人AURKB基因在制备抗肿瘤药物中的用途制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及人AURKB基因在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明专利技术通过构建了人AURKB基因小分子干扰RNA、人AURKB基因干扰核酸构建体、人AURKB基因干扰慢病毒并公开了它们在制备抗肿瘤药物的用途。提供shRNA或者包含该shRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。在肿瘤治疗中具有重要意义。在肿瘤治疗中具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
人AURKB基因在制备抗肿瘤药物中的用途


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及人AURKB基因在制备抗肿瘤药物中的用途。

技术介绍

[0002]食管癌，包括食管腺癌(EAC)和食管鳞状细胞癌(ESCC)是严重威胁人类健康的恶性肿瘤。食道癌是全球第七大常见癌症，ESCC占食道癌的90％以上，由于缺乏有效的诊断和治疗策略，晚期被诊断出来食道癌的具有高死亡率。
[0003]极光激酶(AURKs)是由基因家族中的三个成员组成的蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶
‑
极光激酶A(AURKA)、极光激酶B(AURKB)和极光激酶C(AURKC)。AURKA主要参与中心体成熟、分离和双极纺锤体组装，而AURKC主要参与哺乳动物细胞有丝分裂期间染色体。AURKB，也称为AIM
‑
1或Stk
‑
5，与内着丝粒蛋白(INCENP)、Survivin、Borealin/Dasra和其他蛋白质形成染色体复合体(CPC)。
[0004]目前，未见关于AURKB基因在制备抗食管癌药物中的用途的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供人AURKB基因在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：
[0007]抑制人AURKB基因的shRNA在制备抗肿瘤药物中的用途。
[0008]抑制人AURKB基因的shRNA在制备抗食管癌药物中的用途。
[0009]以上用途中，所述shRNA序列为：
[0010]ShRNA1
‑
F：5
’‑
GATCC GGAGGAGGATCTACTTGATTC TTCAAGAGA GAATCAAGTAGATCCTCCTCC TTTTTG
‑3’
；
[0011]ShRNA1
‑
R：5
’‑
AATTCAAAAA GGAGGAGGATCTACTTGATTC TCTCTTGAA GAATCAAGTAGATCCTCCTCC G
‑3’
；
[0012]或
[0013]ShRNA2
‑
F：5
’‑
GATCC GCAGAAGAGCTGCACATTTGA TTCAAGAGA TCAAATGTGCAGCTCTTCTGC TTTTTG
‑3’
；
[0014]ShRNA2
‑
R：5
’‑
AATTCAAAAA GCAGAAGAGCTGCACATTTGA TCTCTTGAATCAAATGTGCAGCTCTTCTGC G
‑3’
；
[0015]或
[0016]ShRNA3
‑
F：5
’‑
GATCC GCATTGGAGTGCTTTGCTATG TTCAAGAGA CATAGCAAAGCACTCCAATGC TTTTTG
‑3’
；
[0017]ShRNA3
‑
R：5
’‑
AATTCAAAAA GCATTGGAGTGCTTTGCTATG TCTCTTGAA CATAGCAAAGCACTCCAATGC G
‑3’
。
[0018]本专利技术还涉及抗食管癌药物的制备方法，包括以下步骤，从Genbank中调取人AURKB基因序列；预测多个shRNA靶点；
[0019]筛选shRNA靶点，在所选shRNA靶点序列中添加环状序列，得到针对AURKB基因的有效的shRNA序列；
[0020]根据shRNA序列，设计并合成两端含酶切位点的双链DNA寡核苷酸序列；
[0021]慢病毒载体双酶切后与双链DNA双链DNA寡核苷酸序列连接，构建表达AURKB基因shRNA序列的RNAi穿梭质粒；
[0022]将RNAi穿梭质粒转化至感受态细胞，进行克隆；
[0023]将RNAi穿梭质粒和慢病毒包装需要的辅助载体共转染人胚肾细胞293T，产生重组慢病毒颗粒。
[0024]以上抗食管癌药物的制备方法中，所述慢病毒载体选自pLVX
‑
shRNA2
‑
Puro。
[0025]本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过构建了人AURKB基因小分子干扰RNA、人AURKB基因干扰核酸构建体、人AURKB基因干扰慢病毒并公开了它们在制备抗肿瘤药物的用途。提供shRNA或者包含该shRNA序列的核酸构建体、慢病毒能够特异性抑制人基因的表达，尤其是慢病毒，能够高效侵染靶细胞，高效率地抑制靶细胞中基因的表达，进而抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。
附图说明
[0026]图1为人食管癌细胞KYSE
‑
150在制得的慢病毒感染下AURKB表达水平变化图；
[0027]图2为人食管癌细胞TE
‑
1在制得的慢病毒感染下AURKB表达水平变化图；
[0028]图3为人食管癌细胞KYSE
‑
150在制得的慢病毒感染下的细胞增殖能力变化图；
[0029]图4为人食管癌细胞TE
‑
1在制得的慢病毒感染下的细胞增殖能力变化图；
[0030]图5为人食管癌细胞KYSE
‑
150在制得的慢病毒感染下的细胞凋亡水平变化图；
[0031]图6为人食管癌细胞TE
‑
1在制得的慢病毒感染下的细胞凋亡水平变化图。
具体实施方式
[0032]为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。
[0033]研究表明，CPC在有丝分裂中起核心作用，介导染色体
‑
微管附着错误的纠正、纺锤体组装激活以及染色体分离和细胞分裂的调节。AURKB定位于着丝粒上，从前期到中期
‑
期末转变，主要参与G2的细胞分裂转向M期。先前的研究表明，AURKB可以磷酸化丝氨酸10(H3S10)和丝氨酸28(H3S28)上的组蛋白H3，这与有丝分裂过程中染色体数量稳定性和染色质凝聚有关。
[0034]RNA干扰(RNAinterference，RNAi)是由双链RNA介导的细胞中mRNA的特异性降解，进而导致目的基因表达被抑制或沉默的一种自然过程。RNAi技术主要包括小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)、小发夹RNA(short hairpin RNA，shRNA)和双功能shRNA(bi
‑
functional shRNA)。shRNA由两个互补的19
‑
22bp的RNA序列和一个4
‑
11nt的茎环(loop)组成，茎环结构的作用是分隔两个序列。shRNA能够整合基因组，当发生转录之后，shRN本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抑制人AURKB基因的shRNA在制备抗肿瘤药物中的用途。2.抑制人AURKB基因的shRNA在制备抗食管癌药物中的用途。3.权利要求1
‑
2任一项所述用途，所述shRNA序列为：ShRNA1
‑
F：5
’‑
GATCC GGAGGAGGATCTACTTGATTC TTCAAGAGA GAATCAAGTAGATCCTCCTCC TTTTTG
‑3’
；ShRNA1
‑
R：5
’‑
AATTCAAAAA GGAGGAGGATCTACTTGATTC TCTCTTGAA GAATCAAGTAGATCCTCCTCC G
‑3’
；或ShRNA2
‑
F：5
’‑
GATCC GCAGAAGAGCTGCACATTTGATTCAAGAGA TCAAATGTGCAGCTCTTCTGC TTTTTG
‑3’
；ShRNA2
‑
R：5
’‑
AATTCAAAAA GCAGAAGAGCTGCACATTTGA TCTCTTGAATCAAATGTGCAGCTCTTCTGC G
‑3’
；或ShRNA3...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈加守，林佳珊，郑进萍，邱德辉，谢翔峰，
申请(专利权)人：福州载基生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：