一种对寒邪客胃型胃溃疡模型大鼠的构建方法及苗药良姜胃疡胶囊的使用方法技术

本发明专利技术公开了胃溃疡研究领域的一种对寒邪客胃型胃溃疡模型大鼠的构建方法及苗药良姜胃疡胶囊的使用方法，包括以下步骤：S1：采用冰乙酸浆膜下注射法制备大鼠胃溃疡模型；S2：ELISA法检测，通过ELISA法检测测定大鼠血清表皮生长因子、前列环素和白细胞介素

【技术实现步骤摘要】
一种对寒邪客胃型胃溃疡模型大鼠的构建方法及苗药良姜胃疡胶囊的使用方法


[0001]本专利技术属于胃溃疡研究领域，具体是一种对寒邪客胃型胃溃疡模型大鼠的构建方法及苗药良姜胃疡胶囊的使用方法。

技术介绍

[0002]胃溃疡是影响胃肠系统常见疾病之一，其典型表现为饥饿不适、饱胀嗳气、泛酸或餐后慢性中上腹疼痛，严重时可有黑便与呕血。由于胃溃疡病情复杂，病程缠绵，若病情加重或治疗不及时，会导致出血、穿孔、幽门梗阻和癌变等并发症，严重危害人类健康。现代医学治疗主要是应用H2受体拮抗剂及质子泵抑制剂，通过抑制胃酸分泌，减轻对胃黏膜的刺激，促进溃疡面快速修复，近期疗效好，但溃疡愈合质量不佳。许多表面愈合的溃疡面经组织学检查常发现黏膜下血管、腺体的结构、黏膜厚度和结缔组织等尚未完全恢复正常状态。不少患者溃疡面愈合，临床上仍存在上腹疼痛和饱胀等不适感，且未完全恢复的状态将直接影响细胞的氧合作用、营养供应和黏膜的防御功能，成为复发的基础，复发率可高达50％～90％。
[0003]苗药良姜胃疡胶囊属中药苗药复方制剂，具有温胃散寒和理气止痛的功效，临床上用于治疗寒凝气滞所致胃脘疼痛和胃十二指肠溃疡见反酸嘈杂症状者，并具有良好的治疗效果。现代药理学研究发现，苗药良姜胃疡胶囊可升高胃液pH，抑制胃蛋白活力，从而减少炎症因子的释放，抑制NF
‑
κB通路相关蛋白表达，从而发挥其对胃溃疡的预防作用。
[0004]胃黏膜损害和过度的炎症反应被认为是导致胃溃疡的直接原因，而抑制JAK2/STAT3信号通路的激活，STAT3磷酸活化水平下降，是引起过度炎症反应的重要因素。苗药良姜胃疡胶囊具有温胃散寒和理气止痛等功效，临床上用于胃溃疡及十二指肠溃疡的治疗，并具有良好的治疗效果，但其作用机制尚不清楚，导致用药尚不明确。
[0005]为了解决上述问题，本专利技术通过构建胃溃疡大鼠模型，对胃溃疡组织损伤程度、外周血及溃疡病灶组织、STAT3 mRNA表达水平、胃组织JAK2和STAT3蛋白表达及磷酸化水平进行分析，提出一种对寒邪客胃型胃溃疡模型大鼠的构建方法及苗药良姜胃疡胶囊的使用方法。

