靶向CAIX抗原的纳米抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了抗CAIX单域抗体及其应用。具体地，本发明专利技术提供了一种抗CAIX单域抗体及其VHH链。本发明专利技术还提供了编码上述单域抗体或其VHH链的编码序列、相应的表达载体和能够表达该单域抗体的宿主细胞，以及本发明专利技术单域抗体的生产方法。生产方法。生产方法。

【技术实现步骤摘要】
靶向CAIX抗原的纳米抗体及其应用
[0001]本分案申请是基于申请号为CN201910853699.9，申请日为2019年09月10日，专利技术名称为“靶向CAIX抗原的纳米抗体及其应用”的原始中国专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术涉及生物医学或生物制药
，更具体地涉及一种靶向CAIX抗原的纳米抗体及其应用。

技术介绍

[0003]CAIX是一种表达在多种实体肿瘤细胞中的跨膜蛋白。CAIX的主要功能是在实体肿瘤常见的低氧条件下维持胞内pH的稳态。CAIX在肿瘤细胞中的表达被认为是肿瘤环境的低氧标志蛋白和患者较差的预后。常见的表达CAIX的肿瘤类型包括子宫颈癌、肾癌、脑癌、头颈癌、食管癌、肠癌、乳腺癌、卵巢癌、子宫内膜癌、膀胱癌等。正常组织中，CAIX主要表达在胆管和小肠的上皮细胞，以及胃上皮细胞等，但是与肿瘤细胞不同，正常组织中表达的CAIX主要定位在胞质中。因此，CAIX是包括内靶向治疗非常理想的治疗靶点。
[0004]目前，两个进展最快的靶向CAIX抗原的抗体药物都已经进展到临床阶段。一个是Wilex AG公司研发的Girentuximab人鼠嵌合单克隆抗体药物，目前在Ⅲ期临床实验中用于肾细胞癌的临床诊断(NCT03849118)；另一个是Bayer AG、Morphosys和Seattle Genetics三家公司共同开发的靶向CAIX的抗体偶联药物(CA9
‑
ADC)，目前临床试验已经推进到临床Ⅰ期，用于实体肿瘤的临床治疗。此外，Dana
‑
>Farber肿瘤研究所还开发了靶向CAIX的CAR
‑
T疗法，目前处于临床前研究阶段。
[0005]开发一种抗CAIX纳米抗体，使其具有较好的特异性、更佳的临床药效，并且生产简便，能够降低生产成本，减轻患者用药负担，已经成为亟待解决的问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一种抗CAIX单域抗体及其应用。
[0007]具体地，本专利技术的目的在于提供一种对实体瘤具有良好的抑制作用，且具有较好的特异性的单域抗体。
[0008]本专利技术的第一方面，提供了一种抗CAIX单域抗体VHH链的互补决定区CDR区，所述VHH链的互补决定区CDR包括：
[0009]SEQ ID NO.5n+1所示的CDR1，
[0010]SEQ ID NO.5n+2所示的CDR2，和
[0011]SEQ ID NO.5n+3所示的CDR3；
[0012]其中，各n独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11；
[0013]其中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留CAIX结合亲和力的衍生序列。
[0014]在另一优选例中，所述的CDR1、CDR2和CDR3被框架区FR1、FR2、FR3和FR4所隔开。
[0015]本专利技术的第二方面，提供了一种抗CAIX单域抗体的VHH链，所述的VHH链包括框架区FR和本专利技术的第一方面所述的互补决定区CDR。
[0016]在另一优选例中，所述的框架区FR包括：
[0017](a)SEQ ID NO.4m+71所示的FR1、SEQ ID NO.4m+72所示的FR2、SEQ ID NO.4m+73所示的FR3、SEQ ID NO.4m+74所示的FR4；其中，各m独立地为0、1、2、3或4。
[0018]在另一优选例中，所述的抗CAIX单域抗体的VHH链的氨基酸序列如：
[0019](i)SEQ ID NO.5n+4所示，其中，各n独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11；或
[0020](ii)SEQ ID NO.2m+61所示，其中，各m独立地为0、1、2、3或4。
[0021]在另一优选例中，所述的抗CAIX单域抗体的VHH链如SEQ ID NO.4、9、14、19、24、29、34、39、44、49、54、59、61、63、65、67或69所示。
[0022]此外，还提供一种抗CAIX单域抗体的重链可变区，所述的重链可变区包括：
[0023]SEQ ID NO.5n+1所示的CDR1，
[0024]SEQ ID NO.5n+2所示的CDR2，和
[0025]SEQ ID NO.5n+3所示的CDR3；
[0026]其中，各n独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11。
[0027]本专利技术的第三方面，提供了一种抗CAIX单域抗体，它是针对CAIX表位的单域抗体，并且具有本专利技术的第二方面所述的VHH链。
[0028]在另一优选例中，所述抗CAIX单域抗体包括单体、二价体(二价抗体)、和/或多价体(多价抗体)。
[0029]在另一优选例中，所述抗CAIX单域抗体包括一条或多条具有如：
