渐生成若干种多聚体，D
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二聚体即是其特异的产物之一，其分子量为184000～202000。在病理状态下，凝血与纤溶的动态平衡遭到破坏，凝血倾向增强，从而纤维蛋白降解产物增加，导致D
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二聚体含量增加。D
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二聚体水平的增高，表明体内有纤维蛋白血栓形成和纤溶发生，所以临床上可作为体内高凝状态和纤溶亢进的分子标志物。
[0005]D
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二聚体常规的检测方法主要包括：乳胶凝集法、酶联免疫吸附法(ELISA)、胶乳增强免疫比浊法、免疫金标法等。其中，胶乳免疫比浊法具有操作简便、快速、定量准确、特异性强、敏感度高等优点，可满足门诊和急诊的需要，在临床应用中越来越广泛。
[0006]采用胶乳免疫比浊法具有方便、快捷、试剂易于保存等优点，已被广泛应用于免疫的各个领域，但该方法使用关键要解决其特异性、灵敏度及准确性的问题，这都需要选用具有高度特异性和高亲和力的单克隆抗体。
[0007]目前临床上使用较为广泛的D
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二聚体的这些检测方法：高效液相色谱法、亲和层析法、手工微柱法、电泳法、酶法、离子捕获法等。这些检测方法操作复杂、耗时，检测线性范
围窄(多数试剂线性范围为10mg/L FEU)，且需要特殊仪器，成本较高，有些检测方法还存在有检测准确度偏低的缺陷。

技术实现思路

[0008]综上所述，本专利技术的目的在于解决现有D
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二聚体(D
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Dimer)检测中存在的检测操作程序复杂、耗时费力、效率低、灵敏度差、准确率低，检测线性范围窄，且需要使用专业检测设备，检测成本相对较高的技术问题，而提供一种改进的、具有检测操作程序简单、灵敏度高、特异性好、准确性高、检测线性范围宽、检测稳定性好、成本低的D
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二聚体测定试剂盒。
[0009]为解决本专利技术所提出的技术不足，采用的技术方案为，一种D
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二聚体测定试剂盒，包括有试剂1和试剂2，其特征在于：所述的试剂1包括有胶乳微球0.05g/L～10g/L(浓度)、第一稳定剂0.01％～8％(质量分数)、第一缓冲液10mM～500mM(浓度)、促凝剂1％～6％(质量分数)、第一防腐剂0.01ml/L～10ml/L(浓度)和去离子水，所述的试剂2包括有D
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二聚体单克隆纳米抗体0.01mg/ml～1mg/ml(浓度)、第二缓冲液25mM～200mM(浓度)、第二防腐剂0.01ml/L～5ml/L(浓度)和去离子水。
[0010]其中，所述试剂1中的胶乳微球为具有磺酸基基团、羧基基团、酰胺基基团或醛基基团中一种或多种基团的疏水微球，包含粒径在60nm～150nm的小粒径微球和粒径在200nm～300nm的大粒径微球。
[0011]进一步的，所述的胶乳微球采用无乳化剂乳液聚合法合成，其中的小粒径微球与大粒径微球的质量比为(1～2):(3～6)。
[0012]优选的，所述胶乳微球的浓度为0.1g/L～6g/L。
[0013]优选的，所述胶乳微球中的小粒径微球的粒径为60nm～80nm，大粒径微球的粒径为280nm～300nm。
[0014]进一步的，所述试剂1中的第一稳定剂选自无机盐、金属络合剂、表面活性剂、抗氧剂中的一种或多种。
[0015]优选的，所述的无机盐选自氯化钠、氯化钾中的一种或多种；所述的金属络合剂选自甘氨酸、乙二胺四乙酸中的一种或多种；所述的表面活性剂选自N
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酰基牛磺酸、烷基磺基乙酸中的一种或多种；所述的抗氧剂选自受阻酚类抗氧剂、硫酯类抗氧剂、亚磷酸盐类抗氧剂、酯类抗氧剂中的一种或多种。
[0016]进一步的，所述试剂1中的第一缓冲液pH值为6.5～9，选自MOPSO
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Na缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种或多种。
[0017]优选的，所述第一缓冲液的浓度为30mM～100mM。
[0018]进一步的，所述试剂1中的促凝剂选自PEG6000、PEG8000中的一种或多种。
[0019]优选的，所述促凝剂的浓度为2％～3％。
[0020]进一步的，所述试剂1中的第一防腐剂选自叠氮钠、苯甲酸钠、山梨酸钾、proclin300中的一种或多种。
[0021]优选的，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种D
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二聚体测定试剂盒，包括有试剂1和试剂2，其特征在于：所述的试剂1包括有胶乳微球0.05g/L～10g/L、第一稳定剂0.01%～8%、第一缓冲液10mM～500mM、促凝剂1%～6%、第一防腐剂0.01ml/L～10 ml/L和去离子水，所述的试剂2包括有D
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二聚体单克隆纳米抗体0.01mg/ml～1mg/ml、第二缓冲液25mM～200mM、第二防腐剂0.01ml/L～5 ml/L和去离子水；其中，所述试剂1中的胶乳微球为具有磺酸基基团、羧基基团、酰胺基基团或醛基基团中一种或多种基团的疏水微球，包含粒径在60nm～150nm的小粒径微球和粒径在200nm～300nm的大粒径微球。2.根据权利要求1所述的一种D
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二聚体测定试剂盒，其特征在于：所述的胶乳微球采用无乳化剂乳液聚合法合成，其中的小粒径微球与大粒径微球的质量比为(1～2):(3～6)。3.根据权利要求1所述的一种D
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二聚体测定试剂盒，其特征在于：所述试剂1中的第一稳定剂选自无机盐、金属络合剂、表面活性剂、抗氧剂中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的一种D
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二聚体测定试剂盒，其特征在于：所述试剂1中的第一缓冲液pH值为6.5～9，选自MOPSO
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Na缓冲液、柠檬酸盐缓冲液、MES缓冲液、HEPES缓冲液、磷酸盐缓冲液、Tris缓冲液、硼酸盐缓冲液中的一种或多种。5.根据权利要求1所述的一种D
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【专利技术属性】
技术研发人员：黄银艳，李金洲，杨中英，陶湘婉，
申请(专利权)人：深圳市汇松科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：