一种微囊藻的固定化保存方法及恢复培养方法技术

本申请涉及一种微囊藻的固定化保存方法及恢复培养方法，一种微囊藻的固定化保存方法，包括如下步骤：固定化凝胶的制备；微囊藻浓缩液的制备；胶

【技术实现步骤摘要】
一种微囊藻的固定化保存方法及恢复培养方法


[0001]本申请涉及微藻生物
，更具体地说，它涉及一种微囊藻的固定化保存方法及恢复培养方法。

技术介绍

[0002]在微藻的培养和应用中，保种技术是微藻培养和进一步应用的基础和关键环节。由于藻种极易受污染，分离培养方法比较复杂而且耗时较长，因此在微藻保种工作中要尽量减少接种次数，避免藻种被杂藻、细菌或原生动物污染。既能达到长期贮藏种质的目的，又能维持藻种的活性，是微藻科研工作者努力的方向之一。
[0003]目前微藻保存技术主要包括：继代保存法、超低温保存法以及固定化保存法等。继代保存法简单易行、设备简单，可适用于所有藻种的保存，但是保存时间短，通常只有2
‑
3周的保存时间，并且需要频繁继代，耗时耗力且增加了污染藻种的概率。超低温保存法可长期保存藻种，最大限度地减少染菌的可能性，但是该方法需要引入防冻剂等化学助剂，并且需要用到冷冻机等设备，使其因保存成本等原因而受到限制。固定化保存法是将游离细胞包埋在多糖或多聚化合物形成的网状结构中，在无菌环境下培养，因固定载体的存在，藻种的代谢过程受到束缚，从而减缓了细胞生长分裂的速度，导致微藻生长速度缓慢。
[0004]固定化保存法可以在常温或者中低温下实现对藻种的中期保存，且对仪器设备的要求比较低，能在一般的微藻实验室进行。但是许多相关资料显示，并非所有的微藻都适合固定化保存，并且某种固定化方法只适用一定种类的微藻，对同一种固定化方法，不同种类的微藻会有不同的反应，每种微藻对固定化后的生产速率都不同；例如马志珍和张继红对12种海洋微藻固定化保种培养试验的结果表明，微型小球藻、朱氏四片藻等藻种的存活时间超过1年；蓝藻门的聚球藻红色品系生长缓慢，存活时间低于3个月；而红胞藻固定化不能生长。因此，对于不同种类的微藻的保存方法，需要进行更为深入、广泛的研究。

