一种用于肺癌诊断及治疗的小circRNA标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于肺癌诊断及治疗的circRNA标志物及其应用，属于生物技术领域。发明专利技术人研究发现，环状RNA hsa_circ_0029426在肺癌患者与健康人血浆中的表达有显著不同，hsa_circ_0029426在肺癌患者的血浆中表达显著降低，由此说明，hsa_circ_0029426可作为肺癌诊断标志物，其在肺癌血清中显著降低，且能很好的预测肺癌的发生。此外，hsa_circ_0029426过表达后，可显著抑制肺癌细胞的增殖能力以及侵袭能力，由此说明，hsa_circ_0029426环状RNA可以作为肺癌治疗的潜在靶点，用于检测hsa_circ_0029426的试剂可以用于诊断或治疗癌症的产品中。的产品中。的产品中。

【技术实现步骤摘要】
一种用于肺癌诊断及治疗的小circRNA标志物及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于肺癌诊断及治疗的 小circRNA标志物及其应用。

技术介绍

[0002]肺癌是对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率增长最快。男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率和死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明确，大量资料表明，吸烟与肺癌的发生有非常密切的关系。非小细胞肺癌约占肺癌病例的85%，包括肺腺癌、肺鳞状细胞癌和大叶细胞癌组织亚型。尽管近年来肺癌的治疗取得了进展，但患者的总体治愈率和生存率仍然很低。
[0003]目前，对于肺癌的预测和诊断技术仍然存在很大的缺陷，鉴于此，特提出本申请。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种用于肺癌的诊断和治疗的circRNA标志物，即hsa_circ_0029426环状RNA基因，并提供该靶标的新应用，特别是在其检测试剂、肺癌诊断和治疗中的应用。
[0005]本专利技术的技术构思是：CircRNA是一类特殊的非编码RNA分子，与传统的线性RNA（含5
’
和3
’
末端）不同， circRNA分子是呈封闭环状结构，比线性RNA更稳定性，不受RNA外切酶影响，不易降解，这使得它们成为临床应用新型生物标记具有很大的优势。随着高通量测序和生物信息学的发展，circRNA已被确定在真核生物中特异性表达。近年的研究发现，异常表达的circRNA在肿瘤的发生和发展中起着至关重要的作用。
[0006]RAN（RAS 相关核蛋白，Ras
‑
related nuclear protein）是一种小GTP结合蛋白，属于RAS超家族，它控制大分子在核膜上的核质交换。RAN在核形成早期与染色质结合，并在真核细胞周期中发挥重要作用，调节有丝分裂纺锤体组装、核膜形成和细胞周期检查点控制。与其他 GTP 酶一样，RAN依赖于 GTP 结合和 GDP 结合构象之间的循环来与效应蛋白相互作用并调节这些过程。在核质运输中，RAN通过核孔穿梭穿过核膜。它通过主动输入机制集中在细胞核中，通过核苷酸交换产生高浓度的 RAN
‑
GTP。它控制一系列在 RAN结合蛋白和细胞货物之间形成的复合物的组装和拆卸，以维持快速的核转运。另外，RAN 是一种雄激素受体 (AR) 共激活剂，它与雄激素受体内不同长度的聚谷氨酰胺有差异地结合。研究发现：RAN在多个肿瘤中发挥促癌基因作用，如Susan E Morgan
‑
Lappe （Cancer Res. 2007）等发现Ran的siRNA 处理不同地降低了活化的 K
‑
Ras 转化细胞的存活率，在激活的突变 K
‑
Ras 细胞中敲除 Ran选择性地诱导G(2)
‑
M 阻滞表型。
[0007]专利技术人在对RAN来源的circRNA进行研究时发现了一条环状RNA hsa_circ_0029426，该环状RNA Circ_0029426特异性的在肺癌细胞系和肺癌患者血清中显著低表达，且当对hsa_circ_0029426进行过表达后，肺癌细胞系的恶性表型被显著抑制，这一结果提
示hsa_circ_0029426可能与RAN翻译产生的蛋白在肺癌中的作用相反，因此我们认为：Circ_0029426可作为肺癌诊断标志物，其在肺癌血清中显著降低，且能很好的预测肺癌的发生，并且可以作为肺癌治疗的潜在靶点。由于其只有85个碱基，分子量小，有望研制成新一代的治疗肺癌的核酸药物。
