一种防治烟草黑胫病的菌剂制造技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，具体公开一种防治烟草黑胫病的菌剂，具体的公开一种帕勒隆尼氏假单胞菌株(Pseudomonaspalleroniana)YC2202，保藏编号为CCTCCNO：M20221714，保藏日期为2022年11月02日，保藏地址为中国典型培养物保藏中心，本发明专利技术从烟草根际土壤中分离拮抗菌群，筛选获得帕勒隆尼氏假单胞菌株YC2202，对烟草黑胫病抑菌率达到81.15％，盆栽实验下的防治效果达75.33％，特别的和诱抗剂甲噻诱胺结合使用后，防治效果达到87.67％，为烟草黑胫病的防控提供新颖和实际有效的技术支持。胫病的防控提供新颖和实际有效的技术支持。

【技术实现步骤摘要】
一种防治烟草黑胫病的菌剂


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一种防治烟草黑胫病的菌剂。

技术介绍

[0002]烟草黑胫病，俗称“烟草黑根”、“黑秆疯”，是由寄生疫霉(Phytophthora parasiticavar.nicotianae)引起的一类危害烟草的重要土传真菌性病害。目前，化学防治仍是防治烟草黑胫病的重要手段，但是长期使用化学农药容易增加致病，菌抗药性，导致农药残留、环境污染、生态平衡破坏、烟叶品质降低等一系列问题。随着“绿色植保”概念的提出，具有安全、低毒、高效等优点的生物防治越来越被人们所青睐。
[0003]获得高效拮抗菌株是进行生物防治的基础，已报道的烟草疫霉拮抗菌有芽孢杆菌、放线菌、木霉等，在防治烟草黑胫病中发挥了重要作用。但不同的微生物适应性不尽相同，贵州作为烤烟种植大省，基于本地的地理环境，何种有益微生物能更好地防控烟草黑胫病还不清楚。因此，分离拮抗菌群并从中筛选高效生防菌，研究其生防效果，对生防菌株的应用具有重要的理论和现实意义。然而，单一生防菌在作用机制单一、受环境影响大和田间应用不稳定等方面存在一定的局限性，使用植物诱抗剂，能够激发植物体产生防御反应从而减轻病原菌对植物的侵害，受到研究者的关注。
[0004]本研究从烟草根际土壤中分离拮抗菌群，并筛选发挥作用的拮抗菌株，研究其对烟草疫霉的抑制作用，评价拮抗菌株生防效果，以期为烟草黑胫病的绿色防控积累重要生物资源，进一步的将筛选后获得的拮抗菌株与植物诱抗剂协同作用，为烟草黑胫病的防控提供新颖和实际有效的技术支持。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的是提供一种防治烟草黑胫病的菌剂以解决
技术介绍
中存在的问题，为实现以上目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]一种帕勒隆尼氏假单胞菌株(Pseudomonaspalleroniana)YC2202，其特征在于，保藏编号为CCTCCNO：M20221714，保藏日期为2022年11月02日，保藏地址为中国典型培养物保藏中心。
[0007]本专利技术还提供了一种菌剂，包括所述的帕勒隆尼氏假单胞菌株(Pseudomonas palleroniana)YC2202的发酵液或其加工物。
[0008]进一步的，所述帕勒隆尼氏假单胞菌株(Pseudomonaspalleroniana)YC2202的发酵液使用的培养基为NB培养基。
[0009]进一步的，本专利技术提供的菌剂主要应用在拮抗烟草疫霉和防治烟草黑胫病中。
[0010]进一步的，本专利技术还提供了一种防治烟草黑胫病的方法，包括以下步骤：
[0011]S1：根部使用浓度不小于1
×
108个菌/mL的帕勒隆尼氏假单胞菌株(Pseudomonaspalleroniana)YC2202菌液进行灌根；
[0012]S2：灌根后喷施浓度为20mg/L的甲噻诱胺。
[0013]本研究从烟草根际土壤中分离拮抗菌群，筛选获得帕勒隆尼氏假单胞菌株YC2202，对烟草黑胫病抑菌率达到81.15％，盆栽实验下的防治效果达75.33％，特别的和诱抗剂甲噻诱胺结合使用后，防治效果显著提升达到87.67％，为烟草黑胫病的防控提供新颖和实际有效的技术支持。
附图说明
[0014]图1YC2202菌株培养形态图；
[0015]图2YC2202菌株初筛过程中对烟草黑胫病菌的抑菌效果图；
[0016]图3YC2202菌株粗提物对烟草黑胫病菌的抑菌效果图。
