一种联合型标志物及应用和检测试剂盒与评分方法技术

本发明专利技术涉及一种联合型标志物及应用和检测试剂盒与评分方法。本发明专利技术通过检测受试者肝癌组织和近端癌旁组织样本中十四烷酸、十六烷酸、顺式

【技术实现步骤摘要】
一种联合型标志物及应用和检测试剂盒与评分方法


[0001]本专利技术涉及一种新的小分子联合型标志物检测试剂盒，及其在肝癌预后风险评估中的应用。属于分析化学及临床医学领域。

技术介绍

[0002]肝癌是世界范围内最常见的原发性恶性肿瘤之一，在世界范围内每年约840万例新发病例，并有780万人死于肝癌(参考文献1：Bray F,Ferlay J,Soerjomataram I,et al.Global cancer statistics 2018:GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36cancers in 185countries[J].CA:A Cancer Journal for Clinicians,2018,68(6):394
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424)。中国是世界上肝癌发病率和死亡率较高的国家之一，在中国肝癌致死率仅次于肺癌和胃癌(参考文章2：Chen W Q,Zheng R S,Baade P D,et al.Cancer statistics in China,2015[J].CA:A Cancer Journal for Clinicians,2016,66(2):115
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132)。现在已经明确多种诱发肝癌的危险因素，如肝硬化(由炎症和纤维化引起的慢性肝损伤)，乙型肝炎病毒感染，丙型肝炎病毒感染，酒精滥用和代谢综合征等(参考文章3：Forner A,Reig M,Bruix J.Hepatocellular carcinoma[J].Lancet,2018,391:1301
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1314)。由于肝癌早期症状不明显，具有进展迅速、侵袭性强，易早期转移等特点，使得临床上早诊困难，尽管针对肝癌可手术切除，但其预后仍然较差，因此有效的评估预后风险对于指导临床决策显得尤为重要。
[0003]目前临床上主要通过肝癌患者的分期来评估肝癌患者预后，不同地区的医疗组织各自从肝癌的临床病理特征中总结出不同的临床分期系统，包括巴塞罗那临床肝癌(BCLC)分期、美国癌症联合委员会(AJCC)提出的新TMN分期、意大利肝癌计划(CLIP)评分、日本综合分期(JIS)和Child
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Pugh等。Sirivatanauksorn等人比较了以上分期系统，发现TNM分期和Child
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Pugh对肝癌外科切除手术的总生存率有较好的预期能力(参考文献4：Sirivatanauksorn Y,Tovikkai C.Comparison of Staging Systems of Hepatocellular Carcinoma[J].HPB Surgery,2011,2011:1
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7)。但对肝癌预后风险分层的最佳工具尚未达成共识，由此给临床治疗带来了巨大困扰。
[0004]为了给予患者更好的治疗和及时的预后评估，需要对肿瘤分子层面的分类做出更多的尝试。分子分类对于肝癌患者预后的评估和治疗策略的决定方面具有明确的价值。随着人们对癌症分子分型认识的不断深入，近年来有研究者基于基因组和转录组进行了肝癌的分子分型研究，解释了肝癌可能的致病机制(参考文献5：Yang C,Huang X W,Liu Z C,et al.Metabolism
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associated molecular classification of hepatocellular carcinoma[J].Molecular Oncology,2020,14:896
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913；参考文献6：Hoshida Y,Nijman SM,Kobayashi M,Chan JA,Brunet JP,Chiang DY,Villanueva A,Newell P,Ikeda K,Hashimoto M,Watanabe G,Gabriel S,Friedman SL,Kumada H,Llovet JM,Golub TR.Integrative transcriptome analysis reveals common molecular subclasses of human hepatocellular carcinoma.Cancer Res.2009,69(18):7385
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7392)。但是，基于代
谢组是否存在稳定的预后相关代谢亚型还未知。
[0005]代谢重编程是恶性癌症的特征之一，癌症进展依赖于代谢重编程。代谢组学通过对生物体内代谢物进行定性定量，寻找代谢物与各种病理生理条件变化的相对关系。色谱质谱联用技术是代谢组学的主要研究手段，其检测小分子代谢物在疾病预后评估相关的应用中已有成功的案例，包括用气相色谱
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质谱联用技术检测血清中苯丙氨酸和半乳糖用于肝癌术后死亡风险评估，检测酪氨酸和半乳糖用于肝癌术后复发与转移风险评估(参考文献7：Fang C N,Su B Z,Jiang T Y,et al.Prognosis prediction of hepatocellular carcinoma after surgical resection based on serum metabolic profiling from gas chromatography
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mass spectrometry[J].Analytical and Bioanalytical Chemistry,2021,413(12):1
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13)，用液相色谱
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质谱联用技术检测血清中苯丙氨酸和胆碱用于肝癌预后判断(参考文献8：Wang Q Q,Su B Z,Dong L W,et al.Liquid Chromatography
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Mass Spectrometry
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Based Nontargeted Metabolomics Predicts Prognosis of Hepatocellular Carcinoma after Curative Resection[J].Journal of Proteome Research,2020,19:3533
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3541)等。
[0006]本专利技术采用气相色谱
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质谱技术获取肝癌患者的肝癌组织和近端癌旁组织样品代谢谱，基于非负矩阵分解进行聚类分析，揭示存在预后不良代谢亚型，确定肝癌组织中高水平的十四烷酸、十六烷酸、顺式
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十六碳烯酸、反式
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十六碳烯酸、顺式
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十八碳烯酸和反式
