一种同时检测血液中6种药物浓度的方法技术

本公开涉及一种同时检测血液中6种药物浓度的方法，所述方法包括：（1）配制至少三种不同浓度的含有6种药物及其内标物的标准溶液，并利用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测血液中6种药物浓度的方法


[0001]本公开涉及药物检测
，尤其涉及一种同时检测血液中6种药物浓度的方法。

技术介绍

[0002]帕金森病又称震颤麻痹，是一种中枢神经系统椎体外系功能障碍的慢性进行性疾病。卡比多巴是一种外周脱羧酶抑制剂，不易进入神经中枢，与左旋多巴合用治疗帕金森病可以抑制外周左旋多巴转化为多巴胺，使进入神经中枢的左旋多巴逐渐增加，进而减少左旋多巴对周围心血管的不良反应，另外，左旋多巴代谢物3
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甲氧基多巴也有较强活性。
[0003]多巴胺是一种脑内分泌物，是大脑中含量最丰富的儿茶酚胺类神经递质，能够调控中枢神经系统的多种生理功能，多巴胺系统调节障碍可能会导致帕金森病、精神分裂症、注意力缺陷多动综合征或垂体肿瘤的发生等。
[0004]卡巴拉汀属第二代中枢AChE抑制药，对大脑皮层和海马的AchE有选择性抑制作用，而对纹状体和心脏的AChE几乎无影响，且可减慢淀粉样蛋白前体（APP）的形成。口服迅速吸收，约1h达到Cmax，血浆蛋白结合率约40%，已透过血脑屏障，临床用于轻、中度AD，改善认知功能障碍，提高记忆力、注意力和方位感。
[0005]美金刚主要作用于脑内谷氨酸神经递质系统，通过与NMDA受体作用降低背景噪声，使谷酰胺信号恢复至正常生理状态。
[0006]监测以上药物的血药浓度，对开展与原研药的生物等效性研究具有重要意义。目前已知的对血液中卡比多巴、多巴胺、美金刚、卡巴拉汀、左旋多巴及其代谢物含量通常均是采用高效液相色谱质谱联用的方法对上述药物分别进行检测，并没有关于如何实现卡比多巴、多巴胺、美金刚、卡巴拉汀、左旋多巴及其代谢物（3
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甲氧基多巴）同时检测的方法的存在。且目前提供的检测方法中，一般存在样品量需求较大、样品前处理条件复杂、样本稳定性差、同类药物检测方法差异大、检测难度大检测效率低等问题，尚不适于大通量的样本检测。

