本发明专利技术涉及一种正十六烷二元酸生产方法，属于化工技术领域，包括发酵转化和产物分离纯化，其特征在于发酵转化中培养基含有柠檬酸、氨水、辅酶Ｑ１０、生物素、铁离子、铜离子和锌离子，其中发酵过程中需要补加１－５ｇ／ｌ的磷酸盐和１－８ｇ／ｌ的硝酸盐；分离纯化采用盐析法，将发酵完的培养液降到１５－２０℃，直接加入重量浓度为５－３０％氯化钠进行盐析预处理。科学合理，方便操作，获得的产品纯度高，含氮量低，提高产品质量，扩大产品应用范围。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种，属于化工
技术介绍
长链二元酸是一系列特殊合成材料的基础单体原料，长链二元酸及其衍生单体可以生产尼龙，粉末涂料，香料，热熔胶特种润滑油，热熔胶棒等产品，应用非常广泛。 国外生产长链二元酸的方法主要有两种，一种是化学合成法，一种是化学合成法，以丁二烯为原料，通过化学合成法生产二元酸，另一种是生物合成法利用微生物发酵取得。化学合成法工艺复杂，成本高，而且不能生产比十二碳更长的二元酸，现在已经基本被淘汰。 发酵法生产长链二元酸是70年代微生物发酵技术在石油化工领域的应用，具有 原料来源广，反应专一性强和反应温和等特点，在国内外受到普遍重视。目前对十二碳， 十三碳二元酸的研究已经非常成熟，已经在工业规模上进行生产，对十四碳二元酸研究也 已取得阶段性成效，出现了有实际生产价值的专利文献，中国专利03105127. 8，CN1432648A 提出生产十四碳二元酸的方法，在二十五吨罐内，发酵清液中十四碳二元酸产量最高达 242. 8g/L，后处理收率82 % ，纯度达到98. 2 % 。 但是对十六碳二元酸的研究却仍然处于实验室摸索阶段，通常情况下发酵十六烷 二元酸产品含氮量高，一般在5-6卯m，多的高达8ppm以上，产品在医药中间体应用受到限 制，同时在应用于高档尼龙上已受到限制，因此，需要继续研究解决生产十六碳二元酸产品 含氮量高的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，科学合理，方便操作，获得 的产品纯度高，含氮量低，提高产品质量，扩大产品应用范围。 本专利技术所述的，包括发酵转化和产物分离纯化，其特征 在于发酵转化中培养基含有柠檬酸、氨水、辅酶Q10、生物素、铁离子、铜离子和锌离子。 其中 柠檬酸浓度为l-5g/1。 氨水浓度为l-5卯m。 辅酶QIO浓度为0. OOOl-lOO卯m，优选为0. 001-20卯m。 生物素(维生素H)浓度为0. OOOl-lOO卯m，优选为0. 001-50卯m。铁离子浓度为l-1000卯m，优选为10-200卯m，由氯化亚铁提供。铜离子浓度为0. 001—-100卯m，优选为0. 01-30卯m，由硫酸铜提供。锌离子浓度为0. 001-50卯m，优选为0. 01-28卯m，由硫酸锌提供。 发酵过程中最好补加l-5g/1的磷酸盐和l-8g/1的硝酸盐，改善效果。 分离纯化采用盐析法，将发酵完的培养液降到15-2(TC，直接加入重量浓度为35-30 %氯化钠进行盐析预处理，可获得更好的效果。 在实际操作中，通常先制备发酵种子，用于本专利技术的培养基。 10个巴林糖度的麦芽汁加2%琼脂制成的古体克氏瓶斜面。 烷烃液体种子培养基包含蔗糖10-50g/L，金属磷酸盐l-12g/L，酵母膏 1. 0-3. Og/L，玉米桨1. 0-3. Og/L，尿素1. 0-3. Og/L， NaClO. 5-1. 5g/L， nC16正构烷烃体积浓 度O-O. 5% (V : V)，自来水配制，pH自然。 通常，培养种子的过程为取一环接种酵母菌体，涂布在克氏瓶麦芽汁固体斜面 上，于28-3(TC培养40-48小时。取上述培养好的克氏瓶2_3个，将菌种全部刮入100ml无 菌水中，适当摇匀后作为一级种子罐的种子。接种一级种子罐后，28-3(TC培养24-32个小 时，当菌株生长光密度(0D)达到0.5以上，接种二级种子罐，28-3(TC培养16-24小时，当菌 株生长光密度(0D)达到0. 5以上，准备接种发酵罐。 在获得发酵种子后，将其接种于发酵罐中，进行间歇式发酵。