技术实现思路

[0006]为了解决上述问题，本专利技术的目的是通过构建胃溃疡大鼠模型，对胃溃疡组织损伤程度、外周血及溃疡病灶组织、STAT3 mRNA表达水平、胃组织JAK2和STAT3蛋白表达及磷酸化水平进行分析，提出一种对寒邪客胃型胃溃疡模型大鼠的构建方法及苗药良姜胃疡胶囊的使用方法，为其临床合理用药提供依据。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：一种对寒邪客胃型胃溃疡模型大鼠的构建方法及苗药良姜胃疡胶囊的使用方法，包括以下步骤：
[0008]S1：采用冰乙酸浆膜下注射法制备大鼠胃溃疡模型；
[0009]S1
‑
1：选取若干只大鼠，将大鼠分为正常组、模型组、西咪替丁阳性对照组、良姜胃疡胶囊高剂量组、良姜胃疡胶囊中剂量组和良姜胃疡胶囊低剂量组，每组10只，其中，大鼠选用SPF级Wistar大鼠；S1
‑
2：每组分别给药21天，观察各组大鼠的精神状态、活动状况、毛发光泽和粪便性状；S1
‑
3：处死各组大鼠，分别取其外周血和胃粘膜组织；
[0010]S2：ELISA法检测，通过ELISA法检测测定大鼠血清表皮生长因子、前列环素和白细胞介素
‑
6水平；
[0011]S3：Real
‑
timePCR检测，通过Real
‑
timePCR检测测定大鼠溃疡病灶组织JAK2和STAT3mRNA的表达水平；
[0012]S4：蛋白免疫印迹法检测，通过蛋白免疫印迹法检测测定大鼠胃组织JAK2和STAT3的蛋白表达及磷酸化水平；
[0013]S5：观察大鼠新鲜胃粘膜样本，计算胃粘膜溃疡指数；
[0014]S6：HE染色观察大鼠胃粘膜病理组织变化；
[0015]S7：统计学分析。
[0016]进一步，S1中，建立模型前，对大鼠禁食不禁水24h；建立模型时，使用20％乌拉坦溶液4ml
·
kg
－1
对大鼠进行腹腔麻醉；然后将大鼠仰卧位固定后开腹，在大鼠胃窦前壁胃壁肌层与浆膜层之间注入100％冰乙酸0.03ml；然后覆盖网膜，缝合腹膜、腹壁各层组织和皮肤。
[0017]进一步，S2中，ELISA法检测测定大鼠血清表皮生长因子、前列环素和白细胞介素
‑
6水平包括如下步骤：
[0018]S2
‑
1：提前准备大鼠血清表皮生长因子、前列环素和白细胞介素
‑
6的标准样品和待测样品，采用96孔酶标板，先向每孔加入50μl不同浓度的标准样品溶液，再将待测样品稀释5倍后加入酶标板内，摇晃混匀后向每孔加入100μl酶试剂；
[0019]S2
‑
2：将酶标板进行封板膜，封板膜后，将酶标板置于37℃恒温烘箱内孵育1h；
[0020]S2
‑
3：使用去离子水稀释20
×
的浓缩液为1
×
备用；
[0021]S2
‑
4：孵育1h后，揭去封板膜，倒出液体，加入洗涤液对酶标板进行清洗，重复3
‑
5次后甩干，再向每孔加入50μl：50μl的浓缩液，轻摇混匀后，将酶标板避光置于37℃恒温烘箱内孵育15min进行显色反应；
[0022]S2
‑
5：显色反应后，每孔再加入50μl终止液，用于终止显色反应；
[0023]S2
‑
6：使用单功能酶标仪450nm处测定各孔吸光度值。
[0024]进一步，S3中，通过Real
‑
timePCR检测测定大鼠溃疡病灶组织JAK2和STAT3 mRNA的表达水平包括如下步骤：
[0025]S3
‑
1：取大鼠GU病灶组织0.1g，向GU病灶组织加入trizol600μL提取总RNA；
[0026]S3
‑
2：采用超微光分光光度计测定其浓度和吸光度，其中，质量浓度调至1500μg
·
L
‑1，
[0027]浓度和吸光度均1.8
‑
2.0；
[0028]S3
‑
3：采用反转录试剂盒配置20μL体系将RNA反转录为cDNA，其中，相同基因每组设4重复，6次平行实验，得到各扩增反应的Ct值，选取GAPDH作为内参基因，将目的基因和GAPDH的Ct值采用2
