一种钩状木霉菌YN-4及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种钩状木霉菌YN

【技术实现步骤摘要】
一种钩状木霉菌YN
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4及其应用


[0001]本专利技术涉及生物防治
，具体涉及一种钩状木霉菌YN
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4及其应用。

技术介绍

[0002]箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.是小檗科淫羊藿属多年生草本植物，为我国传统中药材淫羊藿的基源之一，以叶入药，具有补肾阳，强筋骨，祛风湿的药用功效。现代药理研究表明，淫羊藿具有抗肿瘤、抗炎、抗骨质疏松、有益于神经系统、保护心血管等多种功能。淫羊藿中的黄酮醇类化合物淫羊藿苷的衍生物淫羊藿素具有显著的抗癌活性，目前淫羊藿素(阿可拉定，Icaritin)软胶囊已于2022年1月份被国家药品监督管理局(NMPA)批准上市用于晚期肝癌治疗，而中药材淫羊藿是淫羊藿苷的唯一来源。同时淫羊藿作为临床常用中药，在医药、保健等领域应用广泛，是多种药物及保健产品的主要原料，也是最具开发潜力和市场潜力的中药之一。
[0003]近几年淫羊藿需求量激增、价格不断上涨，导致对野生淫羊藿的掠夺性采挖从而引起野生资源枯竭。目前箭叶淫羊藿的人工栽培已成功实现，并成为药用淫羊藿属植物中栽培面积最大的物种，也成为国内外药用淫羊藿的主要来源。目前，在河南省驻马店地区建立了全亚洲最大的箭叶淫羊藿种植基地，也成为全国人工栽培淫羊藿药材的主要供应地。随着箭叶淫羊藿引种驯化和长期无性繁殖，出现了多种病害问题，而其中较为严重的病害是箭叶淫羊藿叶部病害，而淫羊藿的药用部位是叶子，叶部病害的发生会严重影响淫羊藿的产量和质量。经过病害调查及鉴定发现箭叶淫羊藿叶部病害包含多种不同的真菌病害，其中炭疽病是河南产区主要叶部病害之一，发病率可达30
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40％，对箭叶淫羊藿的产量和质量造成了严重影响。
[0004]目前防治植物真菌病害的主要手段是化学农药，但化学农药的大量使用会造成农药残留、环境污染等问题，而箭叶淫羊藿的药用部位是叶子，若大量使用化学农药进行病害防治会造成农残超标等问题，导致产品不合格，而药典中也对中药材的农残问题进行了严格限制。近几年随着生态种植的兴起，病害的微生物防治也成为一种重要的生物防治手段，而高效生防菌的获得是进行植物微生物病害防治的基础。目前还未见针对箭叶淫羊藿炭疽病的生防菌的相关报导，并且市面上出现的商业化的生防菌经过申请人前期试用发现效果不佳，同时施用多种农药后进行防治也未达到理想效果。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术存在的上述不足，本专利技术的目的是提供一种钩状木霉菌YN
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4及其应用，该钩状木霉菌YN
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4可有效抑制箭叶淫羊藿炭疽病病菌的生长，并在大田实验中对箭叶淫羊藿炭疽病具有优良的防治作用，为箭叶淫羊藿炭疽病的生物防治提供新的生防菌剂。
[0006]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：本专利技术的第一个目的是提供一种钩状木霉菌(Trichoderma hamatum)，将其命名为钩状木霉菌YN
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4，于2022年8月8日在中国微生
物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCC No.40268，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0007]本专利技术的第二个目的是提供了上述钩状木霉菌YN
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4在预防和/或治疗箭叶淫羊藿炭疽病方面的应用。
[0008]本专利技术的第三个目的是提供一种生物制剂，该生物制剂包括上述钩状木霉菌YN
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4，该生物制剂可以是钩状木霉菌YN
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4的发酵液或者直接将钩状木霉菌YN
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4菌体制成固体制剂如悬浮剂或粉剂等，或者以钩状木霉菌YN
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4作为唯一活性成分或者主要活性成分再与辅料配合制成的制剂。
[0009]本专利技术具有以下有益效果：
[0010]本专利技术通过对箭叶淫羊藿叶子的内生菌进行分离，筛选得到一种可高效抑制箭叶淫羊藿炭疽病病菌生长的内生真菌，该内生真菌经形态学和ITS分子生物学鉴定，确定为钩状木霉(Trichoderma hamatum)将其命名为钩状木霉YN
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4，并将该钩状木霉YN
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4用于田间防效实验也达到了理想的病害防治效果，并且防病效果远高于化学农药多菌灵及咪酰胺锰盐，是一种绿色无污染的生防菌，可以减少化学农药的使用，同时由于该拮抗真菌分离自健康的箭叶淫羊藿植株，所以该拮抗真菌对环境十分友好，符合国家对生态农业种植的要求，在中药材淫羊藿病害的生态防治领域具有十分广阔的应用前景。
附图说明
[0011]图1为钩状木霉YN
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4在PDA培养基上的菌落形态，其中图1
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A为菌落形态，图1
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B为显微镜下孢子的形态。
[0012]图2为钩状木霉YN
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4对引起箭叶淫羊藿炭疽病的炭疽病菌的平板抑制效果，其中图2
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A为炭疽病菌对照，图2
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B为拮抗真菌YN
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4与炭疽病菌的平板对峙。
[0013]图3为菌株YN
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4的系统发育树。
[0014]图4为钩状木霉YN
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4在田间试验中对箭叶淫羊藿炭疽病的防治效果图，其中图4
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A为健康箭叶淫羊藿对照，图4
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B为炭疽病菌侵染后发病的箭叶淫羊藿，图4
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C为喷施拮抗真菌YN
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4防治炭疽病后的箭叶淫羊藿。
具体实施方式
[0015]以下所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0016]实施例1：菌株的分离、纯化、鉴定
[0017]一、内生拮抗菌的分离
[0018]箭叶淫羊藿植株样本的采集：2021年从河南省驻马店市平舆县箭叶淫羊藿GAP种植基地采集健康的箭叶淫羊藿植株用于分离内生菌。
[0019]取新鲜健康的箭叶淫羊藿植株，用清水洗去表面泥土在超净工作台中依次用75％乙醇、0.1％升汞溶液、75％乙醇浸泡叶子，然后用无菌水清洗5
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7次，放置在无菌吸水纸上晾干，取最后一次清洗水涂布于LB培养基上，37℃培养检测表面消毒是否彻底。用无菌刀片将箭叶淫羊藿叶子切成长宽约0.2
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0.3cm的叶片组织，将叶片组织转移至含0.1％氯霉素的
PDA培养基上，28℃进行培养，待叶片周围长出真菌菌落后，挑取菌落边缘菌丝接种至PDA平板上，长出菌落产孢后，挑取孢子用无菌水稀释后涂布至PDA培养基上，长出单菌落后分别挑取不同的单菌落单独进行培养，获得纯培养物后保存、备用。
[0020]上述使用的PDA培养基成分：马铃薯200g/L，葡萄糖20g/L，琼脂15
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20g/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种钩状木霉菌(Trichoderma hamatum)，命名为钩状木霉菌YN
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4，于2022年8月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.40268，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.权利要求1所述的钩状木霉菌YN

【专利技术属性】
技术研发人员：初雷霞，赵永坡，侯文川，杨林林，董宁，董诚明，苏秀红，乔璐，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：