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十八碳烯酸六种脂肪酸是与预后不良相关的关键特征，目前尚无将上述代谢物作为联合型标志物用于评估肝癌预后风险的报道。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种联合型代谢标志物在制备用于肝癌手术预后风险评估试剂盒中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.联合型标志物，所述联合型标志物包括下述中的三种或四种或五种或六种物质，或由十四烷酸、十六烷酸、顺式
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十六碳烯酸、反式
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十六碳烯酸、顺式
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十八碳烯酸和反式
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十八碳烯酸中的三种或四种或五种或六种物质组成。2.联合型标志物在制备用于评估肝癌患者手术预后风险的试剂盒中的应用，所述联合型标志物包括下述中的三种或四种或五种或六种物质，或由十四烷酸、十六烷酸、顺式
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十六碳烯酸、反式
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十六碳烯酸、顺式
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十八碳烯酸和反式
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十八碳烯酸中的三种或四种或五种或六种物质组成。3.根据权利要求2所述的应用，所述预后风险是指肝癌手术后死亡的风险。4.根据权利要求2所述的应用，所述的试剂盒为采用气相色谱
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质谱联用仪检测受试者肝癌组织和近端癌旁组织样品中十四烷酸、十六烷酸、顺式
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十六碳烯酸、反式
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十六碳烯酸、顺式
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十八碳烯酸和反式
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十八碳烯酸含量的试剂中的三种或四种或五种或六种物质的组合。5.根据权利要求2或4所述的应用，所述的采用气相色谱
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质谱联用仪检测受试者肝癌组织和近端癌旁组织样品中十四烷酸、十六烷酸、顺式
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十六碳烯酸、反式
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十六碳烯酸、顺式
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十八碳烯酸和反式
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十八碳烯酸中的三种或四种或五种或六种物质含量的试剂盒包括：(1)标准化学品：包括下述中的至少三种或四种或五种或六种物质，十四烷酸、十六烷酸、顺式
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十六碳烯酸、反式
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十六碳烯酸、顺式
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十八碳烯酸和反式
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十八碳烯酸，所述标准品分别用于对应的组织样品代谢物十四烷酸、十六烷酸、顺式
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十六碳烯酸、反式
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十六碳烯酸、顺式
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十八碳烯酸和反式
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十八碳烯酸的定性；(2)含内标化合物的提取液：所述提取液用于预处理来自受试者的组织样品，即含内标化合物缬氨酸
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d8、十三酸、柠檬酸
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d3和十四烷酸
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d
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的浓度均分别为4
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7ug/mL的60
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80％(v/v)甲醇/水溶液；(3)衍生化试剂：所述衍生试剂用于预处理提取后的组织冻干样品，即溶于吡啶的浓度为18
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22mg/mL的甲氧胺溶液和N
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甲基
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N
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(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺。6.一种用于肝癌手术预后风险评估的试剂盒，包括下述中的至少三种或四种或五种或六种物质物质，或含有下述中的至少三种或四种或五种或六种物质，十四烷酸、十六烷酸、顺式
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十六碳烯酸、反式
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十六碳烯酸、顺式
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十八碳烯酸和反式
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十八碳烯酸。7.根据权利要求6所述的试剂盒，所述的试剂盒包括：(1)标准化学品：包括下述中的至少三种或四种或五种或六种物质，十四烷酸、十六烷酸、顺式
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十六碳烯酸、反式
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十六碳烯酸、顺式
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十八碳烯酸和反式
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十八碳烯酸，所述标准品分别用于对应的组织样品代谢物十四烷酸、十六烷酸、顺式
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十六碳烯酸、反式
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十六碳烯酸、顺式
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十...

【专利技术属性】
技术研发人员：许国旺，方成男，刘心昱，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：