过程通常分为两个阶 段 (1)菌体生长阶段即让菌体在适合生长的条件下生长，直到菌体生长到一定程 度(如光密度大于0. 6)。 (2)生产阶段当菌体生长到预定程度(如光密度大于0.6)后，添加nCw烷烃，从 而在热代假丝酵母作用下生产a，"-正长链十六碳二元酸。 在本专利技术中，把生长好的种子接入pH4. 0-7. 0，最好为5. 5_6. 5的培养基中，发 酵培养基的组成葡萄糖10-50g/L，磷酸二氢钾l-12g/L，柠檬酸l-5g/L、氯化钠0. lg/L、 氨水流加维持浓度l-5卯m、辅酶Q100. OOlppm—-20卯m、生物素0. 001ppm-50卯m、镁离子 lppm-80卯m、锰离子l卯m-100卯m、铁离子lppm-1000ppm、铜离子0. 01ppm-30卯m、锌离子 0. 01ppm-28ppm，KN030 . 5-1. 5g/L，在25_35°C ，最好在28-32。C通风发酵140-170小时。4-6 小时开始流加葡萄糖，8小时开始流加氨水，20小时前，pH控制在4. 5，以菌体生长为主。当 菌体生长光密度大于0.6，开始流加烷烃，控制发酵液中烷烃浓度维持在5% (V : V)左右， 同时调节pH至7. 0，48小时内，每四小时用NaOH溶液调节pH至7. 0， 48-72小时，每四小时 用NaOH溶液调节pH至7. 5， 72-120小时，每四小时用NaOH溶液调节pH至7. 8， 120小时至 放罐，每四小时用NaOH溶液调节pH至8. 0. 28小时开始补加辅酶Q10，72小时开始补加磷 酸二氢钾，根据发酵情况适时补加硝酸钾，补加浓度为硝酸钾l-5g/L，硝酸钾l-8g/L。 在发酵过程中或发酵结束后，将生产的a ，"-正长链十六碳二元酸从发酵液中 分离出来，在发酵结束后，降温到l(TC，加入适量的氯化钠盐析，过滤，得到含菌体的二元酸 钠盐，加水升温95°C ，加入液碱调ph9. 0，活性炭脱色，酸化结晶，烘干得二元酸粗算，经过 冰醋酸精制得二元酸。总收率为92. 5% ，总酸为99. 0，单酸为97. 1 % ，含氮量2. 9ppm，都在 3ppm以下。用本专利技术发酵生产十六碳二元酸的方法，在20n^罐上发酵144小时，原液十六 烷二元酸含量高达190g/L以上，发酵重量转化率达90%以上，后处理收率大于92%，产品 纯度97%以上。 本专利技术充分分析了产二元酸酶系的特点，以磷酸盐、其他微量无机盐、葡萄糖、柠 檬酸、氯化钠、氨水为原料发酵培养基生产十六烷二元酸，在发酵培养基中不使用酵母膏、 玉米浆和尿素，最终产品含氮量低，产品纯度高，提高产品质量，扩大产品应用范围，而且科 学合理，方便操作，利于工业化操作。具体实施例方式下面结合实施例对本专利技术作进一步说明。 实施例1 (1)取一接种环菌种，涂布在克氏瓶麦芽汁斜面上29t:培养两天。 (2)取上述菌种斜面一个，用10ml无菌水将菌体全部洗下，接入装有300ml烷烃种子培养基的5L三角瓶中，于29t:培养24小时。烷烃种子培养基的成分为蔗糖15g/L，KH2P048g/L，酵母膏2g/L，玉米浆lg/L，尿素1. 5g/L， C16正烷烃40ml/L，自来水配置，pH自然。 (3)在装有16L培养基的30L发酵罐中，按10 %的接种量接入上述种子液，开始发 酵。发酵培养基成分为葡萄糖10g/L，柠檬酸3g/L， KH2P048g/L， NaCllg/L， KN037g/L氨水 流加、辅酶Q10补加5ppm、生物素l卯m、镁离子20卯m、锰离子10卯m、铁离子50卯m、铜离子 18卯m、锌离子25卯m，无菌水配本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种正十六烷二元酸生产方法，包括发酵转化和产物分离纯化，其特征在于发酵转化中培养基含有柠檬酸、氨水、辅酶Ｑ１０、生物素、铁离子、铜离子和锌离子。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：苏庆旺，李承雷，王云，杜周侠，张亮，吴英华，
申请(专利权)人：淄博广通化工有限责任公司，
类型：发明
国别省市：37[中国|山东]
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