‑
ΔΔCt法计算目的基因的mRNA相对表达量。
[0029]进一步，S4中，通过蛋白免疫印迹法检测测定大鼠胃组织JAK2和STAT3的蛋白表达
及磷酸化水平包括如下步骤：
[0030]S4
‑
1：取大鼠GU病灶组织0.1g，向GU病灶组织加入组织裂解液600μL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种对寒邪客胃型胃溃疡模型大鼠的构建方法，其特征在于：包括以下步骤：S1：采用冰乙酸浆膜下注射法制备大鼠胃溃疡模型；S1
‑
1：选取若干只大鼠，将大鼠分为正常组、模型组、西咪替丁阳性对照组、良姜胃疡胶囊高剂量组、良姜胃疡胶囊中剂量组和良姜胃疡胶囊低剂量组，每组10只，其中，大鼠选用SPF级Wistar大鼠；S1
‑
2：每组分别给药21天，观察各组大鼠的精神状态、活动状况、毛发光泽和粪便性状；S1
‑
3：处死各组大鼠，分别取其外周血和胃粘膜组织；S2：ELISA法检测，通过ELISA法检测测定大鼠血清表皮生长因子、前列环素和白细胞介素
‑
6水平；S3：Real
‑
timePCR检测，通过Real
‑
timePCR检测测定大鼠溃疡病灶组织JAK2和STAT3mRNA的表达水平；S4：蛋白免疫印迹法检测，通过蛋白免疫印迹法检测测定大鼠胃组织JAK2和STAT3的蛋白表达及磷酸化水平；S5：观察大鼠新鲜胃粘膜样本，计算胃粘膜溃疡指数；S6：HE染色观察大鼠胃粘膜病理组织变化；S7：统计学分析。2.根据权利要求1所述的对寒邪客胃型胃溃疡模型大鼠的构建方法，其特征在于：S1中，建立模型前，对大鼠禁食不禁水24h；建立模型时，使用20％乌拉坦溶液4ml
·
kg
－1
对大鼠进行腹腔麻醉；然后将大鼠仰卧位固定后开腹，在大鼠胃窦前壁胃壁肌层与浆膜层之间注入100％冰乙酸0.03ml；然后覆盖网膜，缝合腹膜、腹壁各层组织和皮肤。3.根据权利要求2所述的对寒邪客胃型胃溃疡模型大鼠的构建方法，其特征在于：S2中，ELISA法检测测定大鼠血清表皮生长因子、前列环素和白细胞介素
‑
6水平包括如下步骤：S2
‑
1：提前准备大鼠血清表皮生长因子、前列环素和白细胞介素
‑
6的标准样品和待测样品，采用96孔酶标板，先向每孔加入50μl不同浓度的标准样品溶液，再将待测样品稀释5倍后加入酶标板内，摇晃混匀后向每孔加入100μl酶试剂；S2
‑
2：将酶标板进行封板膜，封板膜后，将酶标板置于37℃恒温烘箱内孵育1h；S2
‑
3：使用去离子水稀释20
×
的浓缩液为1
×
备用；S2
‑
4：孵育1h后，揭去封板膜，倒出液体，加入洗涤液对酶标板进行清洗，重复3
‑
5次后甩干，再向每孔加入50μl：50μl的浓缩液，轻摇混匀后，将酶标板避光置于37℃恒温烘箱内孵育15min进行显色反应；S2
‑
5：显色反应后，每孔再加入50μl终止液，用于终止显色反应；S2
‑
6：使用单功能酶标仪450nm处测定各孔吸光度值。4.根据权利要求3所述的对寒邪客胃型胃溃疡模型大鼠的构建方法，其特征在于：S3中，通过Real
‑
timePCR检测测定大鼠溃疡病灶组织JAK2和STAT3 mRNA的表达水平包括如下步骤：S3
‑
1：取大鼠GU病灶组织0.1g，向GU病灶组织加入trizol600μL提取总RNA；S3
‑
2：采用超微光分光光度计测定其浓度和吸光度，其中，质量浓度调至1500μg
·
L
‑1，...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖欢智，刘誉华，王飞，蒲翔，颜勤，张瑜，王敏，
申请(专利权)人：贵州中医药大学，
类型：发明
国别省市：