技术实现思路

[0005]为了解决上述技术问题，本申请提供一种微囊藻的固定化保存方法及恢复培养方法。
[0006]第一方面，本申请提供一种微囊藻的固定化保存方法，采用如下的技术方案：
[0007]一种微囊藻的固定化保存方法，包括如下步骤：
[0008]固定化凝胶的制备：将水溶性高分子固定剂溶于水中，加入氯化钠后，搅拌均匀，得到固定化凝胶备用；
[0009]微囊藻浓缩液的制备：将微囊藻藻液经过浓缩后，得到微囊藻浓缩液；
[0010]胶
‑
藻混合液的制备：将微囊藻浓缩液与固定化凝胶以1:5
‑
10的体积比混合均匀，得到胶
‑
藻混合液；
[0011]固定化胶珠的制备：将胶
‑
藻混合液挤入钙离子的水溶液中，得到固定化胶珠；将固定化胶珠经过洗涤后，低温保存即可。
[0012]通过采用上述技术方案，本申请的胶
‑
藻混合液是采用微囊藻浓缩液与固定化凝胶混合制得，相较于直接使用微囊藻藻液，采用微囊藻浓缩液制备获得的胶珠中的藻细胞密度高，可以延长胶珠的保存时间，缩短恢复再培养的周期；并且，还可以降低胶
‑
藻混合液中微囊藻浓缩液的用量，使用少量的微囊藻浓缩液即可获得更多份的胶珠，从而降低了生产成本。
[0013]可选的，所述水溶性高分子固定剂、氯化钠以及水的重量比为2
‑
5:1
‑
3:100。
[0014]可选的，所述水溶性高分子固定剂包括藻酸盐、琼脂、琼脂糖、角叉藻聚糖、明胶、聚丙烯酰胺中的一种。
[0015]优选的，所述水溶性高分子固定剂为海藻酸钠。
[0016]可选的，所述微囊藻藻液采用如下方法进行浓缩处理：将微囊藻藻液在4000
‑
6000r/min的速度下离心10
‑
20min，弃去上清液，得到微囊藻浓缩液。
[0017][0018]通过采用上述技术方案，本申请使用离心的方式进行浓缩藻液，不需要使用絮凝剂等添加剂，也不需要使用渗析膜、透析膜等昂贵的材料，可以大大降低生产成本。
[0019]可选的，所述微囊藻藻液采用如下方法制备：将微囊藻接种于BG11
[0020]培养基中，在温度为23
‑
25℃、光照为60
‑
70μmol
·
m
‑2·
s
‑1、光照周期为10
‑
16h/d的条件下，培养10
‑
14天，得到微囊藻藻液。
[0021]可选的，所述微囊藻与BG11培养基的体积比为1:8
‑
12。
[0022]可选的，所述钙离子的水溶液为浓度为2wt％的氯化钙的水溶液。
[0023]第二方面，本申请提供一种微囊藻固定化胶珠的恢复培养方法，采用如下的技术方案：
[0024][0025]一种微囊藻固定化胶珠的恢复培养方法，包括如下步骤：
[0026]将固定化胶珠与柠檬酸盐的水溶液混合，完全溶解后，加入BG11培养基，离心后，对藻液进行洗涤；
[0027][0028]将洗涤后的藻液加入BG11培养基中静置，使藻液澄清；取澄清后的上清藻液，可进行再培养。
[0029]可选的，所述固定化胶珠(质量g)与柠檬酸盐的水溶液(体积mL)的用量比为1:15
‑
25。
[0030]可选的，所述柠檬酸盐的水溶液的浓度为3
‑
5wt％。
[0031]综上所述，本申请具有以下有益效果：
[0032]1.本申请的胶
‑
藻混合液是采用微囊藻浓缩液与固定化凝胶混合制得，相较于直接使用微囊藻藻液，采用微囊藻浓缩液制备获得的胶珠中的藻细胞密度高，可以延长胶珠的保存时间，缩短恢复再培养的周期；并且，还可以降低胶
‑
藻混合液中微囊藻浓缩液的用量，使用少量的微囊藻浓缩液即可获得更多份的胶珠，从而降低了生产成本。
[0033]2.采用本申请的方法制备的微囊藻胶珠的可保存6个月以上，在解除固定化后的微囊藻的活化复苏快，在恢复再培养的3
‑
5天内就能进行快速生长阶段，并且对于产毒微囊藻来说，在其固定化保存前后，其代谢产生的毒素种类及含量变化较小，说明本申请的固定
化保存方法可以较好的保持微囊藻的活性。
附图说明
[0034]图1是实验组2的微囊藻恢复生长后的藻细胞密度曲线图。
[0035]图2是实验组4的微囊藻恢复生长后的藻细胞密度曲线图。
具体实施方式
[0036]下面结合附图和实施例对本申请作进一步的描述。
[0037]实施例
[0038]实施例1：
[0039]实施例中所用的部分实验材料如下所示，除特别说明的实验材料，均可通过时候获得。
[0040]1.实验材料：
[0041]1.1微囊藻：微囊藻购自中国科学院淡水藻种库(Freshwater 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种微囊藻的固定化保存方法，其特征在于，包括如下步骤：固定化凝胶的制备：将水溶性高分子固定剂溶于水中，加入氯化钠后，搅拌均匀，得到固定化凝胶备用；微囊藻浓缩液的制备：将微囊藻藻液经过浓缩后，得到微囊藻浓缩液；胶
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藻混合液的制备：将微囊藻浓缩液与固定化凝胶以1:5
‑
10的体积比混合均匀，得到胶
‑
藻混合液；固定化胶珠的制备：将胶
‑
藻混合液挤入钙离子的水溶液中，到固定化胶珠；将固定化胶珠经过洗涤后，低温保存即可。2.根据权利要求1所述的一种微囊藻的固定化保存方法，其特征在于，所述水溶性高分子固定剂、氯化钠以及水的重量比为2
‑
5:1
‑
3:100。3.根据权利要求1所述的一种微囊藻的固定化保存方法，其特征在于，所述水溶性高分子固定剂包括藻酸盐、琼脂、琼脂糖、角叉藻聚糖、明胶、聚丙烯酰胺中的一种。4.根据权利要求1所述的一种微囊藻的固定化保存方法，其特征在于，所述微囊藻藻液采用如下方法进行浓缩处理：将微囊藻藻液在4000
‑
6000r/min的速度下离心10
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20min，弃去上清液，得到微囊藻浓缩液。5.根据权利要求4所述的一种微囊藻的固定化保存方法，其特征在于，所述微囊藻藻液...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘红兵，于秋香，董雪怡，高伟，
申请(专利权)人：青岛普瑞邦生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：