[0030](i)SEQ ID NO.5n+4所示的氨基酸序列的VHH链，其中，各n独立地为0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或11；和/或
[0031](ii)SEQ ID NO.2m+61所示的氨基酸序列的VHH链，其中，各m独立地为0、1、2、3或4。
[0032]在另一优选例中，所述抗CAIX单域抗体的VHH链序列如SEQ ID NO.4、9、14、19、24、29、34、39、44、49、54、59、61、63、65、67或69所示。
[0033]在另一优选例中，所述抗CAIX单域抗体包括两条具有如SEQ ID NO.4、9、14、19、24、29、34、39、44、49、54、59、61、63、65、67或69中所示的氨基酸序列的VHH链。
[0034]在另一优选例中，所述抗CAIX单域抗体具有如SEQ ID NO.4、9、14、19、24、29、34、39、44、49、54、59、61、63、65、67或69中所示的氨基酸序列的VHH链。
[0035]在另一优选例中，所述两条具有如SEQ ID NO.4、9、14、19、24、29、34、39、44、49、54、59、61、63、65、67或69中所示的氨基酸序列的VHH链之间通过连接子进行连接。
[0036]在本专利技术的一个优选例中，所述连接子选自以下序列：(G
a
S
b
)
x
—(G
m
S
n
)
y
，其中a，b，m，n，x，y＝0或1或2或3或4或5或6或7或8或9或10(较佳地，a＝4而b＝1，m＝3而n＝1)。
[0037]在本专利技术的一个优选例中，所述连接子选自下组：GGGGSGGGS(SEQ ID NO.91)、GS(SEQ ID NO.92)、GGGGS(SEQ ID NO.93)。
[0038]在另一优选例中，所述抗CAIX单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗CAIX单域抗体VHH链的互补决定区CDR区，其特征在于，所述VHH链的互补决定区CDR包括：SEQ ID NO.16所示的CDR1，SEQ ID NO.17所示的CDR2，和SEQ ID NO.18所示的CDR3；其中，上述氨基酸序列中任意一种氨基酸序列还包括任选地经过添加、缺失、修饰和/或取代至少一个氨基酸的，并能够保留CAIX结合亲和力的衍生序列。2.一种抗CAIX单域抗体的VHH链，其特征在于，所述的VHH链包括框架区FR和权利要求1所述的互补决定区CDR，优选地，所述的框架区FR包括：(a)SEQ ID NO.79所示的FR1、SEQ ID NO.80所示的FR2、SEQ ID NO.81所示的FR3、SEQ ID NO.82所示的FR4。3.如权利要求2所述的VHH链，其特征在于，所述的抗CAIX单域抗体的VHH链如SEQ ID NO.19或65所示。4.一种抗CAIX单域抗体，其特征在于，它是针对CAIX表位的单域抗体，并且具有权利要求2所述的VHH链。5.如权利要求4所述的抗CAIX单域抗体，其特征在于，所述单域抗体包含一条或多条具有如:(i)SEQ ID NO.19所示的氨基酸序列的VHH链；和/或(ii)SEQ ID NO.65所示的氨基酸序列的VHH链。6.如权利要求4所述的单域抗体，其特征在于，所述抗CAIX单域抗体的VHH链序列如SEQ ID NO.19或65所示。7.如权利要求4所述的单域抗体，其特征在于，所述抗CAIX单域抗体包括两条具有如SEQ ID NO.19或65中所示的氨基酸序列的VHH链。8.如权利要求4所述的单域抗体，其特征在于，所述抗CAIX单域抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO.65所示。9.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码选自下组的蛋白质：权利要求1所述的抗CAIX单域抗体VHH链的CDR区、权利要求2所述的抗CAIX单域抗体的VHH链、权利要求4所述的抗CAIX单域抗体。10.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求9所述的多核苷酸。11.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求10所述的表达载体，或其基因组中整合有权利要求9所述的多核苷酸。12.一种产生抗CAIX单域抗体的方法，其特征在于，包括步骤：(a)在适合产生单域抗体的条件下，培养权利要求11所述的宿主细胞，从而获得含所述抗CAIX单域抗体的培养物；以及(b)从所述培养物中分离或回收所述的抗CAIX单域抗体；以及(c)任选地，纯化和/或修饰步骤(b)中获得的CAIX单域抗体。13.一种免疫偶联物，其特征在于，该免疫偶联物含有：(a)如权利要求2所述的抗CAIX单域抗体的VHH链、或如权利要求4所述的抗CAIX单域抗体；和
(b)选自下组的偶联部分：可检测标记物、药物、毒素、细胞因子、放射性核素、酶、金纳米颗粒/纳米棒、纳米磁粒、病毒外壳蛋白或VLP、或其组合。14.权利要求2所述的抗CAIX单域抗体的VHH...

【专利技术属性】
技术研发人员：缪小牛，徐祎凤，伊刚，李志远，曾竣玮，刘晓林，
申请(专利权)人：普米斯生物技术珠海有限公司，
类型：发明
国别省市：