[0008]本专利技术通过以下技术方案实现：第一方面，本专利技术提供一种用于肺癌诊断及治疗的CIRCRNA标志物，circRNA标志物为核苷酸序列如SEQ ID NO. 1所示的hsa_circ_0029426。
[0009]circ_0029426位于基因RAN（ran, member ras oncogene family，ras
‑
related nuclear protein）内部，hsa_circ_0029426由1个外显子组成，呈环状序列，全长仅为85个碱基，全长序列为：CTTGTATTGGTTGGTGATGGTGGTACTGGAAAAACGACCTTCGTGAAACGTCATTTGACTGGTGAATTTGAGAAGAAGTATGTAG（SEQ ID NO.1）。
[0010]第二方面，本专利技术提供一种上述circRNA标志物的引物组，引物组包括正向引物和反向引物；正向引物（PRIMER F）的核苷酸序列为TATGTAGCTTGTATTG （SEQ ID NO.2所示）。
[0011]反向引物（PRIMER R）的核苷酸序列为CTTCTTCTCAAATTC （SEQ ID NO.3所示）。
[0012]在具体的应用中，还包括内参GAPDH的正向引物和反向引物：内参GAPDH PRIMER F:GGAGCGAGATCCCTCCAAAAT（SEQ ID NO.4）；内参GAPDH PRIMER R：GGCTGTTGTCATACTTCTCATGG（SEQ ID NO.5）。
[0013]第三方面，本专利技术提供一种上述CIRCRNA标志物在制备肺癌诊断或治疗的产品中的应用。
[0014]第四方面，本专利技术提供一种用于检测上述circRNA标志物的试剂在制备用于诊断或治疗癌症的产品中的应用。
[0015]进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，上述试剂选自：对circRNA标志物具有检测特异性的探针、基因芯片或检测引物组；优选地，检测引物组包括正向引物和反向引物，正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
[0016]进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，上述试剂还包括RNA提取试剂、逆转录反应体系和荧光定量PCR试剂。
[0017]进一步地，在本专利技术较佳的实施例中，上述产品包括芯片、试剂盒或者核酸膜条。
[0018]第五方面，本专利技术提供一种用于肺癌诊断或治疗的试剂盒，试剂盒包括针对上述circRNA标志物的特异性引物组。
[0019]优选地，引物组包括正向引物和反向引物，正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；优选地，还包括荧光定量PCR试剂、RNA提取试剂、逆转录反应体系。
[0020]第六方面，本专利技术提供一种上述circRNA标志物的表达促进剂在制备治疗肺癌的药物中的应用；优选地，表达促进剂至少包括以下任一：hsa_circ_0029426环状RNA基因；含有hsa_circ_0029426环状RNA基因的重组载体；含有hsa_circ_0029426环状RNA基因的重组病
毒。
[0021]第七方面，本专利技术提供一种治疗肺癌的药物，其活性成分为上述circRNA标志物的表达促进剂。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于肺癌诊断及治疗的circRNA标志物，其特征在于，所述circRNA标志物为核苷酸序列如SEQ ID No. 1所示的hsa_circ_0029426。2.一种如权利要求1所述的circRNA标志物的引物组，其特征在于，所述引物组包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。3.一种如权利要求1所述的circRNA标志物在制备肺癌诊断或治疗的产品中的应用。4.一种用于检测如权利要求1所述的circRNA标志物的试剂在制备用于诊断或治疗癌症的产品中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂选自：对所述circRNA标志物具有检测特异性的探针、基因芯片或检测引物组；优选地，所述检测引物组包括正向引物和反向引物，所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂还...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书六页序列表电子公布附图三页，
申请(专利权)人：上海卡序生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：