技术实现思路

[0007]为了解决上述技术问题，本公开提供了一种同时检测血液中6种药物浓度的方法。本公开提供的检测方法在满足检测要求的前提下，能够减少样品用量，延长样本稳定性，降低检测难度，提高检测效率。
[0008]第一方面，本公开提供了一种同时检测血液中6种药物浓度的方法，所述方法包括：（1）配制至少三种不同浓度的含有6种药物及其内标物的标准溶液，并利用液相色谱
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质谱对所述标准溶液进行检测，根据检测结果分别建立所述6种药物的标准曲线；（2）将待测样品与稳定剂混合保存备用，待测试之前，混合液与内标物混合、离心，取上清液作为进样样品；
（3）利用液相色谱
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质谱对所述进样样品进行检测，根据检测结果和所述标准曲线确定所述待测样品中6种药物的含量；其中，所述6种药物为卡比多巴、多巴胺、美金刚、卡巴拉汀、左旋多巴和3
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甲氧基多巴。
[0009]本公开提供的检测方法能够一针测得6种药物的含量，检测时间短，在5.5 min以内出结果，提高检测效率的同时降低操作难度，适用于高通量样本的检测。
[0010]本公开待测样品中添加同位素内标物经稳定剂沉淀蛋白后取上清液直接进样，检测过程简便快速，分析时间短；另外通过对待测样品中添加稳定剂能够延长其稳定时间更利于大通量的样本检测。
[0011]作为本公开的一种优选技术方案，所述稳定剂为含有5
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10%酸类化合物（例如6%、7%、8%、9%等）和5
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15%焦亚硫酸钠的水溶液（例如6%、8%、10%、12%、14%等），所述酸类化合物选自高氯酸、磺基水杨酸或三氯乙酸。
[0012]卡比多巴、多巴胺、卡巴拉汀、左旋多巴等在血清/血浆中均不稳定，利用本公开提供的稳定剂处理后的样品更加稳定，常温可保存24 h，4℃可保存48 h，降低样品运输要求和运输成本，提取回收率高，基质效应小，而且操作简单易行。
[0013]作为本公开的一种优选技术方案，所述待测样品和稳定剂的体积比为1:(1
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3)，例如1:1.5、1:2、1:2.5等。
[0014]作为本公开的一种优选技术方案，所述液相色谱的条件包括：流动相：A相为含有0.2
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3%甲酸、1
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10 mmol/L甲酸铵或乙酸铵的水溶液，B相为乙腈；梯度洗脱：0.00 min：A相98
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80%，B相2
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20%；0.50 min：A相98
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80%，B相2
‑
20%；0.60 min：A相60
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40%，B相40
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60%；1.00 min：A相60
‑
40%，B相40
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60%；1.10 min：A相5
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15%，B相95
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85%；2.50 min：A相5
‑
15%，B相95
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85%；3.00 min：A相98
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80%，B相2
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20%；5.50 min：A相98
‑
80%，B相2
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20%。
[0015]所述0.2
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3%甲酸可以为0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%等；所述1
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10mmol/L可以为2 mmol/L、4 mmol/L、6 mmol/L、8 mmol/L等。
[0016]在梯度洗脱条件中，对于0.00
‑
0.50 min，A相可以为96%、94%、90%、85%等，B相可以为3%、5%、10%、15%等。对于0.60
‑
1.00 min，A相可以为58%、55%、52%、50%、48%、45%、42%等，B相可以为42%、45%、48%、50%、52%、55%、58%等。对于1.10
‑
2.50 min，A相可以为6%、8%、10%、12%、13%、14%等，B相可以为94%、92%、90%、88%、87%、86%等。对于3.00
‑
5.50 min，A相可以为96%、94%、90%、85%等，B相可以为3%、5%、10%、15%等。
[0017]作为本公开的一种优选技术方案，柱温为35
‑
40℃，例如36℃、37℃、38℃、39℃等。
[0018]作为本公开的一种优选技术方案，所述流动相的流速为0.3
‑
0.5mL/min，例如0.35 mL/min、0.4 mL/min、0.45 mL/min等。
[0019]作为本公开的一种优选技术方案，所述液相色谱的条件包括：使用的分析色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC
‑
C18、phenomenex Kinetex F5。
[0020]本公开通过对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测血液中6种药物浓度的方法，其特征在于，所述方法包括：（1）配制至少三种不同浓度的含有6种药物及其内标物的标准溶液，并利用液相色谱
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质谱对所述标准溶液进行检测，根据检测结果分别建立所述6种药物的标准曲线；（2）将待测样品与稳定剂混合保存备用，待测试之前，混合液与内标物混合、离心，取上清液作为进样样品；（3）利用液相色谱
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质谱对所述进样样品进行检测，根据检测结果和所述标准曲线确定所述待测样品中6种药物的含量；其中，所述6种药物为卡比多巴、多巴胺、美金刚、卡巴拉汀、左旋多巴和3
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甲氧基多巴。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述稳定剂为含有5
‑
10%酸类化合物和5
‑
15%焦亚硫酸钠的水溶液，所述酸类化合物选自高氯酸、磺基水杨酸或三氯乙酸；和/或，所述待测样品和稳定剂的体积比为1:(1
‑
3)。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱的条件包括：流动相：A相为含有0.2
‑
3%甲酸、1
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10 mmol/L甲酸铵或乙酸铵的水溶液，B相为乙腈；梯度洗脱：0.00 min：A相98
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80%，B相2
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20%；0.50 min：A相98
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80%，B相2
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20%；0.60 min：A相60
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40%，B相40
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60%；1.00 min：A相60
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40%，B相40
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60%；1.10 min：A相5
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15%，B相95
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85%；2.50 min：A相5
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15%，B相95
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85%；3.00 min：A相98
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80%，B相2
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20%；5.50 min：A相98
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80%，B相2
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20%；和/或，柱温为35
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40℃；和/或，所述流动相的流速为0.3
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0.5 mL/min。4.根据权利要求3所述的方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾永娟，张杰，刘春冉，倪君君，
申请(专利权)人：北京和合医学诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：