【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于HSV
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1基因编辑的指导RNA及其方法
[0001]本文公开的实施方案涉及基因编辑领域,特别是涉及用于1型单纯疱疹病毒(HSV
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1)的Cas9介导的基因编辑的人工指导RNA(gRNA)。还公开了通过使用所述gRNA进行的Cas9介导的基因编辑方法。
技术介绍
[0002]1型单纯疱疹病毒(HSV
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1;按分类学名称也被称为人类单纯疱疹病毒1型)是疱疹病毒科单纯疱疹病毒属中的双链DNA病毒。HSV
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1含有152,000个核苷酸。在过去的几十年中,HSV
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1已经被修饰以产生用于治疗癌症的各种溶瘤病毒。其中,重组HSV
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1病毒株OrienX010(ICP34.5
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/
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,ICP47
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,ICP6
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)是正在进行的临床试验中的溶瘤病毒,其包括在原始ICP34.5基因处插入两个拷贝的人GM
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CSF基因和未公开的在ICP6基因内的失活修饰。
[0003]CRISPR/Cas9介导的同源重组被用于改进HSV
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1的基因编辑,特别是用于基因插入(Dong Wang et al.(2018),Cancer Gene Ther.,25(5
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6):93
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105)。然而,由于各种HSV
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1突变体之间的差异,现有的基因编辑方法不能应用于所有种类的 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种指导RNA(gRNA),其包含能够将Cas9蛋白靶向1型单纯疱疹病毒(HSV
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1)的ICP6基因中的靶序列以提供切割事件的指导序列,其中与野生型HSV
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1相比,所述靶序列包含GATC插入。2.根据权利要求1所述的gRNA,其中所述ICP6基因表达通过插入GATC序列引起的失活的ICP6蛋白。3.根据权利要求1所述的gRNA,其中所述ICP6基因是失活的ICP6基因。4.根据权利要求1所述的gRNA,其中所述ICP6基因包含对应于SEQ ID NO.17的核苷酸25
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64的序列。5.根据权利要求1所述的gRNA,其中所述ICP6基因包含SEQ IDNO.17。6.根据权利要求5所述的gRNA,其中所述靶序列是选自对应于SEQ ID NO.17的核苷酸25
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64的序列范围的20个核苷酸的序列。7.根据权利要求5所述的gRNA,其中所述靶序列包含选自SEQID NO.17的20个核苷酸的序列。8.根据权利要求5所述的gRNA,其中所述靶序列包含选自SEQID No.18、19、20、21、22和23的序列。9.根据权利要求5所述的gRNA,其中所述靶序列选自SEQ IDNo.18、19、20、21、22和23。10.根据权利要求5所述的gRNA,其中所述靶序列是SEQ IDNo.21。11.根据权利要求1所述的gRNA,其中所述指导序列包含选自SEQ ID NO.24、25、26、27、28和29的序列。12.根据权利要求1所述的gRNA,其中所述指导序列是选自SEQID NO.24、25、26、27、28和29的序列。13.根据权利要求1所述的gRNA,其中所述指导序列是SEQ IDNo.27。14.一种第一多核苷酸,其编码根据权利要求1
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13中任一项所述的gRNA。15.一种载体,其包含与合适的启动子可操作地连接的根据权利要求14所述的第一多核苷酸。16.根据权利要求15所述的载体,其进一步包含编码Cas9蛋白的第二多核苷酸。17.一种载体系统,其包含根据权利要求15所述的一种载体和包含编码Cas9蛋白的第二多核苷酸的第二载体。18.一种用根据权利要求16所述的载体或根据权利要求17所述的载体系统转化的转化体细胞,其能够表达gRNA和Cas9蛋白。19.根据权利要求18所述的转化体细胞,其是Vero细胞。20.一种Cas9/gRNA复合物,其包含根据权利要求1
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13中任一项所述的gRNA、和Cas9蛋白。21.一种用于HSV
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1的基因编辑系统,其包括:(a)包含在ICP6基因中的靶序列的HSV
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1病毒株,其中所述靶序列与野生型HSV
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1相比包含GATC插入;...
【专利技术属性】
技术研发人员:李晓明,舒骁,贾茹,王宁,
申请(专利权)人:北京奥源和力生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:
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