具体实施方式
[0017]为了更好地解释本专利技术，以下结合具体实施例进一步阐明本专利技术的主要内容，但本专利技术的内容不仅仅局限于以下实施例。本专利技术所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规技术，所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。
[0018]本专利技术实施例中所用试剂和材料如下：
[0019]DNA快速提取试剂盒(北京全式金生物技术有限公司，货号EE161
‑
01)；
[0020]甲噻诱胺原药(利尔化学股份有限公司)；
[0021]其他药剂均为国药分析纯(AR)。
[0022]烟草黑胫病病原菌(Phytophthoranicotianae)：由贵州省烟草科学研究院取典型黑胫病发病病株分离保存。盆栽试验品种为云烟87。
[0023]拮抗菌分离、培养和测定所用的培养基如下：
[0024]LB固体培养基(g/L)：胰蛋白胨10.0g，酵母提取物5.0g，氯化钠10.0g，琼脂粉20.0g蒸馏水1L，调节pH6.8；
[0025]NB液体培养基(g/L)：牛肉浸膏3.0g，蛋白胨6.0g，酵母粉1.0g，葡萄糖10.0g，蒸馏水1L。
[0026]NB固体培养基(g/L)：牛肉浸膏3.0g，蛋白胨6.0g，酵母粉1.0g，葡萄糖10.0g，琼脂粉15.0g，蒸馏水1L
[0027]燕麦培养基OA(g/L)：燕麦片18g，琼脂18.0g，蒸馏水1L，调节pH6.8。
[0028]实施例1菌株的分离及鉴定
[0029]一种帕勒隆尼氏假单胞菌株(Pseudomonaspalleroniana)YC2202，保藏编号为CCTCCNO：M20221714，保藏地址为中国典型培养物保藏中心，具体的该培养物于2022年11月02日由保藏中心收到，并登记入册，根据请求，由2022年11月02日起保存三十年，在期满前收到提供培养物样品的请求后再延续保存五年，该培养物的存活性由保藏中心于2022年11月09日检测完毕，结果为存活。
[0030]1、土壤样品采集
[0031]2022年7月从贵州福泉发病的红花大金元(易感品种)烟地采集了健康烟草根际土，将整株烟株带根挖出，抖落非根际土，将根及附着的根际土壤放入无菌自封袋，低温运回实验室进行菌株分离培养。
[0032]2、菌株分离培养
[0033]称取1g样品放到10mL带塞试管中，加入9mL灭菌水，室温下，200r/min，震荡1h。取上清液1mL梯度稀释至10
‑4、10
‑5、10
‑6倍，分别用涂布器在LB培养基上均匀涂布，放于30℃培养箱恒温培养3d。挑取生长性状不同的单菌落25株，作为拮抗菌的候选菌，进行纯化培养(用接种环挑取单菌落，在LB固体培养基上划线，封口后，放于30℃培养箱恒温培养48h，按照上述步骤重复1
‑
2次，获得纯化的单菌落)并保存。
[0034]3、拮抗菌候选菌对黑胫病菌的拮抗作用
[0035]采用对峙培养法(图2)，用灭菌的打孔器(直径5mm)将烟草黑胫病菌接种到燕麦平板培养基(OA)上，候选菌在离烟草黑胫病菌饼2.5cm处平行两侧划两条短线(用接种环沾取少量菌液后，在培养基上划两道，长度约0.5cm)，此为处理组，对照组采用不含候选菌的空白OA培养液。然后倒置放入30℃恒温箱中培养5d，检查黑胫病菌菌落周围有无抑菌带，并利用十字交叉法测量其抑菌本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种帕勒隆尼氏假单胞菌株(Pseudomonas palleroniana)YC2202，其特征在于，保藏编号为CCTCC NO：M20221714，保藏日期为2022年11月02日，保藏地址为中国典型培养物保藏中心。2.一种菌剂，其特征在于，包括权利要求1所述的帕勒隆尼氏假单胞菌株(Pseudomonas palleroniana)YC2202的发酵液或其加工物。3.据权利要求2所述的一种菌剂，其特征在于，所述帕勒隆尼氏假单胞菌株(Pseudomonas palleroniana...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹毅，阳显斌，韩小斌，卢志刚，张思聂，陆宁，张明娅，
申请(专利权)人：贵州省烟草科学研究院，
类型：发明
国别省市：